Способ определения гепарина в крови
Изобретение относится к медицине , предназначено для раннего выявления нарушений противосвертьшающей системы крови, связанных с изменением величины резервного внутриклеточного гепарина, способного вьщелиться в кровоток у больных с различной патологией. Цель изобретения повышение точности способа за счет выявления резерва гепарина в клетках крови . Для этого пробу венозной крови обрабатывают лактобактерином в концентрации не менее 0,33 мг/мл, отделяют плазму инкубированием и центрифугированием . Затем добавляют раствор тромбина и измеряют время свертывания плазмы в сравнении с контролем. Разница во времени указывает на количество свободного гепарина в крови. S (Л
СО)ОЗ СОНЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 С 01 N 33 48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2 1) 4072730/28-14 (22) 28.05 ° 86 (46) 07 ° 10.88. Бюл. У 37 (71) Казанский медицинский институт им.С.В.Курашова (72) С.Ç.Габитов, И.Г.Салихов, Л.А.Лушникова, Г.Э.Улумбекова и P.Â.Þíóñoâ (53) 612.015(088 ° 8) (56) Справочник по клиническим лабораторным методам исследования./Под ред.проф.Е.А.Коста — H. Медицина, 1975, с. 104-105. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ГЕПАРИНА
В КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине, предназначено для раннего выявления нарушений противосвертывающей системы крови, связанных с изменением величины реэервного внутриклеточного гепарина, способного выделиться в кровоток у больных с различной патологией. Цель изобретения — повышение точности способа эа счет выявления резерва гепарина в клетках крови, Для этого пробу венозной крови обрабатывают лактобактерином в концентрации не менее 0,33 мг/мл, отделяют плазму инкубированием и центрифугированием. Затем добавляют раствор тромбина и измеряют время свертывания плазмы в сравнении с контролем. Разница во времени указывает на коли(О чество свободного гепарина в крови, 1429025
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для раннего выявления наруп1ений противосвертываюЩей системы крови связанных с измеЭ 5 нением величины резервного внутриклеточного гепарина, способного выделиться в кровоток у больных с раз:личной патологией (сердечно-сосудис:той системы, органов дыхания, почек 1ð и др.) °
Цель изобретения — повышение 1 очности способа за счет выявления резерва гепарина в клетках крови.
Способ осуществляют слецующим образом,.
В две силиконированные пробирки
0,3 мл раствора цитрата натрия (О, 11 11) набирают 3,0 мл венозной кровиo свободно вытекающей Н3 HI лы, ::и тщательно перемешивают трехкратным
l переворяч11<вя11ием пробирки „прикрытой полиэтиленовой пробкой, В первую проб1<рку добявля10т 0,,3 мл лактобакте рина в концентрации ".0 мг/мл, во вто-25
; рую 0,.3 ип физиологического раствора„
1 и внов1- пробирки < щят ель1! О переме111и-!, 1за1<>т ... Пробирки по1-1е11<яют пя 30 мин в термостят;ц11 С, После инк у б ации пробирки с кровью центрифугируют при
1000 об/мин в те:. = <ие 110 мин. В полу-; e "н н ых О б р я я3 ц а х пл я 3 м ы и .. . p з о и и Б T О рои 1<робирок Определяют содержание . .«-nяр. .1ня r!:О методу Сирмаи 3. Для это-!
