Способ определения прогрессирования хронического гепатита и цирроза печени

 

Изобретение относится к медицине , в частности к гепатологии,. и предназначено для диагностики прогрессирования патологического процесса в печени. Цель изобретения - повышение точности способа. Для этого проводят многоступенчатую биопсию печени под общим внутривенным наркозом с применением миорелаксантов короткого действия, что предотвращает трав-, мирование паренхимы печени, забирают 3-4 мл печеночной крови, параллельно 4°С, забирают 3-4 мл периферической венозной крови. Из обеих проб центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина вьщеляют лимфоциты, отмывают их дважды фосфатным буфером, доводят конечную концентрацию до 10 млн. клеток в 1 мл. В пробирки бе-, рут 50 мкл клеточной взвеси, добавляют 10 мкл конъюгированных с флуоресцином моноклональных антител, реагирующих со специфическими рецепторами натуральных киллеров (NK-клеток). Взвесь инкубируют 1 ч при сделанные нативные мазки исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа. В каждом препарате считают не менее 200 кл.: в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (NK-клетки), микроскоп ставят в режим освещения видимого спектра и определяют число лимфоцитов. Из .общего числа лимфоцитов вычисляют относительное содержание Ж-клеток, при его превышении в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью на 7,97% и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени , а при повышении на 1,44% и менее - непрогрессирующий патологичес кий процесс. с S

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (б1) 4 A 61 В 10/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ! (21) 4163910/28-14 (22) 18. 12.86 (46) 07.09.88. Бюл. Р 33 (71) Вильнюсский государственный университет им. В.Капсукаса (72) М.Й.Крикштопайтис, Г.К.Грибаускас, Ю.К.Калибатас и В.А.Усонис (53) 615.476(088.8) (56) Leavy G.À., Chisary F.V. The immunopathogenesis of chronic HBV induced liver disease. In: Immunological

aspects liver disease. Springer ver1ag Berlin, Heidelberg, N.V. 1982, р. 159-17 9. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОГРЕССИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА И ЦИРРОЗА

ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии,, и предназначено для диагностики прогрессирования патологического процесса в печени. Цель изобретения — повышение точности способа. Для этого проводят многоступенчатую биопсию печени под общим внутривенным наркозом с применением миорелаксантов коротко: го действия, что предотвращает трав-. мирование паренхимы печени, забирают

3-4 мл печеночной крови, параллельно забирают 3-4 мл периферической венозной крови. Из обеих проб центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина выделяют лимфоциты, отмывают их дважды фосфатным буфером, доводят конечную концентрацию до

10 млн. клеток в 1 мл. В пробирки бе-, рут 50 мкл клеточной взвеси, добавляют 10 мкл конъюгированных с флуоресцином моноклональных антител реа1

1 гирующих со специфическими рецепторами натуральных киллеров (NK-клев ток) . Взвесь инкубируют 1 ч при 4 С, сделанные нативные мазки исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа.

В каждом препарате считают не менее а

<О

200 кл.: в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (NK-клетки), микроскоп ставят в режим освещения видимого спектра и определяют С число лимфоцитов. Из общего числа лймфоцитов вычисляют относительное содержание NK-клеток, при его превышении в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью на 7,97Х и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени, а при повышении на 1,447. и менее — непрогрессирующий патологический процесс.

1421309

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии, и может быть применено при диагностике прогрессирования патологического процесса в печени.

Цель изобретения — повышение точности способа, Способ осуществляется следующим образом. 1G

У больного во время: проведения многоступенчатой пункционной биопсии печени забирают 3-4 мл печеночной крови. Многоступенчатую биопсию печени проводят под общим внутривенным 15 наркозом с применением миорелаксантов короткого действия, что позволяет избежать возможного травмирования паренхимы печени, связанного с дыханием больного. Прокол печени делают на 2G уровне средней подмьппечной линии в

9-10 межреберье двойной иглой, состоящей из наружной иглы (канюли), которую оставляют в печени и внутренней иглы для взятия биоптата печени, которая на 15 мм длиннее наружной и легко вталкивается в просвет наружной иглы.

