Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод

 

Изобретение относится к ветеринарии , а также может быть использовано в медицине. Цель изобретения - повьшение точности способа, его упрощение и ускорение. Проводят предварительную обработку неполовозрелых форм цестод 0,2%-ным водным раствором .едкого калия или 2%-ным водным раствором соляной кислоты, затем инкубируют в активизирующем растворе, содержащем панкреатин медицинский, соду пищевую, желчь овечью и дистиллированную воду при температуре окружающей среды от 47- до 178 С, вьщерживая их при этих температурах 5-180 с. Способ позволяет достигнуть 100%-ного освобождения яиц от оболочек, I00%-ной подвижности онкосфер, а также 100%-ной подвижности и выворачиваемости протосколексов цестод. fi iS (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (5D 4 А 61 В 10/OP

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К А ВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3964499/30-15> 3966038/30-15 (22) 30.08.85 (46) 15.09.87. Бюл. М 34 (71) Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт (72) А.К,Журавец (53) 541.124.7:542.97(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 1093324, кл. А 61 В 10/00, 1984.

Smyth J,D, Культивирование протосколексов Echinococcus granulosus до стробилярной стадии. 1967, т, 57, с. 111-133. .(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ ФОРМ ЦЕСТОД (57) Изобретение относится к ветеринарии, а также может быть использовано в медицине. Цель изобретения— повьппение точности способа, его упрощение и ускорение. Проводят предварительную обработку неполовозрелых форм цестод 0,2%-ным водным раствором ,едкого калия или 2Х-ным водным раствором соляной кислоты, затем инкубируют в активизирующем растворе, содержащем панкреатин медицинский, соду пищевую, желчь овечью и дистиллированную воду при температуре окружающей среды от 47 до 178 С, выдерживая их при этих температурах 5-180 с.

Способ позволяет достигнуть 100Х-ного освобождения яиц от оболочек, 100Х-ной подвижности онкосфер, а также 100%-ной подвижности и выворачиваемости протосколексов цестод.

1 1337(!57

Изобретение относится к. ветеринарии, н частности к способам определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтон, а также может быть использована в медицине.

Цель изобретения — повышение - очности способа, ега упрощение и ускорение, Способ осуществляют следуюшим об в 10 разом.

Пример 1. Для активизации яиц цестод применяют 0,2Х-ныл водный раствор едкого калия или 2%-ный водный раствор соляной кислоты и активизирующий раствор, имеющий следующий состав пищеварительных ферментов на дистиллированной воде, г, %, панкреатин медицинский 12, сода пищевая 1,3, желчь овечья 20. Раствор рекомендуется использовать не ранее чем через 2 ч после приготовления.

Лктинность его сохраняется 10 ч при комнатной температуре и 36 ч при хранении н холодильнике при температур о воздуха 5-7 С, Зрелые членики цестоды М. пи "«., сeps с помощью препаровальных игл освобождают от яиц, к яйцам добавляют воду и получают суспензию яиц, 30 хранящуюся в холодильнике в физрасто воре при температуре воздуха 5 С.

На предметное стекло с лункой помещают с l каплей воды 100-150 яиц

М. шц1Т,1.серн, затем вливают 1 каплю

2Х-ного водного раствора соляной кислоты и ставят и термастат при температуре воздуха +62 С. Чер".ç мин о пробу достают и добавляют н нее б капель активизирующего раствора и

40 снова помещают в термастат при таи же температуре на 2,5 мин, Затем пробу достают и смотрят под микроскопам (объектив « 8, окуляр «!5) на наличие освободившихся. ат оболочек анкасфер и их подвижности.

При данном способе освобождается от оболочек 100% онкасфер,, подвижность их 100%-ная.

В качестве контроля берут пробу с яйцами М. multiceps и подвергают воздействию 0,2%-ного водного раствора ецкого калия или 2%-íîãî ваднага раствора соляной кислоты и вместо активизирующего раствора вливают 6 капель физраствора, па аналогии с oïûòнай группой инкубируют в термостате о при температуре воздуха +62 С с экс— позицией 2 и 2,5 мин, после чего иг-следуют под микроскопом. В результате действия раствора 1 яйца были слег. ка потемневшими, онкасфер не обнару,кено .