1 О в -".ã;.flaò:lö.:ollíy10 <<роби1зку Отмери—,1яют О,. О .. OI ф<зиопоги 1е . g мощя1<г в .,Оцяную б;.1<о при 37,",, «epes 30 с 1 31<бя11л;, ют О, 1 мл раствора TpoM бина (ipo: зводствя (яу11.:<сского предт<рияти1; бактериологических препаратов Пяуч lp-исследовягельcKoM HHcfHTVTе эпидеми011ОГ." !и.. 11икрОбиолОГии и гиг1<е11ы) в 1 РасТаоо fvoìáè -l"", в такой концентрации должР fl снерты1зять О I мп пля:.3Mbl здо рового чеповекя, разбавленной в 0,05 мл физиологи-<еского раствора, за 30 с, В другую аггютапионную про50 бирку отмери1зяют О., 1 мл пз яз. <ы и 0,05 мл раствора Iолуидинового синего в концентрации 1 мг/мл,, Пробирку помещают в водяную баню при 37 С, чере 1 30 с до<загуляют О,Д1 мл рябочет.о ряст-. :зоря тромбиня и отмечают время свер<ЫВЯНЯЯ ПЛЯЗМЫ,. Ряз;1ица во времени свертывания в! iQpBovi и Во второй аггютационных пробирках указывает на количество;-в ободного гепарина в крови. В плазме крови первой пробирки, куда был добавлен лактобактерин определяется величина всего геп рина крови, участвующего в регуля ии состояния противосвертывающей системы гемостаза, а в плазме крови второй пробирки (без лактобактериана) величина свободного гепарина крови. Разницу количества гепарина плазмы крови первой и второй пробирок составит резервный внутриклеточный гепа- рин. Гепарин определяли двумя способами: известным (С.З.Сирмои) и предлагаемым. Одновременно ставили паракоагуляционные пробы: Р-нафтоловая проба по методу Cuiiliiiine Н,, Lyons R.À, (1948 r) эталоновая проба по методу Breen F.A., Tallis G.L. (1969 г), общий фибриноген по P,À.Ðóòáåðãó (1961 r), записывали тромбоэластограмму на приборе "Гемокоагулограф ГКГМ 4". Пример 1. Исследовали кровь здоровой женщины 25 лет, Величина гепарина плазмы, определенная по известному способу, составили 4 с, а плазмы, полученной из крови, подвергнутой действию лактобактерина, 7,4 с. Следовательно, величина всего гепарина крови. Определяющего состояние противосвертывающей системы, равна 7,4 с, количество свободного гепарина 4 с, а содержание резервного внутриклеточного гепарина 7,4-4 = 3,4 с. Паракоагуляционные пробы были отрицательными, величина общего фибриногена составила 2,7 г/л, время R тромбоэластограммы 6 мин 38 с. Пример 2, Исследовали кровь больного 63 лет с диагнозом: ишемическая болезнь сердца, стабильная стенокардия напряжения 2 функционального класса, Н ст. Величина гепарина плазмы крови, не подвергнутой действию лактобактерина, составила 4,2 с, а плазмы, полученнои из крови, подвергнутой действию лактобактерина, 11 с. Следовательно, величина всего гепарина крови, участвующей в регуляции состояния протиьосвертывания, будет равно 11 с, свободного гепарина крови 4,2 с, а резервного внутриклеточного 11-4,2=6,8 с. Этанолова проба (одна и-. паракоагуляционных проб) была положиз 1429025 тельной на 2 плюса, величина общего лагаемому сп;-собу позволяет устанофибриногена составила 4,8 г/л, а вить активацию противосвертывающей время R тромбозластограммы 4 мнн 45 с. системы за счет повьппения синтеза Из приведенных примеров видно, внутриклеточного гепарина, что в сравнении со здоровым человеком у больного (пример 2) наблюдалась ак- ф о р и у г а и з о б р е т е н и я тивация свертывания крови: положительный результат этаноловой пробы, Способ определения гепарина в кро-. це рация общего фибрино- 10 ви путем отделения плазмы, инкубации FeHB сокращенное время R TpoM60 ее при 37 С добавления раствора тро;— эластограммы. Однако по величине сво- бина с последующим измерением времени бодного гепарина, исследованного по свертывания плазмы в сравнении с известному способу трудно отметить контролем, o < л и ч 2 и щ II и с я изменение состояния противосвертывания,5 тем, что, с целью повьппеt:Its точности крови у больного: содержание гепарина способа за счет выявления peзерва у больного не отличалось от такового гепарина в клетках крови. перед оту здорового человека (пример 1). делением плазмы кровь обрабатывают Оценка состояния противосвертыва- лактобактерином в кокцентрац tlt не ющей системы крови больного по пред- менее 0,33 мг/мл. Составитель А. Агуреев Редактор С. Пекарь Техред И.Дидык Корректор Л. П2-.2А Заказ 5118/41 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д . 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, Проектная, 
