Способ обработки спермы быка

 

Изобретение относится к животноводству . Целью изобретения является стабилизация биологической полноценности спермы и повышение ее оплодотворяющей способности. Сб ежеотобранную сперму разбавляют защитной средой. Содержание желтка куриных яиц в разбавителе 4-5 мл. После разбавления в сперму добавляют андекалин в дозе 1-10 ед. на 1 мл спермы. Обработанную таким образом сперму хранят при 2 С или при -196 С после зквилибрации в течение 3-4 ч при 2-4°С и последующего замораживания в парах жидкого азота. Способ стабилизирует биологическую полноценность спермиев, в результате чего повьшается результативность осеменения и снижаются затраты желтка куриных яиц на цели искусственного осеменения. 5 табл. (Л со 00 4 СО СО

СОЮЗ СОЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

PECflYS JlHH

„.SU„„13314

А1 (51) 4 А 61 D 7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4045713/30-15 (22) 27.01 86 (46) 23.08.87. Бюл. N 31 (71) Ереванский зоотехническо-ветеринарный институт (72) А.О.Манасян, Б.Н.Аветисян (БЦ), К.Ц.Братанов и Б.П,Сомлев (БС) (53) 591.463.1:66.063 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1144698) кл. А 61 D 7/02, 1983, ГОСТ 14746-69. (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ БЫКА (57) Изобретение относится к животноводству. Целью изобретения является стабилизация биологической полноценности спермы и повышение ее оплодотворяющей способности. Свежеотобранную сперму разбавляют защитной средой. Содержание желтка куриных яиц в разбавителе 4-5 мл. После разбавления в сперму добавляют андекалин в дозе 1 — 10 ед. на 1 мл спермы.

Обработанную таким образом сперму хранят при 2 С или при -196 C после зквилибрации в течение 3-4 ч при

2-4 С и последующего замораживания в парах жидкого азота. Способ стабилизирует биологическую полноценность спермиев, в рЕзультате чего повьппается результативность осеменения и снижаются затраты желтка куриных яиц на цели искусственного осеменения.

5 табл.

331499

Глюкоза, r

3,0

3,0

3,0 3,0

Натрий лимоннокислый, r

1,4

1,4

1,4

l,4

Желток куриных яиц, мл

5,0

2,0

6,0

4,0

Спермосан-3, тыс,ед.

75-90 75-90 75-90 75-90

Вода дистиллированная, мл

100 100

100

100

1 1

Изобретение относится к способам обработки и хранения спермы и может быть использовано на станциях искусственного осеменения и госплемстанциях.

Цель изобретения — стабилизация биологической полноценности спермы и повышение ее оплодотворяющей способности.

Пример 1. Свежеотобранную сперму разбавляют защитной средой и сразу после этого на каждый 1 мл спермы добавляют андекалин в дозе

1-10 ед. Обработанную таким образом сперму хранят при 2 С и при -196 С после эквилибрации в течение 3-4 ч при 2-4 С и последующего эамораживаВ табл.! показано влияние различного содержания желтка куриных яиц на качественные показатели спермы.

Сразу после разбавления защитной средой в опытные группы добавляют андекалин для инъекций в следующих количествах,1 ед ° на 1 мл спермы:

1(а); 5(б); 10(в) .

Раствор андекалина готовят непосредственно„перед применением, растворяя содержимое флакона в дистиллированной воде (в одном флаконе

40 ед.)

В табл.2 показано влияние различного содержания апдекалина на качественные показатели спермы.

Биологическую полноценность спермы, обработанной предлагаемым и известным способами, оценивают по показателям подвижности спермиев,по утечке аспартат-трансаминазы (АсТ), по состоянию акросомы.

Подвижность спермиев определяют согласно ГОСТУ в раздавленной капле ния в парах жидкого азота. Контрольные пробы, предназначенные для хранения при 2-4 и 196 С, разбавляют

5 глюкозо-цитратно-желточной и лактозожелточно-глицериновой средами.

