Способ получения жидкой контрольной сыворотки

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

09) (11) (я) 4 G 01 N 33/48, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н д BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3855377/28-14 (22) 10 .1 2. 84 (46) 30.07.86. Бюл, № - 28 (71) Ставропольский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) О.M. Головченко и С.А.Угримов (53) 615. 373 (088. 8) (56) Патент США ¹ 3876375, кл. С 01 И 33/ 16, 1980, (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИДКОЙ

КОНТРОЛЬНОЙ СЬЗОРОТКИ, включающий концентрацию сыворотки, добавление стабилизаторов, стерилизацию и аттестацию компонентов, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью увеличения сроков хранения, сыворотку концентрируют путем ультрафильтрации на ацетатцеллюлозных пленках с диаметром пор 300-500 А под давлением

0,5-0;6 MIa при рН 6,8-8,5 и постоянном перемешивании.

1 2477 51 2

4

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностическим препаратам крови, и может быть использо-! вано для приготовления контрольного материала, необходимого для оценки качества выполнения биохимических анализов.

Цель изобретения — увеличение- сроков хранения за счет концентрирования нативной.сыворотки путем ультрафильтрации на ацетатцеллклозных планках.

Пример 1. Берут 1 л нативной донорской человеческой сыворотки рН 6,8-8,5, заполняют ультрафильтрациойную ячейку прибора ФМ02-1000, дно которого закрыто ацетатцеплюлоза ной пленкой диаметром пор 500 А и фильтруют при постоянном перемешивании и давлении 0,6 МПа до тех пор, пока объем сыворотки не достигнет

0,7 л ° Затем в концентрат .сыворотки добавляют в качестве консерванта хлороформ и отстаивают. в течение суток при 2-4 С дпя выпадения в осадок лабильных белков. Далее осадок удаляют, а надосадочную жидкость доводят до исходного объема (1 л) добавлением гликолей,. например этиленгликоля, рН корректируют 5%-ным Н 80„ до 7,0-8,2, В связи с тем, что в фильтрат удаляются водорастворимые низкомолекулярные вещества таких тестируемых компонентов как мочевина, глюкоза, креатинин, натрий, калий, их содержание доводят до физиологической нормы добавлением в необходимом количестве.

Полученную сыворотку стерилизуют, разливают во флаконы и укупоривают известным способом.:

Аттестацию компонентos проводят в исследованиях на сходимость, воспроизводимость и правильность при участии ре@ерентной лаборатории.

Определение концентраций тестируемых компонентов: общего белка; альбумина глюкозы; мочевины; креатинина; натрия „ калия; хлоридов; железа„ аланинаминотрансферазы; аспартатаминотрансферазы; о -амилазы;, проводят по известным унифицированным методикам.

Пример 2. Способ получения жидкой контрольной сыворотки с патологическим содержанием компонентов осуществляют по примеру 1.за исключением того, что добавки к некото1 рым тестируемым компонентам вводят до следующего. количественного содержания, вес :

5 Мочевина . 0,050 — 0,12

Глюкоза .. . 0,12 — 0,40

Креатинин 0,0015 - 0,0060

Хлорид натрия (по натрию) 0,40 — 0,60

Сульфат калия (по калию) 0,025 - 0,060

Пример 3. Способ получения жидкой контрольной сыворотки осуществляют по примеру 1 за исключением того, что в качестве нативной сыворотки используют гипериммунную

:лошадиную сыворотку (отбракованную из-за низкого содержания антител), которую перед ультрафильтрацией раз2О водят 0.,6%-ным раствором NaC1 в соотношении i 0,2-0,3, Пример 4, Способ получения жидкой контрольной, сыворотки осуществляют по примеру 1 за исключе25 нием того, что в качестве нативной сыворотки используют человеческую плазму, непригодную для трансфузии из-за. высокого содержания билирубина илИ -с истекшим сроком годности, >О из которой удаляют фибрин, а полученную сыворотку перед ультрафильтрацией разводят 0,6 -ным NaC1 в соотношении 1:0,2-0,3.

IIocne статистической обработки

35 всех результатов на правильность и воспроизводимость по тестируемым компонентам составляют паспорт на каждую серию жидкой контрольной сыворотки.

4р В табл. 1 представлено количест. венное содержание компонентов в жид кой контрольной сыворотке в различных сериях, I

Контроль количественного содер=, 45 жания тестируемых компонентов жидких контрольных сывороток, полученных предлагаемым способом, проводили сразу же после приготовления серии и через 1 5 r хранения при +4 С.

В табл,2 представлены данные стабильности одной из серий жидких .че-, ловеческих контрольных сывороток. ..Как видно из табл.2, сыворотка, 1 полученная предлагаемым способом, 55 сохраняет стабильность физико-химических свойств и концентраций тестируемых компонентов в течение 1,5 лет хранения.

Таблица I

Область концентраций компонентов физиоло= гической нормы

Состав жидкой сыв оротки, в ес . Ж

Область концентраций компонентов патологии

6,0 - 8,5 4,0 — 8,5

Общий белок

3,0 -5,5

1,Π— 5,5

Альбумин

0,06 — О, 12

О, 05 — 0,40 Глюкоза.0,01 5 — 0,050 0,005 — О, 120

Мочевина

0 — 0,0060

0,20 — 0.,60

0,008 — 0,060 (5О-400) 10

О, 0005 — 0,0015

Креатинин

Натрий

0,30 — 0.,40

0,014 — 0,025

Калий

Железо

Хлориды (70-180) 10

0,34 — 0,40

0,28 — .0,63

Холестерин о -Амилаза, 0,010 . — 0,024

16 — 30

0,040 — 0,300

0 — 60 мг/ч .мл

Аланинамин о трансфераза NE/л

1.0 - 60

5-20

Аспартатаминотрансферазà ME/л

5-. 30

25 -35

10 — 150

25 — 35 .

Остальное )> Гликоль Сыворотка

Остал ьно е +> Т аблица 2

5,50 0,25

3,20 + 0,20

5,40 + 0,20

Общий белок

3,10 . 0,20

Альбумин

3 1247751 4 .Таким образом, способ получения .честв выполнения биохимических исжидких контрольных сывороток по срав- следований в фотометрическом микронению с существующим имеет следую- анализе значительно повысит точщие преимущества: возможность полу- ность определения тестируемых комчения жидкой прозрачной контрольной 5 понентов в клинико-диагностических сыворотки с гарантией стабильности лабораториях страны; упрощение техколичественного содержания тестируе- нологического процесса (исключаетмых компонентов в течение 1,5 лет, : ся операция лиофилизации сывороприменение которой для оценки ка- ток).

1247751

Продолжение табл.2

Глюкоза

Мочевина

Креатинин

Натрий

0,030 0,002

Калий (101+13)10

Железо

0,398 + 0,006

0,073 + 0,005

Хлориды

Холестерин

0,075 + 0,004

28,0 + 0,8 мг/ч мл

28,5 0,9 с(-Амилаз а, Аланинаминотрансфераза, МЕ/л

18+3

17 - 3

Аспартатаминотрансфераза, .МЕ/л

15,0+ 3

14,5+ 2

7,3+ 0,1

7,3+0,1 рН

Мутность, оптическая плотность 0,04

0,08 + 0,02

+ 0,02

Составитель Л.Бонарцев

Корректор О.Луговая

Заказ 4118/43 Тираж 778 .Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r Ужгород, ул. Проектная, 4

0,180 + 0,014

0,043 0,003

0,0027 + 0,0002

0,301 0,010

0,028 0,002 (104+12) 10

0,400 + 0,007

Редактор В.Ковтун Техред Н.Бонкало

0,175 + 0,015

0,042 + 0,003

0,0026 + 0,0002

0,306 + 0,01 0