Способ определения нв @ -антигена

Авторы патента:

Изобретение относится к прикладной иммунологии, предназначено для вирусологии и эпидемиологии при профилактике гепатита В. Цель изобретения - повышение чувствительности метода, удешевление и более широкая его доступность для клинических лабораторий. Для этого проводят адсорбцию специфических иммуноглобулинов на твердой подложке. Затем проводят отмывку и инкубацию препарата с антигепом и конъюгатом специфических антител с пероксидазой. В качестве твердофазного и.ммуносорбепта применяют целлофановые диски 01 ±0,2 см, на которые наносят специфические иммуноглобулины в концентрации 1±0,2 мг/мл. Метод позволяет обнаружить НВз-антиген в сыворотках и плазме больных вирусными гепатитами с целью определения этиологического фактора инфекции и установления диагноза заболевания, а также для контроля препаратов крови (гамма-глобулина, иммуноглобулина, протеина , альбумина и др.) с целью отбраковки образцов, контамированных вирусом гепатита В. € (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 б 01 N 33 535

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4124767)28-14 (22) 26.09.86 (46) 07.07.88. Бюл. ¹ 25 (71) Горьковский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (72) Л. М. Пинчук (53) 615.373 (088.8) (56) J. Clin. Pathol., 1976, v. 29, р. 873 вЂ” 879. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НВ -АНТИГЕНА (57) Изобретение относится к прикладной иммунологии, предназначено для вирусологии и эпидемиологии при профилактике гепатита В. Цель изобретения вЂ” повышение чувствительности метода, удешевление и более широкая его доступность для клинических лабораторий. Для этого проводят ад„„Я0„„1408374 А 1 сорбцию специфических иммуHоглобулинов

«а твердой подложке. Затем проводят отмывку и инкубацию препарата с антигеном и кон ьюгатом специфических антител пероксидазой. В качестве твердофазного иммуносорбента применяют целлофановые диски ф1 +-0,2 см, на которые наносят специфические иммуноглобулины в концентрации 1+-0,2 мг)мл. Метод позволяет обнаружить НВ -антиген в сыворотках и плазме больных вирусными гепатитами с целью оНределения этиологического фактора инфекции н установления диагноза заболевания, а также для контроля препаратов крови (гамма-глобулина. иммуноглобулина, протеина, альбумина и др.) с целью отбраковки образцов, контамированных вирусом гепа- Я тита В.

1408374 тическую плотность раствора с помощью фотометрирующего устройства или на спектрои фотометре при длине волны 490 HM. Для подтверждения специфичности реакции проводят реакцию нейтрализации, в этом случае в конъюгат добавляют 2о/о антисыворотки о (в контроль вЂ” 2 /о нормальной сыворотки). а Уменьшение интенсивности окрашивания в

2 вЂ” 2,5 раза по сравнению с контролем указывает на специфический характер реакции. с 1р Предлагаемый способ апробирован на участке по производству иммунодиагностикумов для определения НВ -антигена. Чувствительность анализа составляла не менее е 0,4 вЂ” 0,5 мг/мл HB Ag, в пробе по известнох му способу 0,5 вЂ” 1,0 мкг/мл. Сорбционная

15 емкость целлофана превышала емкость поо листироловых планшетов не менее чем в а 3 раза. м Метод высокоспецифичен и позволяет получать четкие количественные данные.

Кроме того, метод доступен, так как результаты могут у.читываться визуально. Непрои реагировавшие компоненты легко отмываются с целлофана после каждого этапа анализа. Целлофан, представляющий собой отр . мытую от примесей гидратцеллюлозу, является дешевым, прочным и широко доступным материалом. Для целей иммуноферменть ной реакции может быть использован целлофан любой марки, выпускаемый отечесм твенной промышленностью. х 30 Метод расширяет возможности иммуноферментного анализа и позволяет более широко использовать его в клинике вЂ” эпидей миологической и гематологической службе для диагностики и профилактики гепатита В.

Фо рл(ул а изо б ретен ия

Изобр T(. IIH(. относится к прикладной им

kiyiIo;!off!!I и может найти применение в вр русо;(о! ии и эпидемиологии для диагностик профилактики гепатита В. Метод позво (<(яет обнаруживать НВ -антиген в сыворо1

Itнх tt ttëÿçttå болнпагх аирусггыии гепатит:

7и с целью определения этиологическог аитора ttHtf)t.Ktttttt tt устаиоаленин диагноз аболевания, а также для контроля препа

1атов крови (гамма-глобулина, иммуно ,1обулина, протеина, альбумина и др.) селью отбраковки образцов, контамироваг

ых вирусом гепатита В.

Цель изобретения вЂ” повышение чу! ствительности метода, удешевление и боле широкая его доступность для клинически (абораторий.