Внутреннюю иглу с биоптатом извлекают из печени, а канюлю оставляют в 30 печени и через нее собирают в пробирку 3-4 мл печеночной крови. Если кровь не течет, канюлю медленно извлекают, пока в канюле. не появляется кров ь. После забора, необходимого для исследований количества печеночной крови, в канюлю вставляют электрод диатермокоагулятора и производят электрокоагуляцию пункционного канала. Это исключает возникновение любых послеоперационных осложнений.

Параллельно с печеночной кровью забирают 3-4 мл периферической венозной крови из локтевой вены.

Из обеих проб крови стандартным методом центрифугирования.в градиенте плотности фиколл-верографина выделяют лимфоциты, дважды отмывают их фосфатным буфером и доводят окончательную концентрацию до 10 млн. кле- > ток в 1 мл. В маленькие силиконированные пробирки микрошприцем берут

50 мкл клеточной взвеси и добавляют

10 мкл конъюгированных:с флуоресцеином моноклональных антител, реагирующих со специфическими рецепторами натуральных киллеров (NK-клеток).

Взвесь инкубируют в течение 1 ч при температуре 4 С, после чего делают нативные мазки и исследуют их при помощи флуоресцентного микроскопа. В каждом препарате считают не менее

200 кл.: сначала в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (NK-клетки), после чего микроскоп переключают на режим освещения видимого спектра и в том же поле зрения оп1 ределяют общее число лимфоцитов. Из общего чи=ла гимфоцитов вычисляют относительное содержание NK-клеток.

При повышении относительного содержания NK-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической ве-, нозной кровью на 7,97% и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени, а при повышении относительного содержания NK-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью на 1,44% и менее равно как и при отсутствии повышения или даже уменьшении определяют непрогрессирующий патологический процесс.

Пример 1. Больной Ш.А.3, номер .истории болезни 17663.86, поступил в гастроэнтерологическое отцеление с жалобами на боли в правом подреберье, чувство полноты в желудке после употребления жирной пищи, общую слабость, повышенную раздражимость, утомляемость, с диагнозом направления: цирроз печени. При осмотре больного отмечена увеличенная на 2 см ниже реберной дуги чувствительная при пальпации печень обычной консистенции. Из анамнеза известно, что больной злоупотребляет алкогольными напитками. После лабораторного обследования констатировано: общий анализ крови — гемоглобин 112 г/л, лейкоцитов 6,9 х 10 в литре, эоз. 5, п.яд.4, сегм.44, лимф.42, мон.6, СОЭ 16, время свертывания крови — начало 5 мин, конец 5 мин 30 с, Общий белок

80,9 г/л, альбумины 51,2%, глобулины альфа.1 5,7%, альфа 2 9,8%, бетта

15,4%, гамма 17,9%„ Бетта ли опротеиды 4800 г/л. Холестерин 4, 1ммольл.

Аланиновая аминотрансфераза

0,28 ммоль/л ч. Щелочная фосфатаза

0,24 ммоль(л ч, Анализ мочи - норма.

Эхоскопическое исследование печени: печень и селезенка увеличены, увеличено отражейие эхо-сигнала по всей печени, расширен диаметр. портальной вены. Для уточнения диагноза .проведена многоступенчатая биопсия печени, 309

3 1421 во время которой взят материал для морфологических исследований, а также

1 печеночная и периферическая венозная кровь для параллельного исследования содержания NK-клеток. Установлено „ .что в периферической венозной крови содержание NK-клеток составляло

35,86Х, что могло бы указывать на активное прогрессирование патологическо-10 кого процесса. В параллельном исследовании печеночной крови найдено

18,93X NK-клеток. На основании резкого (на 16,9 ) снижения содержания

NK-клеток в печеночной крови по срав-15 нению с периферической венозной кровью бьло констатировано снижение активности патологического процесса в печени. Повторное комплексное клинико-лабораторное обследование боль- 20 ного, а также анализ морфологического исследования биоптата печени полностью подтвердили правильность поставленного диагноза, Пример 2, Больная Б.В-Б.Т, 25 номер истории болезни 2161.86, поступила в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на боли в правом подреберье, общую слабость, повышенную раздражимость, утомляемость, вре-30 мечами появляющийся зуд, желтизну глаз, с диагнозом направления: хронический гепатит. При осмотре больного обнаружена легкая желтизна склер, умеренно увеличенная (2 см ниже реберной дуги), чувствительная при пальпации печень плотной консистенции. Результаты некоторых лабораторных исследований: общий анализ крови — гемоглобин 117 г/л, лейкоци-* тов 4,5 х 10 в литре, эоз.1, п.яд.2, сегм.67, лимф.26, мон.3 СОЭ 15, время свертывания крови — начало 4 мин

