Штамм бактерий sеrrатiа маrсеsсеns - продуцент @ , @ - диаминопимелиновой кислоты

 

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и касается нового штамма бактерий - продуцента fit, f-диаминопимелиновой кислоты, которая может быть использовано для производства лизина, а также в пищевой промышленности и медицине. Цель изобретения - йовый штамм бактерий Serratia marcescens, с более высокой скоростью продуцирующий с/, -диаминопимелиновую кислоту. Штамм S.marcescens ВКП1 1В-23 15, полученный путем ступенчатой селекции с применением мутагена, накапливает в культуральной жидкости на синтетической среде после 72 ч ферментации до 15 г/л о ,Е-диаминопимелиновой кислоты. 2 табл. 2 ил.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU 1377293 .А 1 (50 4 С 12 P 13/08/ДС 12Р 13/08, С 12 R 1:43) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ В о „, "

Q n

7Е Ц

ЕМУ, .„, К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4088087/28-13 (22) 01.07.86 (46) 29.02.88. Бюл. М- 8 (75) А.О. Арманджян и M.Ã. Оганесян (53) 663.15(088.8) (56) Патент Англии Ф 820267, кл. С 12 P 13/08, 1959.

Заявка Японии N- 5591, кл. С 12 D 13/00, 1977. (54) IIITAMM БАКТЕРИЙ SERRATIA MARCESСЕРБ ПРОДУЦЕНТ at,E -ДИАМИНОПИИЕЛИНО ВОЙ КИСЛОТЫ (57) Изобретение относится к микрог биологической промьппленности и касается нового штамма бактерий — продуцента Ы,Е-диаминопимелиновой кислоты, которая может быть использовано для производства лизина, а также в пищевой промышленности и медицине. Цель йзобретения — новый штамм бактерий

Serratia marcescens, с более высокой скоростью продуцирующий e(,Е-диаминопимелиновую кислоту. Штамм S.marcescens ВКПИ В-2315; полученный путем ступенчатой селекции с применением мутагена, накапливает в культуральной жидкости на синтетической среде после 72 ч ферментации до 15 г/л

,Е-диаминопимелиновой кислоты.

2 табл. 2 ил.

1377293

Изобретение относится к микробио- логической промышленности и касается нового штамма бактерий — продуцента p(f.-äèaìèíîïèìåëèíoâoé кислоты, которая может быть использована для производства Ы-лизина, а также в пищевой промышленности и медицине.

Цель изобретения — новый штамм бактерий Serratia marcescens с более высокой скоростью продуцирующий d,Åдиаминопимелиновую кислоту.

Штамм получен путем ступенчатой селекции с применением в качестве мутагенного фактора N-метил-М вЂ” нитроN-нитрозогуанидина. На первой ступени селекции из дикого типа Serratia

marcescens АТСС9986 был получен мутант Serratia marcescens АЗЛ-Р38, резистентный к аналогу лейцина, DL-4азалейцину. На второй ступени селекции из штамма Serratia marcescens

АЗЛ-Р38 был получен мутант Serratia

marcescens 39HAply6-ауксотроф по лизину, который одновременно устойчив к DL-4-азалейцину (табл. 1). Отбор продуктивного штамма осуществляли на синтетической ферментационной среде.

Штамм хранится в полужидкой среде (МПА, содержащий 0,77. агара) под слоем вазелинового масла при 4 С.

Штамм S. marcescens 39НАр1уб депонирован Всесоюзной Коллекцией промышленных микроорганизмов под номером

ВКПМ В-2315 и имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику.

Культурально-морфологические признаки.

Клетки — палочки размером 0,52,0 мкм, .грамотрицательные, подвижные, перитрихиальное жгутикование; спор не образуют.

На МПА колонии на вторые сутки роста при 28-30 С достигают диаметра

2,0-4,0 мм, зернистые, крупные с ровным краем; центр приподнят в виде конуса .поверхность гладкая, блестящая с глянцем, влажная, красного цвета (красная пигментация обусловлена наличием продигиозина-полисахарида). Консистенция колоний пастообразная. Колонии легко смываются и размываются по поверхности питательной среды.

В МП6 рост культуры поверхностный; клетки прикреплены к стенкам сосуда

55 в виде плотной пленки, которая при встряхивании пробирки и взбалтывании среды полностью исчезает. Осадок скудный гомогенный, по консистенции пастообразный, среда над осадком мутная.

В полужидкой среде (MIIA с 0,77 агара) рост по ходу прокола среды напоминает сосульки красного цвета.

Форма сосулек коническая. Окружающая среда прозрачная.

На минимальной среде Дэвиса колонии на первые и вторые сутки роста при 28-30 Ñ достигают диаметра 1,02,0 мм; окраска светло-розовая. На третьи и четвертые сутки роста колонии имеют диаметр 2,0-4,0 мм и яркорозовую окраску. Характеристика колоний та же самая, что и при росте на

МПА.

Физиолого-биохимические признаки.

Молоко свертывает. Крахмал гидролизует. Желатин разжижает. Образует сероводород, индол, аммиак, редуцирующие вещества, оксидазы, дегидратазы, восстанавливает нитраты.

