Способ определения количества жизнеспособных клеток в сушеных дрожжах

 

Изобретение относится к микробиологии и аналитической биохимии, в частности к способам определения количества жизнеспособных клеток в сушеных дрожжах. Целью изобретения является ускорение процесса определения . Способ заключается в том, что сушеные дрожжи суспендируют в дистиллированной воде, затем центрифугируют в пробирке, на дне которой находятся параллельные к стенкам электроды , при 1800-4000 об/мин в течение 2-7 мин, после чего измеряют электропроводность уплотненных между электродами дрожжевых клеток и по калибровочной кривой определяют количество жизнеспособных клеток, 1 ил. 1 табл. i СЛ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4123725/31-13 (22) 25.09.86 (46) 30.03.88. Бюл. М 12 (71) Латвийский государственный университет им. П.Стучки (72) И.В.Скардс, Е.П.Райпулис, И.N.Карлсон и М,Б.Крузе (53) 663.18(088.8) (56) Кудрявцев Ю.Б. Радиобиология.

Практикум общей биофизики, вып. VI.

М.: Госиздат "Высшая школа", 1972, Пименов М.Н., Грегушкина Н.Н., Азова Л.Г. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Изд. Московского университета, 1971, с. 220. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА

ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ КЛЕТОК В СУШЕНЫХ

ДРОЖЖАХ

„„SU„„1384615 А1 (5ц 4 С 12 Q 1/06//(Ñ 12 Q 1/06, С 12 К 1:865) (57) Изобретение относится к микробиологии и аналитической биохимии, в частности к способам определения количества жизнеспособных клеток в сушеных дрожжах. Целью изобретения является ускорение процесса определения. Способ заключается в том, что сушеные дрожжи суспендируют в дистиллированной воде, затем центрифугируют в пробирке, на дне которой находятся параллельные к стенкам электроды, при 1800-4000 об/мин в течение

2-7 мин, после чего измеряют электропроводность уплотненных между электродами дрожжевых клеток и по калибровочной кривой определяют коли- д ф чество жизнеспособных клеток. 1 нл.

1 табл.

615

1 1384

Изобретение относится к аналитической биохимии и микробиологии, в частности к способам определения количества живых клеток сушеных дрожей.

Цель изобретения — ускорение процесса определения.

Способ заключается в том, что степень электропроводности уплотненных до постоянной величины электропроводности регидратированных дрожжевых клеток зависит от количества живых клеток. При более высоком количестве неживых клеток наблюдается большая электропроводность уплотненной дрожжевой суспензии, так как пространство между суспендированными дрожжевыми клетками увеличивается и оно содержит больше электролитов. Межклеточное пространство увеличивается, если оболочка клетки не способна деформироваться, что свидетельствует о повреждении клетки. При одинаковом межклеточном пространстве электропроводность повышается, если из клетки диффундирует больше электролитов, что свидетельствует о том, что мембраны клетки повреждены в процессе высушивания дрожжей.

Таким .образом, электропроводность уплотненной суспензии сушеных дрожжей свидетельствует о количестве живых клеток.

Сушеные дрожжи суспендируют в дистиллированной воде, перемешивают до получения однородной суспензии, затем центрифугируют в пробирке, на дне которой находятся параллельные к стенкам электроды. Центрифугирование проводят при оборотах центрифуги 18004000 об/мин, диаметр ротора ЗО см, внутренний диаметр центрифужной пробирки 20 мм, расстояние между элект" родами 1,5 мм. Затем измеряют электропроводность уплотненных между электродами дрожжевых клеток при 5 кГц, используя мост для измерения. полной проводимости, и по калибровочной кривой определяют количество живых клеток.

Проводя измерения при 5 кГц, ка-. либровочный график строят, откладывая на оси абсцисс активную электропроводность уплотненной водяной суспензии сушеных дрожжей, измеренной

О при 18-20 С, а на оси ординат — количество живых клеток в процентах от общего числа дрожжевых клеток, которое определяется методом витального окрашивания. Для статической достоверности результат анализа каждого образца получен путем подсчета не менее 1000 дрожжевых клеток, В случае измерения электропроводности при 500 кГц калибровочный график строят, откладывая на оси абсцисс соотношение реактивной и активной электропроводностей, измеренных при

500 кГц и 18-20 С, а на оси ординат — количество живых клеток в процентах от общего числа дрожжевых клеток.

Центрифугирование проводят при оборотах центрифуги 1800-4000 об/мин.

