Способ получения моноспецифической антисыворотки к орозомукоиду человека

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 A 61 К 39 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕККЫК КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (46) 23,08.90. Бнл, ?",. 31 (21) 3834086/28-14 (22) 27.12.84 (71) Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П. А. Герцена и Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им, Н Г. Габричевского

{72) В. А. Алешкин, Л. И. Новикова и Т. H. Алешкина (53) 615.373 (088.8) (56) iJ. Immunol. Meth>, 1975, 9, 141. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОИ АНТИСЦВОРОТКИ К

ОРОЗОМУКОИДУ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к иммунологии, точнее к иммуноднагностике. Цель изобретения — упрощение способа. Для этого к

100 мл донорской сыворотки добавляют сухой полиэтиленгликоль до 22% концентрации, р Н 5, 6 доводят с помощью 0 1% ного р-ра ацетата натрия, тщательно перемешивают иа магнитной мешалке 24 ч, центрифугнруют 3000 g в течение 30 мин. Супернатант сифонизируют: фракция супернатанта

„.SU„„1381773 А1,дает с антисывороткой к сывороточным белкам крови человека в иммунофорезе 5 дуг преципитацни, соответствующих альбумину, оро зом ухо иду, n1 — антитр и псину, гаптоглоби«у и трансферину. Для идентификации линии преципитации, соответствующей орозомукоидозу, в лунку диаметром 1,5 мм заливают 5 мкл 1,5%-ного раствора лектина нз проростков пшеницы. При электрофоретическом разделении над лункой происходит торможение линии преципитации, соответст.вующей орозомукоиду. Для получения моноспецнфической антисыворотки к орозому. коиду вырезают полосу геля, содержащую соответствующий прецнпитат, многократно отмывают забуференным физиологическим раствором (0,15 М NaCl, растворенный в

0,01 М фосфатном буфере 7,2). Отмытую полоску агарозы солюбизируют в 0,5 мл 6М р-ра йодистого калия. После растворения

0,25 мл полученной суспензии смешивают с равным объемом полного адъюванта Фрейда.- Полученная антисыворотка в иммунном электрофорезе дает по одной полосе преципитацни, соответствующей орозомукоиду, т.е. является моноспецифической.

13817

Формула иэобретения

Изобретение относится к нммунологнн, в чвстностн к нммуноднвгHocTlfKc.

Целью нзобретення является упрощение способа.

К 100 мл донорской сыворотки добав5 ляют сухой полнэтнленглнколь до 22% концентрацнн, рН доводят до 5,6 с помощью

0,1 Я-ного раствора ацетата натрия, тщательно перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 ч прн комнатной темпе- 10 ратуре, центрнфугнруют прн 3000 g в теченне 30 мня. Супернатант снфоннзнруют н нспользуют дальше. Фракция супернатанта дает с антнсывороткой к сывороточным белкам крови человека в нммунофореэе

5 дуг прецнпнтацнн, соответствующнх альбумину, орозомуконду, а1-антнтрнпснну, гаптоглобнну н трансфернну. В дальнейшем фракцию, содержащую перечнсленные выше белки, нспольэуют в линейном нммуноэлехтрофорезе (который проводят в веронал-меди- ро наловом буфере с молярностью 0,06 н рН

8,6 прн напряжении 2 В/см), где белки указанной фракции с антнсывороткой ко всем сывороточным белкам человека образуют 5 линейных полос прецнпнтацня, расположенных на разном удалении от. баэнсной линии. ,Нля идентификации линии прецнпнтацни, соответствующей орозомуконду, в лунку диаметром 1,5 мм, находящуюся на удаленнн 5 мм от полоски геля, содержащего антнген, заливают 5 мкл 1,5о -ного раствора лектнна нэ проростков пшеницы (любого вида). Прн электрофоретнческом разде73

2 ленни над лункой с лектнном ..пронсходнт торможенне линии яреанпнтвцян, соответствующей орозомуконду. Для получения моноспецнфнческой антнсывороткн к орозомуконду вырезают полосу геля, содержащую соответствующнй прецнпитат, многократно отмывают эабуференным фнзнологнческнм раствором (представляющнм собой 0,15 М хлорнстый натрий; растворенный в 0,01 N фосфатном буфере рН 7,2), отмытую полоску агарозы солюбнлнзнруют в 0,5 мл 6 М раствора йодистого калия. После полного растворения 0,25 мл полученной суспенэнн смешивают с равным объемом полного адьюванта Фрейда. Цикл иммунизации кролнков состоит нз трех подкожных ннъекцнй по 0,5 мл суспензнн с интервалом в 10 дней. Забор крови пронэводят íà 10-й день после последней иммунизации.

Полученная таким образом антнсыворот ка в нммунном электрофореэе дает по одной- полосе преципнтации, соответствующей ороэомуконду, т.е. является моноспецнфн. ческой.

Способ получения моноспецнфнческой антнсывороткн к ороэомуконду человека путем нммуннэацнн животного нммунным комплексом, содержащим орозомуконд, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, нспольэуют нммунный комплекс, реагирующий с лектином, полученным нэ про0ост ков и шен и цы.

Составитель Г. Крюкова редактор В. Трубченко Техред И. Верес Корректор М 1Ьароши

За ка з 3088 . Т«ра х 543 . Подписное

ВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж--35, Гаушская наб., д. 4/5

Производственно-поли рафиче кое предприятие, г. Ужгород, ул Проектная, 4