30 с, конец 4 мин 50 с. Общий белок

69 г/л, альбумины 48,2 ., глобулины . 45 альфа i б,б, альфа 2 6,6, бетта

16,0 ., гамма 22,6 . Билирубин общий

15,7 мкмоль л (связанный — 9,0, свободный — 6,7). Бетта липопротеиды

5500 г/л. Холестерин 7,4 ммоль/л.

Активность аланиновой аминотрансфе.разы 0,98 ммоль/л.ч, щелочной фосфатазы 2,5 ммоль/л-ч. Для уточнения диагноза произведена многоступенчатая пункционная биопсия печени с парал55 лельным взятием печеночной и периферической венозной крови для определения содержания NK-клеток. Содержание

NK-клеток в периферической крови

25,16Х, а в печеночной — 33,13 (разница 7,97 ). На основании увеличения содержания NK-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью диагностировано прогрессирование патологического процесса в печени. Повторное комплексное клинико-лабораторное исследование, а также морфологическое исследование биоптата печени полностью подтвердило достоверность диагноза, поставленного на основании предлагаемого способа.

Пример 3. Больной У.В.Л., номер истории болезни 4005.86, поступил в 3-е терапевтическое отделение с жалобами на сильную слабость, чувство полноты в правом подреберье, резкое увеличение объема живота, желтизну кожи и склер, одышку. При осмотре больного кожа и видимые слизистые умеренно желтушны, на коже туловища — усилен сосудистый рисунок, видны "звездочки" ° При пальпации печень резко увеличенная, бугристая, выступающая из-под правого подреберья на 10 см . Селезенка увеличена, отчетливо констатируется асцит, Предварительный диагноз: цирроз печени, возможно — рак печени. Данные лабораторных исследований: общий анализ крови — гемоглобин 139 г/л, лейкоцитов 6,9 х 10 в литре, эоз.2, сегм.52, лимф.40 мон.6, СОЭ 32.

Протеинограмма: общий белок 86,01, альбумины 47,2, альфа 1 4,5, альфа

2 9, О, бетта 16, 9, гамма 22, 4 . Холестерин 6,7 ммоль/л. Бетта липопротеиды 8000 г/л. Билирубин 34, 2 мкмоль/л.

Активность аланиновой аминотрансферазы 1,98 ммоль/л ч, аспарагиновой аминотрансферазы

0,14 мкмоль/-..÷. Для уточнения диагноза проведена многоступенчатая пункционная биопсия печени с параллельным взятием печеночной и периферичес кой венозной крови для определения

NK-клеток. Содержание NK-клеток в периферической венозной крови—

29,72 ., а в печеночной — 57,68 (pasница 27,9 ). На основании резкого увеличения содержания NK-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной определено резкое прогрессирование активности патологического процесса в печени„ Последу1 ющее комплексное клинико-лабораторное обследование, а также морфологическое

Составитель А.Лычкова

Техред А.Кравчук Корректор Л.Патай

Редактор Г.Волкова

Заказ 4355/2

Тираж 655

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

1421309 6 исследование пунктата печени полно- Формула изобретения стью подтвердили достоверность диаг- Способ определения прогресснрованоза. ния хронического гепатита и цирроза печени путем определения относитель5

Таким образом, предлагаемый способ,ного содержания натуральных киллеров позволяет на 47,6Х точнее определить в периферической венозной крови, о тпрогрессирование активности патологи- л и ч а ю ш и и с я тем, что, с цеческого процесса в печени по сравне- лью повышения точности способа, панию с известным и теМ самым заблаго- 1О раллельно определяют содержание навременно начать активные лечебные ме- туральных киллеров в печеночной крорОприятия тем больвым, у которых ви и при повышении их содержания на предвидится прогрессирование активно- 7,977 и более в печеночной крови по сти патологического процесса в пече- сравнению с периферической венозной ни, сократить случаи неблагоприятных 1б кровью, определяют прогрессирование исходов, коррегировать лечение ° патологического процесса.