Способ определения скорости реакции агглютинации
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2l) 3679327/28-14 (22) 27. 12.83 (46) 23.08.86. Бюл. № 31 (7l ) Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов АН СССР и Саратовский ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. H. Г. Чернышевского (72) С. Ю. Щеголев, Н. Н. Семак, В. В. Котусов и В. В. Игнатов (53) 615.375 (088.8) (56) Никитин В. М. Справочник методов иммунологии. Кишинев, 1982. с. 180.
Thamhi-Dorai D. et al. Bioqhem. Biophus.
Кев. Comm, 1982, 104, № 1l, р. 141.
„„Я0„„1251908 (5t) 4 А 61 39 00 G Ol N 33 555 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СКОРОСТИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ, включащий добавление к суспензии клеток агглютинина, инкубацию смеси с измерением оптической плотности суспензии до и после инкубации, oT,гичающийся тем, что, с целью повышения точности способа, оптическую плотность измеряют последовательно при двух значениях длины волны света в интервале 450 — 1100 нм и по отношению этих величин времени инкубации определяют скорость агглютинации.
1251908 (1. >6р« I < ни» (>(H()«ttT(я к ме:(ицине, (l
Ил «ННО К 3<Л<Л>УНОГ!О! ИИ, И МОжЕт 6ЫтЬ ИСн<, II> «)нино ири оирел«.ц нии грчнновой и !
sH (ов>1! Ирин;!д,!ежно(пи крови, H такж» .(ля !
ILL«I« l(>H;1tlHH антик» нон поверхности чикро(> I l l !пl и < xt < > 13. (l» . Il> и )о6рет«ния иовышени» I <> !Но«но»О6;3 с о,(новреченным ()Kp(IHI» lilt(ч н(>«x!L lilt 3 н (>гl и s (I
111!Il < иос(>6< ()Hp». д» l» ния скор(кти реакltltll к,>«! < IH(>11 агглютин;)ции, включак)щем l<>t>;El!.IL IIH(к су сиен !и и клеток аг! л ютин ии;1, инку6ацин> сч«си с измерением ()НТН-!
»».КОИ H,t<Ë H!>«TÈ СX» ЦЕНЗИИ ДО и Н(ЦЛЕ инкл6;3ции, онтическун> плотность измеP 51 H ) T Н О»Г Г1 «,(t O H (I T (.XЗ Ь H O H P H Д В У Х 3 Н а Ч (. Н И Я Х
;1,! HEl!>l Is<>.TItû света в ин Г» рвале 450 1100 нм, ;3 сю>рос гь р(;<ниии агг. >н>ти)я ции (н>ределяE< II(> фОРЧУ,I( з7
I (() <, ()) /1((Ь 7.< ) ! << ((> 3, ()," ) / (» (i.,r i 1 ) (1 )
1,1(()1 И () оптическая плотность сусцен<ии, измеряемая нри значениНх д.lit!Et>l волны соответственtI(> /.1 и t, до инкмбации: (); 1t () .. Он гиче» h;tÿ н.ц>т!Нкть суснен3 И И, ИЗМ<. Ря» М(151 IIPH $ KHBHHIII>lХ
H()L I(и нку6а ции;
IspL л<я инку6!3ции ., 1.1Н си» I» ч н< иигм< нтировннных клеток
<>51!,I!I IIIII)Ix,1иси»рсионн11х сред интер-!,> 1;!и I!<>.!It Ныбиj)iEH)Г р(>В1311л3 150 ,.<я ри роцитов 7,)О 1100 нч. . ) (() (!<> (К I I! I S l I t >l И > Ц 1 И S Nt «Н (H H H h () а ф ф И!!kl< н<;< 1;t
lI<.
I<> (— ) ()(!! =-- (Ц j) (д )
1. !< р;!я явиси! <>I ра:)л!«ра и ll()hазаг»ля ! II>LL !<»1,1» НИ Я I;l»ти ц, El(> HL 3;1 висит От их K<)EIII I >;st! IIè. I lри у н»личении р(tзмер(i я(òèö
Оитн Ц СК >rl It.t(>!HΫÃt> КЛ»Л(>ННЫХ СЛСН H SHé
< I HE!<>H! Is(.IH !иной, относительно слабее
s 3I3Hi sll!lL и <)I д,tHHI>l волны с(3»та. 1lоаточу
>1; оц»с»i« ll г,!н>гин;)ции кл T<)K Il(lp(>ч«>р и» лц>ньlllitL тс5. . (Il<>«)6 <н Л Hl»(<вля»п(51 сгц дующим ()6-! > is < > л
К р;IL (ьч)рл;>гглн>тинина в 0,15 М раствор» . ;3(.I .(О6;>в, lянп так(п ко.!ичество
>(>
h<)fsl!L Hl рир<нянной (N поря EK(3 10 см )
h. lL О I H()kl Н.SB(L kt. tT() Нс! (сl. l t>tt()L :3 Нс> Ч(НИ»
ОН и <(< K(>11 l1. l()T H()L ТИ II(). I ×»ÍÍÎÈ СЛ СHt. HS kt u h . 1» I() h f1<. 11 р L <3 1>lilt (3 (T О, / в О B C (ч д И (3 н с> з о-!