Пример 2. Зрелые яйца М, mul-!.ieeð== помещают на 2 предметных стекла с лункой (по 40-60 экземпляpoli. В одну пробу вливают поочеред1

: o 1 каплю 2%-ного раствора соляной кислоты, затем инкубируют н термостате, добавляют 5-6 капель активизируюцега раствора и снова помещают при той же температуре с экспозицией !—

3 мин, после чего пробы снова достают из термастата и смотрят под микроскопом. Пробы помещают в термастат соответственно при следующих темпео, ратурах воздуха: 47 С вЂ” с экспозицио ей 2 и 3 мин; 54 С вЂ” 2 и 3 мин; 83 С2 и 1,5 мин, 84 С вЂ” 2 и 1,5 мин;

107 С вЂ” 1 мин, Результаты показали, что начиная о с 59 С до 84 С при соответствующей экспозиции вылупляемость и подвижность яиц цестод 100%-ные.

Пример 3. Для инкубации протосколексов цестод применяют тот же активизирующий раствор пищеварительных ферментов.

На предметное стекло с лункой вливают с 1-2 каплями суспензии протосколексов эхинококков (40 — 60 экземпляров) при комнатной температуре воздуха, зародьппевые капсулы с протасколексами разрывают с помощью препаровальных игл. Добавляют 5-6 капель активизирующего раствора и помещают предметное стекло в термо, о стат при 62 С на 1 мин. Затем пробу вынимают из термастата и смотрят под микроскопом МБС (абъектив «2 и "4, окуляр «8> на наличие подвижных и

« нывернутых пратаскалексав.

При данном способе активно двигается и выворачивается 100% протосколексов эхинококков.

В качестве контроля берут часовое стекло с 1-2 каплями (40-60 экземпляров) заведомо мертвых пратоскалексав, Убивают их путем нагревания часового стекла на спиртовке в течение 1-2 мин да кипения. Затем г> пробу вливают

5 — 8 капель активизирующего раствора о и помещают в термастат при 62 С на

1мин 5 с. Затем пробу- вынимают и смотрят под микроскопом. В результате отмечается отсутствие подвижных и нынернутых пратасколексав.

1337057

Формула изобретения

Составитель Е.Дмитриченко

Редактор A.!1åæíèíà Техред Л.Олийнык Корректор Л.Бескид

Тираж 594 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4068/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Пример 4. На предметное стекло с лункой помещают с 1-2 каплями суспензии 40-60 протосколексов эхинококков, вливают 5-8 капель активизи5 рующего раствора и ставят в термоо стат при +178 С на 5 с, после чего пробу смотрят под микроскопом. По данному способу достигаются 100Х-ные подвижность и выворачиваемость прото- 10 сколексов, В качестве контрольной пробы 1 берут предметное стекло с лункой, помещают туда с 1-2 каплями суспензии

40-60 заведомо мертвых протосколексов эхинококков, убитых кипячением.

Затем вливают в лунку активизирующий раствор и пробу ставят в термостат о при +178 С. Через 5 с предметное стекло с лункой достают из термостата и протосколексы наблюдают под микроскопом на подвижность. В результате в пробе 1 протосколексы деформированы и неподвижны, подвижных и вывернутых экземпляров не найдено, 25

В качестве контрольной пробы 2 берут предметное стекло с лункой, помещают туда 40-60 экземпляров протосколексов, заливают физраствором и ставят в термостат при +178 С. Через 5 с пробу вынимают иэ термостата и смотрят под микроскопом. В результате в пробе 2 протосколексы остаются без изменения, подвижных и вывернутых экземпляров не обнаружено.

Предлагаемый способ можно применять в лабораторной практике для определения максимального срока выживаемости яиц цестод во внешней среде, а так же для культивирования ларвальных стадий цестод.

Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод, включающий предварительную обработку их водным раствором едкого калия или соляной кислоты с последующей обработкой активизирующим раствором и. инкубацию, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, его упрощения и ускорения, инкубацию проводят при температуре окружающей среды от 47 до 178 С в течение 5-180 с.