Способ определения внутрисосудистого свертывания крови

 

Изобретение относится к медицине , в частности к исследованию крови, и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудистого свертывания крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа диагностики внутрисосудистого свертывания крови за счет отделения и количественного определения поврежденных (мацерированных) эритроцитов . Стабилизированную и разведенную физиологическим раствором кровь исследуемого больного наслаивают на раствор верографина и фиколла с плотностью 1,077. После центрифугирования содержимое пробирки разделяется на 3 слоя: верхний - разведенная физиологическим раствором плазма, лишенная клеток, средний слой - раствор фиколла - верографина, содержащий клетки крови, плотность которых меньше 1,077, нижний слой - клетки крови, имеющие плотность вьш1е 1,077. Между верхним и средним слоем образуется видимое кольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит преимущественно из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов, у больных с внутрисосудистым свертыванием крови в клеточном кольце в большом количестве обнаруживаются поврежденные эритроциты, которые отделяются и подсчитываются в камере Горяева. При внутрисосудистом свертывании крови регистрируется значительное увеличение количества поврежденных эритроцитов (в 10 и более раз) по сравнению с контролем. I (Л to СХ) СХ) аР5

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (50 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3855110/28-14 (22) 14.02.85 (46) 07.02.87. Бюл. ¹ 5 (71) Алтайский государственный медицинский институт им. Ленинского комсомола (72). З.С.Баркаган и И.В.Тамарин (53) 616-071(088.8) (56) Dacie I.V., Rewis S.M. Practical Haematology. 1963, 3 rd Churchill London. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию крови, и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудистого свертывания крови. Цель изобретения — повышение чувствительности способа диагностики внутрисосудистого свертывания крови за счет отделения и количественного определения поврежденных (мацерированных) эритроцитов. Стабилизированную и разведенную физиологическим раствором кровь ис„„SU„„1288608 д1 следуемого больного наслаивают на раствор верографина и фиколла с плотностью 1,077. После центрифугирования содержимое пробирки разделяется на

3 слоя: верхний — разведенная физиологическим раствором плазма, лишенная клеток, средний слой — раствор фиколла — верографина, содержащий клетки крови, плотность которых меньше 1,077, нижний слой — клетки крови, имеющие плотность выше 1,077. Между верхним и средним слоем образуется видимое кольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит прем имущественно из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. У больных с внутрисо- фф судистым свертыванием крови в клеточном кольце в большом количестве об- С наруживаются поврежденные эритроциты, которые отделяются и подсчитываются 2 в камере Горяева. При внутрисосудистом свертывании крови регистрируется значительное увеличение количества . у) поврежденных эритроцитов (в 10 и более раз) по сравнению с контролем.

1288608

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованию крови, и может быть использовано при лабораторной диагностике внутрисосудистого свертывания крОви. 5

Цель изобретения — повышение чувствительности способа диагностики внутрисосудистого свертывания крови за счет отделения и количественного определения поврежденных (мацерированных) эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Предварительно готовят 36 17Х-ный

15 раствор верографина и 9Е-ный раствор фиколла. Смешивают 10 частей раствора верографина с 24 частями раствора фиколла. Полученный раствор имеет плотность 1,077.

Из зоны исследуемого силиконированной иглой берут кровь и смешивают ее в силиконированной пробирке с 3,87.-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. 2 мл стабилизированной крови разводят 6 мл физиологического раствора хлорида натрия.

В силиконированную пробирку набирают 3 мл раствора фиколла-верографина, сверху, при наклонном положении пробирки (под углом 30-35 ), пипеткой осторожно наслаивают 8 мл разведенной крови. Затем пробирку центрифугируют в течение 40 мин при 400

После центрифугирования содержимое пробирки разделяется на 3 слоя: верх- 35 ний — разведенная физиологическим раствором плазма, лишенная клеток, средний слой — раствор фиколла-верографина, содержащий клетки крови, плотность которых меньше 1,077;нижний слой — клетки крови, имеющие плотность выше 1,0/7. Между верхним и средним .слоями образуется видимое кольцо из всплывших клеток с плотностью менее 1,077. У здоровых доноров клеточное кольцо состоит, преимущественно, из лимфоцитов, моноцитов и тромбоцитов. У больных с внутрисосудистым свертыванием крови в клеточном кольце.в большом количестве обнаруживаются поврежденные эритроциты.

Средний слой вместе с клеточным кольцом переносят пипеткой в другую пробирку и отмывают 6-кратным объемом физиологического раствора хлорида натрия 2 раза, затем центрифугируют в течение 10 мин при 400

Осадок ресуспендируют в 2 мл физиологического раствора хлорида натрия.

Подсчет количества эритроцитов в осадке производят в камере Горяева. Для этого 0,1 мл осадка разводят l,9 мл физиологического раствора хлорида натрия, заполняют полученным разведением камеру Горяева и подсчитывают эритроциты в 100 средних квадратах. Полученная цифра умножается на 50 10 . Результат соот6 ветствует концентрации эритроцитов в 1 л раствора. Так как объем физиологического раствора, взятого для разведения осадка, равен объему первоначально взятой крови (2 мл). то и полученное количество эритроцитов среднего слоя в растворе равно их количеству в цельной крови.

У здоровых доноров плотность эритроцитов крови колеблется в интервале l,070-1,090, но большинство эритроцитов имеет плотность 1,085+0,0025.

Количество эритроцитов, имеющих плотность меньше 1,077 и выделяющихся при центрифугировании в среднем слое и клеточном кольце, не превышает у здоровых доноров 4 10 /л крови.

У больных с внутрисосудистым свертыванием крови повреждение мембраны эритроцитов приводит к частичной потере вещества и снижению их плотности. При этом количество поврежденных эритроцитов в среднем слое и клеточном кольце возрастает и превышает этот показатель у здоровых людей в

10-100 раз.

Пример 1. Больная Д., 22 года. На фоне раннего излития околоплодных вод и длительного безводного периода наступила частичная отслойка плаценты с последующим профуэным маточным кровотечением, кровоизлияниями в местах инъекций, острой почечной и дыхательной недостаточностью. При исследовании системы гемостаза выявлены глубокая гипокоагуляция, снижение всех факторов свертывания, антитромбина-ill, плазминогена, положительные тесты паракоагуляции, тромбоцитопения. На основании всех перечисленных данных был диагностирован острый акушерский ДВС-синдром, фаза гипокоагуляции. Проведено определение фрагментированных эритроцитов известным и предлагаемым способами. Известным способом обнаружено 105 10 /л фрагментированных

1288608 4

Результаты обследования больных с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием приведены в таблице. эритроцитов, а предлагаемым — 387 х х 10 /л.

Пример 2. Вольной С., 62 года. После произведенной аденомэктомии у больного наступила анурия, затем кровотечение из дренажа, операционного шва и .из мест инъекций. При исследовании системы гемостаза выявлены гипокоагуляция, положительные тесты паракоагуляции, гипофибриноге- 1 немия, тромбоцитопения и повышение уровня продуктов деградации фибрина.

При определении фрагментированных эритроцитов обоими способами выявле3 но: предлагаемым способом 44 10 /л фрагментированных эритроцитов, известным способом фрагментация эритроцитов не выявлена. На основании клинико-лабораторных данных у больного диагностирован острый послеопера- 20

6 ционный ДВС-синдром, фаза гипокоагуляции.

Содержание эритроцитов, х .10 /л, при определении по способу известному предлагаемому

30,6

21,0

30,0

67,0

70,0

1 1.5,0

44,0

14,0

33,9

2,9

105,0

387,0

33,9

2,5

18,4

17,1

66,3

20,0

1,7

3,8

О

42,3

11,2

20,0

79,4

8,0

26,1

Из таблицы видно, что при ис. пользовании известного способа повышенная фрагментация эритроцитов обнаружена лишь у 7 из 24 больных (29Ж), а в предлагаемом способе— у 20 больных (83K). При этом выяснилось, что известный способ выявляет повьппенную фрагментацию лишь при очень высоком числе поврежденных эритроцитов, выявляемых предлагаемым способом (более 60 ° 10 /л) .

1020,0

22

2968,0

38,5

80,0

135,0

55 Средняя арифметическая 56,04

173,74

Использование предлагаемого способа позволяет повысить чувствитель- 25

0 ность диагностики внутрисосудистого свертывания крови за счет выделения. и подсчета поврежденных эритроцитов.

При внутрисосудистом свертывании 10 0 крови снижается деформобильность 30 11 0 эритроцитов и повреждается их мембрана фибрином отложившимся в микро- 12 0 сосудах. Это приводит к частичной потере вещества эритроцитов и сниже- 13 нию их плотности. При осуществлении 35 14 предлагаемого способа поврежденные эритроциты отделяются от, обшей массы 15 0 эритроцитов и выделяются в отдельное клеточное кольцо, что облегчает их 16 выявление и подсчет. В крови здоро- 40 вых людей (контроль) количество эри- 17 троцитов в этом слое колеблется в 18 пределах (1-4) 10 /л. При внутрисо8 судистом свертывании крови регистри- 19 руется значительное увеличение их количества в выделяемом слое (в 10 20 ,и более раз) . 21

1288608

Составитель Л.Шилина

Техред В.Кадар Корректор А.Зимокосов

Редактор О.Бугир

Заказ 7802/43 Тираж 799 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий t13035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

»

Производственно-полиграфическое предприятие» г.ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ определения виутрисосудистого свертывания крови путем биохимического исследования крови под микроскопом, отличающийся тем, что, с целью повыпения чувствительности способа, пробу крови разводят физиологическим раствором и центрифугируют в градиенте плотности фиколл-верографина, отделяют слой, имеющий плотность 1,077, подсчитыва5 ют в нем число эритроцитов и при увеличении его относительно нормы определяют внутрисосудистое свертывание крови.