Способ определения активности комплексных соединений гепарина в плазме крови

 

Изобретение относится к медицине , может быть применено в биохимии крови для определения функционального состояния противосвертывающей системы организма. Цель изобретения повышение чувствительности и точности способа путем использования фибрин-мономера и ингибитора трипсина из соевых бобов в определенных концентрациях . Для этого смешивают раствор фибрин-мономера в 0,125%-ной уксусной кислоте и боратный буфер Палит .ча рН 7,5-7,6. Смесь в пробирках ставят в термостат при 37 С на 1 ч для застывания фибриновых пленок. Плазму крови делят на 2 части, одну из которых инкубируют с раствором ингибитора трипсина из соевых бобов в течение 10-15 мин,при 37°С в конечной концентрации ингибитора 0,10 ,2%. Затем смесь плазмы с ингибитором вносят в фибриновую пленку и проводят инкубацию пластин с плазмой в термостате в течение 1,5 ч (проба Б). Проба А готовится аналогично пробе Б, но не инкубируется в термостате с ингибитором трипсина (проба I до инкубации). В пробе А (до инкубации ) и в пробе Б (после инкубации) (Л отжимают фибриновые сгустки, пpo aIвают охлажденным 0,85/о-ным раствором NaCl, проводят гидролиз белка в 0,1N NaOH. Затем определяют уровень белка в пробах. Получают процент неферментативного фибринолиза комплексов гепарина , равный 66%.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН, 4 А1

GQ Я 0 (11) (бц 4 G 01 N 33/48

i ! 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К A BTOPCHOlVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3931051/28 — 14 (22) 17.07.85 (46) 30.11.86. Бюл. N 44 (71) МГУ им. М.В.Ломоносова (72) Б.А.Кудряшов и Л.А.Ляпина (53) 615.361 ° 36(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 63955.1, кл . G 01 N 33/48, !978. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ГЕПАРИНА

В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине„ может быть применено в биохимии крови для определения функционального состояния противосвертывающей системы организма. Цель изобретения повышение чувствительности и точности способа путем использования фибрин-мономера и ингибитора трипсина из соевых бобов в определенных концентрациях. Для этого смешивают раствор фибрин-мономера в 0,125Х-ной уксусной кислоте и боратный буфер Палитча рН 7,5-7,6. Смесь в пробирках о ставят в термостат при 37 С на 1 ч для застывания фибриновых пленок.

Плазму крови делят на 2 части, одну из которых инкубируют с раствором ингибитора трипсина из соевых бобов в течение 10-15 мин при 37 С в конечной концентрации ингибитора О, t

0,27.. Затем смесь плазмы с ингибитором вносят в фибриновую пленку и проводят инкубацию пластин с плазмой в термостате в течение 1,5 ч (проба Б). Проба А готовится аналогично пробе Б, но не инкубируется в термостате с ингибитором трипсина (проба до инкубации). В пробе А (до инкубации) и в пробе Б (после инкубации) отжимают фибриновые сгустки, промывают охлажденным 0,85ã. ным раствором

NaC1 проводят гидролиз белка в 0,1N

Na0H. Затем определяют уровень белка в пробах. Получают процент неферментативного фибринолиза комплексов гепарина, равный 66Х.

1.2 738

ВНИИПИ,Заказ 6470/41 Тираж 778

Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии крови, и используется для определения . функционального состояния противосвертывающей системы организма. 5

Цель изобретения — повышение чувствительности и точности способа за счет использования фибрин-мономера и ингибитора трипсина из соевых бобов в определенных концентрациях. 10

Пример 1. В большие пробирки приливают по 0,2 мл раствора фибринмономера в 0,125Х-ной уксусной кислоте и 0,7 мл боратного буфера Палитча, рН 7,6, смесь в пробирках ставят 15 в термастат при 37 С на 60 мин для застывания фибриновых пленок. Плазму крови делят на две части, одну из которых инкубируют с раствором ингибитора трнпсина из соевых бобов 20 о в течение 10 мин при 37 С в конечной концентрации ингибитора в системе

О, 1Х, Затем смесь плазмы с ингибитором вносят в фибриновую пленку и проводят инкубациюпластин с плазмой в термостате при 37 С в течение 1,5 ч (проба Б) .

Проба Л готовится так же, как и проба Б, но не инкубируется в термостате с ингибитором трипсина (проба до щ0 инкубации) . В пробе Л (до инкубации) и в пробе Б (после инкубации) отжимают фибриновые сгустки, промывают охлажденным 0,857-ным раствором NaC1, затем проводят гидролиз бслка B 0,1N

Na0H, добавляя к сгустку по 2 мл щелочи и проводя кипячение проб на водяной бане в течение 10 мин. Затем определяют уровень белка в пробах на

ФЭКе с использованием реактива Фолин- 40

Чикалто или на спектрофотометре.

Например, в пробе А уровень белка в сгустке 300 мгХ, в пробе Б — 100 мг7..

Процент неферментативного фибринолиэа комплексов гепарина равен 667.

Пример 2. Все операции проводят, как в примере 1, за исключением того, что фибриновые пластинки готовят с использованием боратного буферного раствора Палитча при рН 7,5.

Далее проводят определение уровня белка. В пробе до инкубации уровень белка составляет 300 мг ., в про04 а бе после инкубации с ингибитором трипсина из соевых бобов — 100 мгХ..

В результате расчета по формуле количество комплексных соединений гепарина в пробе составляет 66Х.

Следовательно, при указанных параметрах компонентов способ может . применяться.

Пример 3. Опыт проводят, как описано в примере 1, до стадии инку-. бации плазмы с ингибитором. Плазму крови делят на две части, одну из которых инкубируют с ингибитором трипсина из соевых бобов в течение 15 мин при 37 С до конечной концентрации ингибитора в системе 0 2Х. Далее все операции проводят, как и в примере i, В результате получают с тем же образцом плазмы, что и в примере 1, следующее: в пробе Л уровень белка в сгустке 300 мгХ, в пробе Б — лизис — 100 мг .

Процент комплексных соединений гепарина равен бб .

Формула изобретения

Способ определения активности комплексных соединений гепарина.в плазме крови путем приготовления нестабилизированных фибриновых пластин, нанесения на них плазмы крови, содержащей ингибитор ферментативногo фибринолиза, последующей инкубации в физиологических условиях и определения степени фибринолиза, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и точности способа, нестабилизированные фибриновые пластины готовят из фибринмономера и боратного буферного раствора Палитча при рН 7,5-7,6, плазму крови делят на две части, одну иэ которых инкубируют с ингибитором трипсина из соевых бобов при конечной концентрации ингибитора О, 1-0,27. в течение 10-15 мин, а вторую часть используют в качестве контроля, saтем наносят плазму на пластины и измеряют степень фибринолиза по количеству белка, оставшегося после фнбринолиза.