Каждый эякулят делят на две пробы, одну из которых сразу после разбавления обрабатывают андекалином, т,е. по предлагаемому способу, а другую — по известному способу.

Пример 2. Пробы спермы разбавляют защитной средой. Опытные пробы спермы, предназначенные для кратковременного хранения при 2-4 С, разбавляют защитной средой следующего состава: спермы под микроскопом в Проходящем свете при увеличении 100х180 раэ с использованием нагревательного стоо лика при 40-41 С. Оценку подвижности спермиев производят по 10-балль4р ной шкале. Аспартат-трансаминазу определяют в плазме спермы после центрифугирования при 3 000 об/мин в те" чение 20 мин по Рейтману и Френкелю с использованием набора химических

45 реактивов для определения активности АсТ и АлТ в сыворотке крови методом колориметрирования, который основан на изменении преломления света ,при боковом освещении раздавленной капли семени с помощью конденсора темного поля. В зависимости от состояния акросомы оптическая плотность ее изменяется и это обнаруживается по наличию или отсутствию ее светящегося контура.

Пример 3. Опытные пробы спер.мы, предназначенные для длительного хранения при -!96 С, разбавляют защитной средой следующего состава:

1331499

11,5

Лактоза, г

Желток куриных яиц, мл 5 0

Глицерин, мл 5,0

Спермосан-3, 5 тыс. ед.

Вода-дистиллированная, мл 100

Контрольную и опытную пробы спер- 10 мы, предназначенные для длительного хранения, после разбавления защитной средой и обработки андекалином в дозе 1 ед, охлаждают в холодильнике до 2 С в течение 4 ч, пос- 15 ле чего эамораживают в виде гранул

0,2 мл на фторопластовой пластине в парах азота и хранят в жидком азоте при -196 С.

Биологическую полноценность спер- 20 мы, обработанной известным (контроль) и предлагаемым (опыт) способами, оценивают по подвижности, по состоянию акросомы (акроскопический метод) и по оплодотворяемости после ректального исследования коров.

В табл.3 дана биологическая полноценность спермы, обработанной известным и предлагаемым способами.

50 0

Таким образом, данные, приведенные в примерах, свидетельствуют о том, что по сравнению с известным, являющимся базовым способом, обработка спермы предлагаемым способом

35 улучшает подвижность спермиев (в день получения на 9,07., через 3 дня хранения при 2 С на 12,57., табл.2, а после замораживания-оттаивания на

207., табл.3) . Процент спермиев с це- 40 лой неповрежденной акросомой также выше в предлагаемом способе как при хранении при 2-4 С (в день получения на 9,87, через 3 дня хранения на 18,6Х, табл.2), так и после эамо- 45 раживания-оттаивания (на 24,67., табл.3), что свидетельствует о том, что обработка спермы предлагаемым способом способствует замедлению деструктивньм процессов, неизбежных при хранении спермы вне организма, т.е. способствует стабилизации биологической полноценности спермы,Наблюдается также упрочнение цитоплаэматической мембраны спермиев, что проявляется не только в сохранении акросомы, но и в малой утечке фермента АсТ (в день получения на 507., через 3 дня хранения на 1007., табл.2), которая выполняет важную роль в сохранении контроля над моторикой спермиев. И, наконец, оплодотворяемость коров при использовании спермы,обработанной предлагаемым способом,по сравнению с известным повышается на

13,87.

В табл. 4 и 5 представлены данные о биологической полноценности спермы в зависимости от дозы андекалина и количества желтка в разбавителе.

Как следует из табл. 4 и 5> наилучший эффект достигается при строго определенном соотношении андекалина и желтка.