При оборотах ниже 1800 об/мин клетки между электродами недостаточ20 но уплотняются, в результате чего ,между клетками остается пространство, участвующее в электропроводимости без участия клеток, что не позволяет достигнуть постоянную электропровод25 ность и дает искаженные результаты.

При оборотах центрифуги выше

4000 об/мин клетки могут дополнительно повреждаться, в результате чего между электродами может оставаться

30 только мембранный материал без электролитов; что также вызывает, неточные результаты ..

Время центрифугирования должно быть 2-7 мин. При меньшем времени центрифугирования не достигается уплотненность клеток, при которой электропроводность становится по.стоянной.

При центрифугировании выше 7 мин

40 может изменяться электропроводность уплотненной суспензии, так как в результате жизнедеятельности из клетки в анаэробных условиях могут выделяться органические кислоты, увели4> чивающие электропроводность, что приводит к неточным результатам.

Способ поясняется конкретными примерами.

Пример 1. 40 мг сушеных дрож50 жей суспендируют В 1 мл дистиллироо ванной воды при 18-20 С, перемешивают в течение 2 мин и центрифугируют в течение 5 мин. Затем определяют активную электропроводность уплотненной при 5 кГц между электродами водяной суспензии сушеных дрожжей, которая равна 0,3 10 /Ом см. По калибровочному графику определяют количество живых клеток, которое равно 80Х.

1384615

Пример 2, 60 мг сушеных дрожжей суспендируют в 1,5 мл дистиллированной воды при 18-20 С и проводят определение как в примере i. Электропроводность равна 1,0 10 /Ом см

-з 5 и количество живых клеток соответственно 20%.

Пример 3. 80 мг сушеных дрожжей суспендируют в 2 мл дистиллированной воды и проводят определение аналогично как в примере 1. Электропроводность равна 0,6- 10 /Ом см и количество живых клеток соответственно 43%. 15

Пример 4. 40 мг сушеных дрожжей суспендируют в 1 мл дистиллироо ванной воды при 18-20 С, перемешивают в течение 2 мин и центрифугируют в течение 7 мин. Затем определяют 20 соотношение реактивной и активной электропроводностей уплотненной между электродами водяной суспензии сушеных дрожжей при 500 кГц, которое равно 0 35. По калибровочному графику (см. чертеж) определяют количество живых клеток, которое равно 577.

Пример 5. 60 мг сушеных дрожжей суспендируют в 1,5 мл дистиллированной воды и проводят определение аналогично как в примере 4. СоотношеПримечания

Электропровод- Количестность, 1/Ом -см во живых клеток,7

Опыт

0,4 10

2000

0,30 10

0,31 ° 10

0,30 1О

0,31 10

0,29 10

2000

2000

2000

2000

81

2000

0,32 10

2000

Время цент- Скорость центрифугиро- рифугирования, вания, мин об/мин ние реактивной и активной электропроводностей равно 0,50 и количество живых клеток соответственно 80%.

В таблице представлены данные определения содержания количества живых клеток в сушеных дрожжах в зависимости от времени и скорости центрифугирования. Определение проводилось как в примере 1.

Таким образом, использование предлагаемого способа сокращает процесс определения содержания живых клеток в сушеных дрожжах до 15 мин.

Формула изобретения

Способ определения количества жизнеспособных клеток в сушеных дрожжах, предусматривающий приготовление водной суспензии дрожжей и расчет количества жизнеспособных клеток, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса определения, суспензию дрожжей центрифугируют в течение 2-7 мин при 18004000 об/мин, измеряют электропроводность уплотненных дрожжевых клеток и по ее величине рассчитывают коли-. чество жизнеспособных клеток с учетом предварительно построенного калибровочного графика.

64 Электропроводность меняется, результаты искажены

1384615

Продолжение таблицы

0,38 10

Увеличивается элект2000 ропроводность, результаты искажены

0,36 10

1700

1800

2000

3000

4000

0,20 10

4500

14 вышенные

О У! ф OP nP e$06 07 0,809 fP rf щ- /дм сп

Составитель В.Голимбет

Редактор Н.Киштулинец Техред g.Ходанич Корректор И.Зрдейи

Заказ 1383/20 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4

0,30 10

0,31 10

0,29 10

0,30 10

Клетки недостаточно уплотнены, результаты неточные

Клетки в процессе центрифугирования повреждены; результаты неточные — по