Н длин волн. Культура клеток нредвариТ LX 11>11() О I,"1 Ы В а Ю 1 ф И.S И ОЛ О Г И Ч(. С К И Л1 Р (3 С Т ЕЗОроч,;3 аритр >Инты обра6атыванл тринсином. ()иг!<ч(склн> нл<лность и:<меряк>т через каж,1l>t»: 10 л)ин B т» ц EIHL Bp» мени инку<;» < .I. L<>L;<влянн!Г«го 20 60 л!ин. (1«р д и:3Л
< (P (. 1!H «11 L X «H (Ef B H H K. I (l () K l l » P» Ч» I I I H H H H) T В т» ц ни«, 30 00 с ts»T(>ktxktts tflkt»ч кн)н»ты с
h(I«T<>(l нои 13
< 11(К1 РО(!)ОТОЛ1» I P(l \ 13.lkl K(>.l<>Pkt t>t(ГP(3 X
Ф:-)К 5(>, Ф:.)К 60, (:Ф 2(> и н (lри k«иог!ь)О13!>Ни и сн» ктрофо1 оч(I рон (.Ф 4, (:Ф 26 ц»л» (оо6ра sl«) и» ред фотоалеченl()M II()!st»ù;пь крлl .1ук) диафрагмл (отверс t è«ì >tè;1мс 1 рОч 2 3 л1 ч,(1я IIH ж(и ия ! (а (() (() Е KT d М а (10« 1 . 1 О ВО! О Р сl » С «kt Н И и <. В (>Т а . () И ЫTû проводят и стандартныx кн>нетisx толщиной 3, 5, 10, 30 и 50 л(м, которыми ко 1ис!«кT) H)T«H л казан ны» Hpkt6(>(3t>l (,. IH контро.!я
lip()B<)дят и 3мерения суснензий, полученных
lip!I T(х ж» 3 слониях и О, I :»Ч N;t(. i 6(3 (3ГГ, I H ) I II H 11 H (3, 1l() ре <ульм< г;<ч изч» р< ни и <)ll I è÷(ñh()H и,)(>1 НО» 1 И H(t )Т!3 и (3 Х II IS K <(F>it I tkt ft <> I I p» !» .Тик>Т
I1сlP(lМ()P
3<>
> !«(1),,(), ) (<><, .(,! <, 100 3 " >с (3)
lip(.,(с!;>вляннций с()t)()H долн> а! р«гHI()B к.!»T()K, О6ра:3овавшихся к,(3« р ОО Ь(>(E(1 h, l«T()ЧНОИ ВЗВ((И,(1() H(3 Ii3Л(3 а! Г.ТК)
3инации. EIHT»pBit.l в(я ч«ни (, kt< Il().!ü <л«чый в формул» (1), и <)()TB(т I tSxH)Iltkt» «л)у
3начени«E и л = — р онр»д«.IHH) I Il<) р«зульг;3г г;>ч îit EIKH дави< ил<<к I I 1 <л в(н ч(ни инку6!)ции и выбирают равныл1 ч;>)сич;!ль>(ой
3Р !
3»личиш нреч kill()! <> ин «рва 1(l, 13 к<п< роч и;>рнметр р Iipitl ги<цски пl)(>lt(>pll!I<)tl(t, Hpt лц ни инкуt)(tциu.