Как видно иэ данных, обработка спермы предлагаемым способом дает двойной практический эффект: во-первых, стабилизирует биологическую полноценность спермиев, замедляя тем самым деструктивные процессы, неизбежные при хранении спермы вне организма, и упрочняет цитоплаэматическую мембрану спермиев, что способствует сохранению акросомы, которая является носителем ферментов и антигенов, участвующих в оплодотворении, и малой утечке фермента аспартат-трансаминазы, которая выполняет важную роль в сохранении контроля над моторикой спермиев, в результате повышается результативность осеменения, во-вторых, позволяет значительно снизить (с 20 до 57 ) затраты ценного и дорогого пищевого продукта — куриных яиц на цели искусственного осеменения, Формула изобретения

Способ обработки спермы быка,включающий ее разбавление средой, содержащей желток куриного яйца, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью стабилизации биологической полноценности спермы и повышения ее оплодотворяющей способности, сперму разбавляют средой, содержащей 4-5 мл желтка, а после разбавления к сперме добавляют андекалин в дозе 1-10 ед. на

1 мл спермы.

1331499

Т а б л и ц а 1

Через 3 дня хранения

Через 1 ч после получения

Среды с разным количеСпермии с целои акросомой, X

Подвижность спермиев

Спермии с целой акросомой, 7.

Подвижность спермиев ством желтка, мл

7,2 + 0,33 45,0 t 2,03

Таблица 2

Температура хранения спеРмы

Доза андеСпернни с целой акросомой, Способ обработки спермы

Подвижность спермиев, балл

Утечка ЛсТ, мкмоль калина> ед/мл спермы через 1 ч после почерез 3 днл храненнл через I ч после почерез 3 дня хранения через 3 дня хранения через 1 ч после лучения лучення получения

