Способ получения кислоторастворимого коллагена из плаценты

 

Изобретение относится к биотехнологии, точнее к способам получения коллагена для медикабиологических целей, может быть применено в биологии, биотехнологии, медицине. Цель изобретения - увеличение выхода кислоторастворимого коллагена из плаценты. Для этого гомогенизируют исходную ткань, обрабатывают ее протеолитическим ферментом, обрабатывают 0,02 - 0,05%-ным р-ром версена 48 - 72 ч, центрифугируют, осадок обрабатывают 0,25 - 0,5% р-ром трипсина 48 - 96 ч, затем осаждают коллаген 5 - 10%-ным этиловым спиртом при pH 5,0 - 6,0.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способам получения коллагена для медикобиологических целей и может быть использовано в биологии, биотехнологии и медицине. Целью изобретения является увеличение выхода кислоторастворимого коллагена. Поставленная цель достигается тем, что в известном способе получения коллагена из плаценты, включающем гомогенизирование исходной ткани, обработку ее протеолитическим ферментом, экстракцию коллагена уксусной кислотой и его осаждение, гомогенизированную исходную ткань последовательно обрабатывают растворами версена и трипсина перед экстракцией коллагена и осаждение коллагена проводят этиловым спиртом. При этом ткань обрабатывают 0,02-0,05%-ным раствором версена в течение 48-72 ч и 0,25-0,5%-ным раствором трипсина в течение 48-96 ч. Осаждение коллагена этиловым спиртом проводят при рН 5,0-6,0 и конечной концентрации этилового спирта 5-10% при этом рН доводят водным раствором аммиака. П р и м е р 1. Плаценту человека (400 г сырого веса) гомогенизируют, отмывают водой от крови. Оставшуюся ткань (200 г сырого веса) подвергают обработке 0,02%-ным раствором версена в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,4, в течение 48 ч при 4^оС. Полученную массу центрифугируют в течение 30 мин при 3500 об/мин. Супернатант отбрасывают. Осадок обрабатывают трипсином (2,5 г на 1 л буфера) в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,4, в течение 48 ч при 4^оС. После центрифугирования супернатант отбрасывают, а осадок обрабатывают 0,5 М раствором уксусной кислоты в течение 48 ч при 4^оС. Из полученного экстракта осаждают коллаген охлажденным этиловым спиртом, добавляя последний до конечной концентрации 10% Перед осаждением экстракт подщелачивают водным раствором аммиака до рН 5,0. Осадок коллагена отделяют центрифугированием при 3500 об/мин в течение 40 мин, растворяют его в 0,5 М растворе уксусной кислоты и диализуют против 0,05 М уксусной кислоты в течение 24 ч. Выход лиофилизированного кислоторастворимого коллагена из 400 г плаценты (сырого веса) составил в данном случае 4,1 г, т.е. практически весь коллаген, содержащийся в плаценте, был переведен в кислоторастворимую форму и выделен. При получении коллагена известным способом выход кислоторастворимого коллагена составляет не больше 75% от массы всего коллагена, содержащегося в плаценте. К тому же коллаген, полученный этим способом, хуже по качеству, т. к. щелочная обработка вызывает дезамидирование глютамина и аспарагина. П р и м е р 2. Получают коллаген из 400 г плаценты (сырой вес) так же, как описано в примере 1, за исключением того, что отмытый гомогенат исходной ткани обрабатывают 0,05%-ным раствором версена в течение 72 ч, затем 0,5%-ным раствором трипсина в течение 96 ч, а осаждение коллагена из уксуснокислого раствора проводят при рН 6,0 охлажденным этиловым спиртом при конечной концентрации спирта 5% Выход сухого кислоторастворимого коллагена из исходного материала составил 4,03 г. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить выход кислоторастворимого коллагена по сравнению со способом-прототипом на 30% и почти на 100% по сравнению со способами-аналогами. Кроме того, предлагаемый способ по сравнению со способом-прототипом не ухудшает нативные свойства получаемого коллагена, т.к. не вызывает дезамидирования входящих в него молекул аспарагина и глютамина.

Формула изобретения

Способ получения кислоторастворимого коллагена из плаценты путем ее гомогенизации, обработки ферментом с последующей экстракцией коллагена уксусной кислотой и осаждения, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, плаценту перед экстракцией дополнительно обрабатывают 0,02 0,05% -ным раствором версена в течение 48 72 ч и 0,25 - 0,5%-ным раствором трипсина в течение 48 96 ч, а целевой продукт осаждают 5 10%-ным раствором этилового спирта при рН 5,0 6,0.