/1)>и.<(< р . 11ссг!»;(у H) I р«;t ê ННН>;31 кl H) п tt(lции чикРооны. h,l» )ок Лх(>HPIT IIII!Itt
1» цк» Кр. 7 Il(),l,t»53«! !<и«л1 лек! ин;3 Illll(ни!и !.
j3 качес 1 ьч ир» и;>р;33;! л«к! Ин;1 и Il().lü «H) I hстР(3кI мЯI кои SIP<>ts<>é 11IH(ниt(t! (.;EP;t! ОвL к;>я -52, полу и нныи )ксгр;!гиj><>tsilllH(. м муки (р(, (н(! о 3(очол 1 0,0() Nl1(I. h(>HI!» Н1р!>Ння
4Г< 6«. Iк;l 0,<) ХIГ, лl,l. IX р(IСTB(>pч,1(>н!H13;I B
p;s <н»д(нии 1: 32 до6нвлянл кон>ц !п риров;>и(> нм H) ((л 1 0 с м ) B 3 t3<. с1> к. I» Гок Is K(). l èЧ» < "ÒIS(,,I()< 1 it < ОЧНОМ, 1.1Я ll(), 1» I» Н И и 3 Н сl <)II ической Iiëîãí<> 1H сx«tl»н.!HIE >ц 6<>.I(« 0,7 во H< L XE Bl>16p(lннол! Ли(>ии S<)tl<,t.lit!I 4 и< лн. (1 чер»ния lрово,(яг н; 1»:г(о<1<> оч» гра. (.Ф 4А или (,Ф 26 и кн>н«т;)л с p!! С(ТО5lEI kt(л1 л!» +;.1 > С 1» El к, l ч!1 10 ч л1, II() л<» lll(351 II(. р»д файлов«!(менп>ч ди;)фр;3! л<л L крч!, !ЫМ Îl в» Р(П kl» М ДИНЛ(ЕтРОЧ 3 МЧ.,1Л>l ИСh.!Í> I L l 3 и Я Уф (1> (к т (3 L (., 1 и л1 (H T (3 I I f t I t к, н> 3 О I I l 1>l х 3 I P \ г;пон кннц <«микрооргани <чачи встрktxktВс)Н>т tl(Ы, 1 ИЗЧ(РЕНИЯЧИ B ГL Ц НИ(, 30 С (.)Нгич«скуí> 1<)IH()(. гь изч(ряк>г ч;3,1,!иН;3Х l3() lH 450 и 620 нм. 11() р»:<л.(ьт;31;(л< и 3чер»ний и оц«нки Зависим(кти р О1 Вр«M«f1 H и нкл 6(! ц!3 и ()Il p(T(! 51K>T lt HT(pit(3, I It()< — чени (=- 20 чин и рассчитыван>т скорость ре(tкции (tt I,IH>LH 1;)циH л ===- 3,!)- - и,, 3 чнн l 1 ()»1) О р л! у, l ((1 ) . 1251908 4 р 7 Время, мин 0,217 0 0,39 1,86 1,82 0,40 0,22<4 30 1,79 0 38 0 217 н<2 1,73 039 0,226 60 1,61 0,38 8-(30 0,37 0,23 1,52 (.ос< ани«.<н 11 Ьашкаен Рсдактор О. К)рконенкая 1ехр«11 Н< рес Коррек< р Ч Ilожо Вака.ч 4555, 5 Тиран< б«<< II<< lllH< H<)< BHHHJlH Государственного комитета (.(.(Р по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д 4 5 Филиал ППП «Патент», г. Ужгород. wë, Проект((ая, 4 В таблице приведена зависимость от(тических и структурных параметров суспензий Л;((1вр1г111(пш hrasilense sp. 7 от времени инкубации с экстрактом пшеницы, содержащим лс ктин. (лчособ дает информацию о ранних специфичных стадиях реакции агглютинации, когда эффект седиментации еще не наблюдается. Время считывания результатов реакции сокращается до 20 40 мин. Г1овьпшение точности способа иллюстрируется следукнцим образом. Изучена лектиновая активность сортов пшеницы к эритроцитам кролика. Скорость р о реакции агглютинации (V= — - ч где t.ÌÈH t= 20 мин) для сортов пшеницы Саратовская-52, Саратовская-29 и (.аратовская-41 равна соответственно 4,7; 1,8 и 0,3. Одновременное определение скорости реакции агглютинации при однолу и вой фотометрии о времени снижения сн1тической плотности на 50% от первоначаьной в(личины (1= 150 мин) дало значение 0,008 для Всрх трех сортов пшеницы, т.е. точность метода однолучевой фотометрии не пс>зволяет выявить различия в содержании лектина. Таким образом, использование предлагаемого способа определения скорости рсакции клеточной агглютинации позволяет с высокой точностью количественно охарактеризо15 вать наиболее ранние и специфичны« « адин реакции агглютинации и сократить в 3 5 раз время анализа.
