Питательная среда для глубинного культивирования бактерий рода @

 

Изобретение относится к области микробиологии. Цель - повышение выхода биомассы и упрощение состава среды. Среда в качестве питательного субстрата содержит ферментолизат биомассы микроорганизмов и автолизат (экстракт дрожжей в количествах , соответственно равных (в г/л) 18,0-20,0 и 9,0-10,0. Использование предлагаемой среды позволяет увеличить выход клеточной биомассы с 2,0 до 3,7 г/л. 1 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) (51) 4 С 12 N 1/20 (С 12 N 1/20, С 12 R :1:21) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3894175/28-13 (22) 11.05;85 (46) 15.06.87. Бюл. У 22 (71) Научно-исследовательский конструкторско-технологический институт биологически активных веществ и

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ (72) Г,Д.Серов, Н.А.Михненкова, А.В.Селина, Л.И.Пучкова, Г.П.Головкина, А.Н.Григорян и М.В.Спевак (53) 663.18 (088.8) (56) Методические рекомендации по выделению и идентификации .микробов рода Haemophilus. М.: Минздрав СССР, 1979, с.18.

Takanami М. Pestriction endonucleases, Ap.6 and Н-1 from three

Haemophilus Strains, Method. Mol

BioL 1974, ч.7, р.113-133. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА

HAEM0PHILUS (57) Изобретение относится к области микробиологии. Цель — повьппение выхода биомассы и упрощение состава среды. Среда в качестве питательного субстрата содержит ферментолизат биомассы микроорганизмов и автолизат. (экстракт дрожжей в количествах, соответственно равных (в r/ë)

18,0-20,0 и 9,0-10,0, Использование предлагаемой среды позволяет увеличить выход клеточной биомассы с

2,0 до 3,7 r/ë. 1 табл.

1317020

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению питательных сред, предназначенных для культивирования бактерий рода гемофилов, биомасса которых используется для выделения ферментов, таких как эндонуклеазы.

Цель изобретения — повышение выхода биомассы и упрощение состава среды.

Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда в качестве питательного субстрата содержит ферментолизат биомассы микроорганизмов и автолизат (экстракт) дрожжей. Предлагаемая среда содержит следующие компоненты, г/л:

Ферментолизат биомассы микроорганизмов 18,0-20,0

Автолизат дрожжей 9,0-10,0

1" люко за 4, 5-5,0

Натрий хлористый 4,5-5,0

Гемин 0,009-0,0)

Никотинамидадениндинуклеотид 0,0019-0,002

Вода дистиллированная Остальное выход биомассы бактерий составляет 2,4-3,7 г влажных клеток с 1 л, Использование белковых компонентов с различной степенью гидролиза (дрожжевой автолизат (экстракт) низкая степень гидролиза, ферментолизат — высокая степень гидролиза) позволяет наиболее. полно удовлетворить потребности бактерий рода Haemophilus в белковом питании и ростовых факторах, что приводит к значительному повышению выхода биомассы.

В таблице приведены экспериментальные данные, иллюстрирующие существенность признака, относящегося к количеству глюкозы в среде, а также эффективность совместного использования ферментолизата биомассы микроорганизмов и автолизата (экстракта дрожжей.

Как видно из приведенных в таблице данных, увеличение в питательной среде суммарного содержания ферментолизата биомассы микроорганизмов и дрожжевого автолизата сверх максимального значения ?8-30 r/ë и неизменной концентрации глюкозы 5 г/л приводит к заметному снижению выхода биомассь Haemophilus с 3,7 до 3,1 г/л. i

Использование такого же количества только дрожжевого автолизата, либо

t0

55 только ферментолизата биомассы микроорганизмов при неизменной концентрации глюкозы уменьшает выход биомас-. сы Haemophilus соответственно до

1,8, либо 2,0 г/л.

Таким образом, лишь совместное введение в питательную среду ферментолизата биомассы микроорганизмов и дрожжевого экстракта (как ростовых факторов и белкового питания) обеспечивает необ: одимый несуммарный эффект существенного .увеличения выхода биомассы (при оптимальном содержании глюкозы 5 г/л).

Концентрация глюкозы ниже 4,5 г/л не обеспечивает достаточного повышения выхода биомассы, а концентрация глюкозы выше 5 0 г/л не приводит к дальнейшему росту выхода биомассы и целесообразна по экономическим соображениям.

Пример 1. Для приготовления

4000 г питательной среды берут

2000 мл дистиллированной воды, вносят в нее 80,0 г ферментолизата биомассы микроорганизмов и 40,0 г автолизата дрожжей, нагревают до кипения, устанавливают рН 7,1-7,2, кипятят 5 мин, охлаждают, центрифугируют при 35004000 об/мин в течение 35-40 мин.

Полученный супернатант доводят до

2000,0 г. Затем растворяют в

2000,0 мл дистиллированной воды20,0 r хлористого натрия и 20,0 r глюкозы. При необходимости раствор фильтруют. Полученные. растворы смешивают, стерилизуют в автоклаве при

0,8+0,15 кгс/см . Перед культивированием в него добавляют стерильные растворы гемина до конечной концентрации 0,01 г/л и НАД вЂ” до

0,002 г/л. В ферментер с предлагаемой средой вносят инокулят бактерий

Haemophilus influenzae и культивируют при 37 С с хорошей аэрацией до конца логарифмической фазы. Урожай составляет 3,7 г/л влажных клеток пригодных для выделения фрементов эндонуклеаз рестрикции.

Пример 2. Для приготовления б

4000 r питательной среды берут

2000 мл дистиллированной воды, вносят в нее 72,0 г ферментолизата биомассы микроорганизмов и 36,0 r автолизата дроюкей, обрабатывают так, как в примере 1. Затем растворяют в

2000,0 мл дистиллированной воды

I8,0 г глюкозы и 18,0 r хлористого

3 13170 натрия. Оба раствора смешивают, стерилизуют. Перед использованием в среду добавляют НАД и гемин до ко-. нечных концентраций последних

0,0019 и 0,009 г/л. В ферментер с данной средой вносят инокулят бактерий Haemophilus influenzae и культивируют при 37 С. Выход биомассы 2,4 г/л влажных клеток.

Пример 3. Для приготовления 10

4000,0 г питательной среды берут

2000,0 мл дистиллированной воды и вносят в нее 48,0 r ферментолизата биомассы микроорганизмов и 16,0 r дрожжевого экстракта, обрабатывают так как в примере 1. Затем растворя1 ют в 2000,0 мл дистиллированной воды 18,0 r глюкозы и 18,,0 г хлористого натрия. Оба раствора смешивают, стерилизуют. Перед использованием 20 в среду добавляют НАД и гемин до конечной концентрации последних

0 0019 и 0,0009 г/л, При ферментации в этой среде по описанным условиям выход клеток Н,iпй1иегzae

1,3 г/л.

Пример 4. Для приготовления

4000,0 г питательной среды берут

2000,0 мл дистиллированной воды, вносят в нее 80,0 r ферментолизата биомассы микроорганизмов и 40,0 r автолизата дрожжей, обрабатывают так как в примере 1.Затем растворя7 ют в 2000,0 мл дистиллированной воды 20,0 г хлористого натрия и 20,0 г 35 глюкозы. Оба раствора смешивают, стерилизуют. Перед использованием в среду добавляют НАД и гемин, до конечной концентрации последних 0,002 и 0,01 г/л. В ферментер с предлагаемой средой вносят инокулят бактерий Haemophilus aegyptius и культи,вируют при 37ОС с хорошей аэрацией до конца логарифмической фазы. Выход

20 4

3,6 г/л влажных клеток, пригодных для выделения ферментов эндонуклеаз рестрикции.

Предлагаемая питательная среда . для глубинного культивирования бактерий рода гемофилов обладает рядом преимуществ перед известной. Использование среды позволяет увеличить выход клеточной биомассы с 2,0 до

3,7 г/л среды. Упрощен состав .среды: вместо восьми компонентов в известной среде предлагаемая содержит шесть, причем исключены такие дорогие дефицитные компоненты, как свежие мозги, сердце, пептон, в связи с чем отпадает необходимость закупки импортных питательных сред. Упрощен и сокращен процесс приготовления среды.

Снижена стоимость питательной среды.

Формула изобретения

Питательная среда для глубинного культивирования бактерий рода Haemophilus, содержащая питательный субстрат, хлористый натрий, глюкозу, гемин, никотинамидалениндинуклеотид и воду, отличающаяся тем. что, с целью повышения выхода биомассы и упрощения состава среды, она включает в качестве питательного субстрата ферментолизат биомассы микроорганизмов и автолизат дрожжей в соотношении 2:1 при следующем соотношении компонентов, г/л:

Ферментолизат биомассы микроорганизмов 8,0"20,0

Автолизат дрожжей . 9,0-10 0

Глюкоза 4,5-5,0

Хлористый натрий 4,5-5,0

Гемин 0,009-0,01

Никотинамидаденин динуклеотид 0,0019-0,002

Вода дистиллированная Остальное!

Ц фон, н g л жоа ехо

Ж М ф

PC 5 III

1

1 ь

D л в

О

СЧ л в

«Ч

О

1Г

СЧ

О ь

СЧ

1 4 о е

Ж Ef

C4 fLl н

О

g о о

1

1 1

1 1

О л

СЧ ж о н

Ю о

1ч

Х о

О

СЧ о о

° о!

1о л

D л

СЧ

Ю е о л

1Г) 1

1 1

1 00 1 л

1 1

1 о л ь о л о. ь л

О ь в л

С4 л ю

° I

О е

СЧ

СЧ

СЧ л

Щ о л о

О

СЧ ь о л о о о л

D л л

С Ъ

О л в

О л л

D л о сЧ

О

О

Ю л

О и .Ь

О о л о

1 л (1

Q0

О

D л ь

Ch ь о о о л

СО о л

Ch л о ь в о

ОО

О

D л

D о л

СО

СЧ л

Ю л О

1 ф

И ф ф!

Ц I

3 и и ф

Х о ж о

I aa о

), ф ймо= а!

1 1 1 ф3 Э! I

ol -.! 1 1 о1

М

IC!

Ц с )

all

61

31

F1

Ol

1

I !

Я ф

X о

g о н ф Ol

Ol eC

Ж ф о

I ж о е о

X Р

Qc Ц

9 и н

1 о и 131702!.!

8 и N о

СЧ ь о л о о о о л ь

С4

° - о о о л A о о

I3

1 сО I л сЧ 1

1

Ch I л