0,125 4 0,004

52,8 т 1,01 0,08 + 0,002

44,5 > 1,11 0>12 т 0,004

7,8>0,27

Известный

0,25i 0,006

9,8

Разница, I8 6

12,5

9 О

50,0

IOO

Достоверностьь

Р À,o l

P Е0,05

0,13 + 0>004

0,23 + 0,007

P аО,I

P 40,01

Р сО,OI

P «à c0>05

50, 1 2 1,3 0 ° 085 - 0 >002

45>0 + 1>35 0> 121 1 0>003

7,7+0,31

Известна>й

Bi8

11,3

Разница, 2

8,33

S,O

42,35

77,0

Цостоверность

Р Co%I

P (0>ol

P gO,I

Р40 1

Р 40,01

P 0>05

50,4 i I 31 0,081 i 0,003 0,125 + 0>003

44,2 + 1,1 О ° 125 i 0,005 0,21 + 0,002

7iBi0,37

Известный

9,9

Разница, Х

7>7

9,64

54, 32

68,0.Достоверность

Р40 I P<0,! Р 0,1

P 4 0,001

ГВНА (2) 7,9 t 0,2 (4) 8,5 0;21 (5) 8 5 + 0 31 (6) 8,3 + 0,25

ГЦЖ (20) 7>4 1 03

1 Предлагаемый 8>5>0>25

5 Предлагаемый 8>310>33

10 Предлагаемый 8>4to>32

75,9 «+ 2,2

80,3 + 2,0

82,1 + ?,9

78,5 + 3,3

75,6 1 3>1

8,1 0,32 81,412>4

7, 2 О, 25 74,4т2, 2

7,8+ 0,28 80,512 ° 01

7,2 + 0,31 74,0 + 1,9

8,0 «i 0,31 81,2 22,0

7,3+ 0 25 73,9 t 1,8

4,5 > 0,22

7,8 + 0,3

8,1 S 0,29

6,9 + 0,32

36,7 + 1,7

50,1 + 2,6

55,1 + 2,6

47,9 2,1

Р C 0,001 Р < 0,005.1331499

Таблица 3

Температура хранения спермы — 196 С

Показатели

До замораживания После оттаивания

Способ обработки

5,4 + 0,19

4,5 + 0,22

8,3 0,22

7,6 + 0,31

Подвижность спермиев,балл

Предлагаемый

Известный

9,2

Разница, 7

P 0,01

P i0,l

Достоверность

55,6 + 2,3

46,4 1,85

79,2 + 3,3

73,1 t 2,7

Предлагаемый

Известный

24,6

Разница, Е

16,2

P c0,О1

Р 1 0,01

Достоверность

85,2

Оплодотворяе— мость коров, 7

Предлагаемый

71,4

Известный

85,2

Предлагаемый

Известный

71,4

Таблица 4

Подвижность, балл

Концентрация андекалина в

ГЦЖ-среде, вд/мл спермы

Количестно желтка через l ч через 5 дня после по- хранения лучения в среде,мл

4,5 + 0,2

7,5 + 0,2

О (Контроль) 20 7,4 f 0,15

8,0 + 0,15

9,0 + 0,2

9,0+0,11

Спермии с целой акросомой, 7

Отелились, 7.

8,0 + 0,17

9,0 + 0,17

9,0 + 0,15

8,5 0,16

9,0 + 0,19

7,0 +0,14

7,4+ 0,13

4,0+ 0,22

7,0+ 0,24

7,0 <О I8

1331499

Продолжение табл.4

Подвижность, балл

Количество желтка

Концентрация андекалина в

ГЦЖ-среде, вд/мл спермы через Э дня хранения через 1 ч после получения в среде,мл

6,0+ 0,16

7,3 + 0,14

0 (Контроль) 20

5,0+. 0 19

7,0 + 0,12

7,5 0,13

7,0 + 0,2

0 (Контроль) 20

7,5 + 0,14

Теплица 5

Процент спермиев с неповрежденной акросомой

Количество келтка

Концентрация аидекалина а

ГКИ-среде, ад,/мл спермы

Утечка АсТ, мкмоль в сре де,мл череэ 3 дня хранения череэ 1 ч после почереэ 3 дня хранения череэ 1 ч после получения лучения

0,3 4 0,004

О,II + 0,003

80s0t 1 ° 9

80,5 t 2,0

S0,5 t 2,4

8I,0 т 2,2

0,09 т 0,002 0,131 0„005

0,08 т 0,002 0,12 1 0,004

0,08+ 0,006 0,18+ 0,003

0,12+ 0,004 0,23 t 0,006

О (Контроль) 20 74,4 Т 2,2 2

0 (Контроль) 20

0, 12 Т 0,004 О, 18 Т 0,002

0,125+ 0,005 0,25 + 0,002

73,0 I 65 44,0 t 1,2

0 (Контроль) 20

8нц11ПИ Заказ 3749/4 Тираж 594 Подписное

Произв.-полигр. пр — THe, г. Ужгород, ул. Проектная, 4. 80,5 i 2,1

80,5 t 2,0

81,5 t 2,2

80,0 1 2,0

72>5 I &

81,0 i 2,!

80,0 1 2,0

80 0 1 1 8

81,5 Т 1,7

9,0 0,13

7,5 + 0,17

9,0 т 0,12

9,0+ 0,18

9,0 + 0,11

9,0 1 0,11

7,5 + 0,16

38,0 < 1,05

52,2 + 1,2

55,8+ 1,01

51,0+ I, I

44,5 1 I,l I

35,5 1,2

50,6 1 1,3

48,0 I 1

47,5+ 1,15

45,0 t 1,35

40,0 + I 6

49,5 t I 4

51,5t 1 55

49,0 1,16

0,1 + 0,04

0,1 0 ° 003

0,09 + 0,002

0,09 . 0,003

0,12 0,003

0,09 1 0,004

0,1 t 0,002

0>09 t 0,005

0,36 0,002

0 17t 0,005

0,14 0,004

0,16 2 0,003

0,28 + 0,007

0 ° 32 + 0,003

0,154+ 0)004

0,18 0,003