Способ получения анатоксина bordetella pertussis

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа получения анатоксина. Цель изобретения повышение активности целевого продукта и упрощение способа. После выращивания культуры отделяют биомассу, а в супернатант вводят раствор гексаметафосфата натрия и смесь растворов кислот соляной, серной и трихлоруксусной, и осаждают токсический материал при рН 3,4 3,6. Полученный токсин переводят в анатоксин обработкой формалином в присутствии раствора сахарозы, а затем целевой продукт сортируют на гидроокиси алюминия. Длительность способа 12 14 дней, протективная активность повышается в 5 7 раз в зависимости от штамма-продуцента.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в производстве препаратов для профилактики коклюшной инфекции. Целью изобретения является повышение активности целевого продукта и упрощение способа. Способ иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1. Штаммы N 305 или 475, или Тонаша Bordetello pertussis 1 фазы инокулируют на среду Борде-Жангу. Для посева на жидкую питательную среду используют второй пассаж. Для приготовления посевного материала используют жидкую полусинтетическую и синтетическую питательные среды. В матрацы, содержащие 150-200 мл жидкой среды, инокулируют посевной материал до концентрации 3-3,5 МОЕ в 1 мл и культивируют при 35^оС в течение 5 сут. Супернатант отделяют от микробных клеток центрифугированием при 12000 об/мин в течение 30 мин. К 1 л надосадочной жидкости приливают последовательно 50 мл 20% раствора гексаметафосфата натрия (5%) и по 2 мл 2н. соляной и 2н. серной кислот (0,004 м) и рН жидкости доводят до 3,4 2н. трихлоруксусной кислотой. Осадок отделяют центрифугированием при 12000 об/мин в течение 60 мин и затем растворяют в 1/15 М фосфатном буфере (рН 7,5) в объеме 1/50-1/100 по отношению к объему исходной культуральной жидкости. К осадку добавляют сахарозу до концентрации 10% и формалин до концентрации 0,4% Препарат выдерживают сутки в термостате при 35-37^оС и затем неделю при 4-10^оС. Полученный анатоксин сорбируют на геле гидроокиси алюминия в концентрации 3,2 мг белкового азота на 2 г геля гидроокиси алюминия в 1 мл. Сравнительное изучение протективной активности анатоксинов, полученных предлагаемым и известным способами, показало, что для анатоксина из штамма N 305 она составила в среднем 4205 международных защитных единиц (МЗЕ) на 1 мг белкового азота, для анатоксина из штамма N 475 4782, для анатоксина из штамма Тонаша 3107, по прототипу 675 МЗЕ. Время получения препарата согласно предложению составляет 12-14 дней против 35 сут по прототипу.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА BORDETELLA PERTUSSIS путем культивирования коклюшных бактерий в жидкой питательной среде, отделения супернатанта, выделения из него токсина с последующей детоксикацией формалином и сорбцией анатоксина на гидроокиси алюминия, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и упрощения способа, токсин из супернатанта выделяют осаждением 3 7%-ным раствором гексаметафосфата натрия в присутствии 0,002 0,006 М растворов соляной, серной и трихлоруксусной кислот при рН 3,4 3,6, а детоксикацию токсина проводят в 8 12%-ном растворе сахарозы.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 36-2000

Извещение опубликовано: 27.12.2000        

---