Отношение к источникам углерода: ассимилирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, ксилозу, галактозу, маннит, маннозу. Использует этиловый спирт, слабо использует глицерин, не ассимилирует лактозу, арабинозу, дульцит, рафинозу.

Отношение к источникам азота: ассимилирует сернокислый, хлористый, азотнокислый аммоний, нитраты, мочевину.

Влияние рН среды и температуры на рост штамм S. marcescens ВКПМ В-2315 представлены на фиг. 1 и 2 соответственно (измерения роста проводили после 24 ч инкубирования на среде

Дэвиса при 30 С).

Питательной средой служат МПА или минимальная среда Девиса, которая содержит в качестве источника углерода глюкозу — 0,57, в качестве источника азота — аммоний сернокислый—

0,1Х, а также калий фосфорнокислый однозамещенный — 9,77 и калий фосфорнокислый двузамещенный — 0,17. В качестве необходимого фактора роста в минимальную среду Дэвиса добавляют

20 мкг/мл Ы-лизина или 40 мкг/мл

DL-лизина.

Сравнительная характеристика штамма S. marcescens ВКПМ В-2315 с исход1377293

Таблица 1

Уровень устойчивости различных штаммов S. marcescens к DL-4-азалейцину

Штаммы Рост культур на среде Левиса (30 С, 5 сут) с добавлением

DL-4-азалейцина, мг/мл

0010305071020

АТСС 9986

Норм. Норм.

Слабый рост

Норм. Норм. рост

Очень слабый рост

Отсутствие роста

Норм. Норм.

Норм. Норм.

АЗЛ-Р38

39НАр1у6

Норм. Норм.

Норм. Норм.

Норм.

Норм.

Норм.

Норм.

Норм.

Норм. ным (АТСС 9986) и промежуточным (АЗЛ-Р38) представлена в табл. 2.

Пример 1. Культуру штамма

Serratia marcescens АЗЛ-Р38, получен-5 ную на первой ступени селекции, выращивают в пробирке на скошенной среде ИПА в течение 18-20 ч. Выросшую культуру смывают с косяка жидкой средой и полученную суспензию инокулируют в ферментационную.среду в ! количестве 57 по отношению к общему объему среды.

Состав питательной среды, мас.7: глюкоза 2,0; сахароза 10,0; мочевина 1,0; КН РО 0,1; К НРО 0,05;

FeS0q 0,0001; СаСО. 2,0; дистиллированная вода Остальное.

С помощью 20Х-ного раствора NaOFI доводят рН среды до 7,0-7,4. Ферментацию проводят в колбах Эрленмейера, содержащих 10 мл среды, на качалке при .180 колебаниях в минуту. За 72 ч ферментации в культуральной жидкости накапливается 6,4 г/л валина и 25

2,8 г/л лейцина, при этом Ы,E-диаминопимелиновая кислота не накапливается.

Пример 2. Культуру штамма

Serratia marcescens ВКПИ В-2315, полученную на второй ступени селекции, выращивают при тех же условиях, что и в примере 1. Ферментацию выращенI ной культуры осуществляют в той же питательной среде и при тех же условиях, что в примере 1. Отличие состоит в том, что в качестве необходимого фактора роста в питательную среду добавляют.20 мкг/мл a(--лизина. В конце ферментации в культуральной жидкости накапливается до 15 г/л

Ы,E-диаминопимелиновой кислоты

Пример 3. Посевной культурой штамма S.marcåscåns ÂÊÏÈ В-2315 выращенной, как описано в примере 1, засевают ферментационную среду следующего состава, мас.7

Гидролизат БВК (белкововитаминный концентрат) 15,0

Иеласса 20,0

СаСОЗ 2,0

Вода Остальное рН среды 7,0-7,4.

Остальные условия ферментации, как описано в примере 1. После 72 ч ферментации в культуральной жидкости. накапливается до 15 г/л a E-диаминопимелиновой кислоты.

Формула изобретения

Штамм бактерий Serratia marcescens ВКПИ В-2315 — продуцент Ы,Е-диаминопимелиновой кислоты.

1377293 а блица 2 кислоты и нев культураль.marcescens

Ступени селекШтаммы

S.marcescen

Генотип

Мутаген, мкг/мл нопиции кислота,г/л

Прототроф 0,5 0 0

АТСС 9986

АЗЛ вЂ” P38

6,4 2,8 0

II НГ

III НГ

В КПМ

В-23i5 т

Накопление 4,Е-диаминопимелиновой которых сопутствующих аминокислот ной жидкости разных штаммов S

Прототроф азалейцинрезистентный

Азалейцинрезистентный ауксотрофный по лизину

Накопление, а,К г/л диамивалин лейци мелиновая

Следы Следы 15,0

1377293

35 И 4 Х

ТР1ПЦ)ВТЯГУ

Составитель Л. Минеева

Редактор Н. Киштулинец Техред И.Верес Корректор В. Гирняк

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб. ° д. 4/5

Заказ 1989

- ††--г----Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород ул. Проектная, 4