Способ количественного определения n-ацетилглюкозоаминил-n- ацетилмурамовой кислоты

 

44 А1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 С О1 Б 31/16

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, ы.;

Н АВТОРСКОМ СВИДЕт ЛЬСтВ, ИВ,-.), )а, (2)) 39335)1/28-14 (22) 23.07.85 (46) 23.09.87. Бюл. Р 35 (72) В.А. Карклиня, А.Я. Веверис и Л.3. Екабсоне (53) 612.015(088.8) (56) J. Biol. Chem., 1966, v.241, 1) - 1, р. 224-226. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕ.НИЯ N-АЦЕТИЛГЛ)ОКОЗОАМИНИЛ-N-АЦЕТИЛМУРАМОВОЙ КИСЛОТЫ (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — повышение чувствительности способа. Дисахарид и соляную кислоту помещают в колбе на водяную баню и гидролизуют. После охлаждения добавляют раствор щелочи, тетрабората калия и выдерживают при о

100 С. После охлаждения вводят раствор п-диметиламинобензальдегида, измеряют оптическую плотность и по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида.

1339443

Подписное

ВНИИПИ Заказ 4213/33

1и аж 776

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии микроорганизмов, в частности к способам количественного определения дисахарицов. .>

Цель изобретения — повышение чувствительности способа за счет предварительной обработки образца 0,45G,55 M кислотой при 95-100 С в течение 15-20 мин. 10

Пример 1. 2,13 мг дисахарида (с содер>канием основного вещества по способу ТУ 86,0X) помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл

0,45 M раствора НС1, колбу помещают ь 16 водяную баню и гидролизируют при о

99 С в течение 20 мин. После охла>кдения добавляют раствор ИаОН до рН 6.,9, доводят объем колбы до метки дистиллированной водой. Из приготовленного 20 раствора в химические пробирки со шлифом берут по 0 5 мл, добавляют 0,1 мл раствора тетрабората калия, закрывают пробками и выдерживают 5,5 мин при о

100 С. После охлаждения до комнатной 25 температуры добавляют 3 мл раствора и-диметиламинобензальдегида и выдеро

-avatar u термостате 20 мин при 37 С.

После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность 30 при 58 > нм относительно холостого опыта„ содержащего вместо анализируемого раствора 0,5 мл дистиллированной воды. Согласно измеренной оптической плотности D=-0,322 по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида с--0,037 мг/0,5 мл.

Согер>кание дисахарида в анализи— руемой пробе

0,037 25 ° 100

2,13 0,5

Относительное стандартное отклонение +1,27. Расхождение между наиболее отлила.сщимися значениями трех параллельных определений +2,0% (абс.). 46

Пример 2, 2,45 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,55 М раствора НС1, колбу помещают в водяную оаню и гидролизируют при 97 С 15 мин. После ох в 60 ла>кдения цобавляют раствор КОН до рН

6,5, доводят объем колбы до метки дистиллированной водой. Из приготовленного раствора в химические пробирки со шлифом берут по 0,5 мл, добавляют 0„1 мл раствора К ВО, закрывают пробирками и выдерживают 5,0 мин при 100 С. Далее поступают по примеру l.

Согласно измеренной оптической плотности D=0,367 по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида сФ0,042 мг/0,5 мл.

Содержание дисахарида в анализируемой пробе

0,042 25 100

2,45 ° 0,5

Относительное стандартное отклонение +1,5Х.

Пример 3. 2,98 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,50 М раствора HC10„, колбу помещают в водяную баню и гидролизируют при 100 С 18 мин. После охлаждения добавляют раствор NaOH до рН 7,5, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой.

Из приготовленного раствора в химические пробирки со шлифом берут по

0,5 мл, добавляют 0,1 мл раствора

К ВО, закрывают пробками и выдержио вают 6,0 мин при 100 С. Далее поступают по примеру 1.

Согласно измеренной оптической плотности D=0,453 по градуировочному графику находят концентрацию дисахарида с=0,0515 мг/0,5 мл.

Содер>кание дисахарида в анализируемой пробе

0,0515 25 100

2,98 ° 0,5

Относительное стандартное отклонение +1,8X..

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ количественного определения М-ацетилглюкозоаминил-N-ацетилмурамовой кислоты, включающий обработку образца тетраборатом калия и п-диметиламинобензальдегидом с последующим фотометрированием, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности, об— разец предварительно обрабатывают

0>45-0,55 M кислотой при температуре 95-100 С в течение 15-20 мин, затем щелочью доводят рН до 6,5-7,5, а обработку тетраборатом калия проводят в течение 5-6 мин.