Поставленная цель достигается тем, ч в качестве твердофазного иммуносорбент применяют целлофановые диски диаметро

1+ 0,2 см, на которые наносят специфичес кие иммуноглобулины в концентрации 1:

+-0,2 мг/мл.

/1рил! ер, Диски целлофана ди и метро около 1 см (размер дисков зависит от диа метра емкостей, в которых производят ма

I ипуляции с ними) помещают в раство спсч(ифических иммуноглобулинов (анти

11Вд ) в концентрации мг/мл в фосфатно солсвом буфере (ФСБ) рН 7,2---7,4 на ноч (18 вЂ” 20 и) при температуре (+2) вЂ” (+4) (.

11осле отмывки водой или ФСБ с 0,05 /о-ны твнна-20 диски инкубируют в раствора анти(еll2 или с исследуемыми пробами в те

20 I ifpff комнатной температуре (для это цс..(и могут быть использованы любые стек 18!IIII)I(и 7H пластиковые емкости). После промывки диски выдерживают в растворе ко(гькп ата анти-НВ -пероксидаза 1 ч при

37+-1 С и после т(цательной стгмывки вЂ” в, растворе энзимсубстрата (0,005 /о-ная lfeрекись водорода в 0,1 М фосфатно-цитратном буфере рН 5,0 с 0,04 /о орто-фенилендиамипа). IIpH наличии антигена в пробе диски тотчас окрашиваются в ярко-оранжевый или коричневый цвет, контрольные пробы остаются бесцветными. Реакцию останавливаюг через 30 вЂ” 40 мин 2 М раствором серной кислоты. При необходимости количественного учета реакции измеряют оиСпособ определения НВ -антигена, включающий адсорбцию специфических иммуноглобулинов на твердой подложке, отмывку, инкубацию с антигеном и конъюгатом специфических антител с пероксидазой, оценку результатов проводят по появлению специфического субстратферментного окрашивания, отличаюи(ийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве

45 твердой подложки используют целлофановые диски.

С<)ci a<<31<7< лв В.

I)c I;

hl II l I II (И Г )е л«реги<и <и)< t) кочи)егii (.< .(! Ilo лелин изобретений и открытии ! З()З)5, .ЧОСКВг<, Ж вЂ” З5, !)с<ун)ЕКс)я

Изобретение относится к медицине , а именно к иммунохимии, предназначено для анализа ангиотензина II в биологических жидкостях

Способ иммуноферментного определения прогестерона в сыворотке крови человека и животных // 1381402

Изобретение относится к акушерству , точнее к способам количественного определения прогестерона в сыворотке крови животных и человека, касается дифференциальной диагностики бесплодия и контроля за его лечением

Способ прогнозирования осложненного течения инфаркта миокарда // 1379739

Изобретение относится к медицине , точнее к кардиологии, предназначено для прогнозирования рецидивов инфаркта миокарда (ИМ) в остром периоде с помощью иммунологических исследований в клинической практике

Способ диагностики эхинококкоза // 1332233

Способ определения антигенов и антител // 1291155

Изобретение относится к иммунологии и предназначено для одновременного определения 2-х антигенов

Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена // 1158933

Иммуногенная композиция против боррелиоза лайма, способ иммунизации млекопитающего против боррелиоза лайма, способ получения белка pc borrelia burgdorferi, диагностический агент для обнаружения b.burgdorferi и способ обнаружения антител к b.burgdorferi // 2102081

Изобретение относится к предотвращению болезни Лайма у млекопитающих

Способ обнаружения или количественного определения аналита в образце // 2102759

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Диагностическая композиция для определения сифилиса и тест- система "аквасиф" на ее основе // 2137138

Изобретение относится к медицине, а именно к препаратам для диагностики сифилиса методами иммуноферментного анализа

Диагностический набор реагентов "cis-тест" для выявления ишемической болезни головного мозга млекопитающих // 2146826

Способ диагностики бруцеллеза // 2152035

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу иммуноферментной диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Способ диагностики иерсиниозов // 2152037

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано в медицинской практике для иммуноферментной серодиагностики кишечного иерсиниоза, вызванного различными серовариантами Yersinia enterocolitica

Способ диагностики стероидрезистентности у больных бронхиальной астмой // 2187816

Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для решения вопроса об эффективности терапии глюкокортикоидными гормонами и подбора адекватной дозы препаратов глюкокортикоидных гормонов у больных бронхиальной астмой (БА)

Способ определения антител к антигену реовирусного теносиновита кур // 2192012

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано для определения специфичных антител к реовирусу теносиновита кур методом иммуноферментного анализа

Способ дифференциальной диагностики геморрагического и ишемического инсульта // 2195671

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии

Способ прогнозирования течения ишемического инсульта // 2195672

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии