Способ гистохимического определения йода

 

Изобретение относится к гистохимии . Цель изобретения - количественное и локальное Определение связанного йода в тканях щитовидной железы. После депарафиннрования срезы обрабатывают 0,4-0,5 М раствором гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде при температуре 20-24 С. Проводят реакцию на сульфгидрильные группы, фотометрируют и по разности оптической плотности между исследуемым и контрольным препаратами определяют содержание связанного йода. Способ можно использовать при изучении изменений функции щитовидной железы при различных состояниях организма. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

993 А I

09) О1) 1 11 4 G 01 N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

00 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3930922/28-14 (22) 12,07,85 (46) 07.11.88. Бюл. В 41 (71) Иркутский государственный медицинский институт (72) М,К.Васильцов, Л.А.Иванова, С.П.Федосеева, и А.М.Васильцов (53) 615.475(088.8) (56) Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная,- М.: ИЛ, 1962, с,725, (54) СПОСОБ ГИСТОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЙОДА (57) Изобретение относится к гистохимии. Цель изобретения — количественное и локальное Определение связанного йода в тканях щитовидной железы, После депарафинирования срезы обрабатывают 0,4-0,5 М раствором гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде при о температуре 20-24 С. Проводят реакцию на сульфгидрильные группы, фотометрируют и по разности оптической плотности между исследуемым и контрольным препаратами определяют содержание связанного йода. Способ можно использовать при изучении изменений функции щитовидной железы при различных состояниях организма,1 табл.

1 1435993 2

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и касается количественного определения содержания йода в гистологических препаратах.

Цель изобретения — количественное определение связанного йода в тканях щитовидной железы.

Способ осуществляют следующим образом. 10

Для исследования в . та щитовидная железа новорожденного i, бенка, Fe фиксируют в нейтральном ормалине.

Время фиксации 24 ч. Посл фиксации препарат промывают в про i ной воде в 15 течение времени, равного в э .мени фиксации. Обезвоживают в спир ах восходяЩей концентрации. Пропитывакт смесью спирт-хлороформ. Помещают í расплав <енный,парафин на 30-45 мин, перено" 20 сят во второй расплавленный парафин йа 4-6 ч и заливают в формочки. Депарафинируют срезы. Инкубируют 30 мин при 20-24 С в 0,5 M растворе сульфита натрия. Промывают в трех сменах дистиллированной воды по 3-5 мин в кая<дой. Промокают срезы фильтровальной бумаги. Наносят на срезы 2-3 капли

0,4-0,5 М раствора гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде. Инкубируют 30

3-7 мин при 20-24 С под тягой. Остатки реактива стряхивают со стекла в насыщенный водный раствор сульфата ме-. ди. Промывают срезы в семи сменах дисI тиллированной воды по 2-3 мин в каждой, Затем проводят выявление сульфгидрильных групп по известному ме- . тоду, Помещают стекла со срезами в бюкс о и заливают нагретым до 70 С раство" ром 2, 2-диокси- 6, 6-динафтилдисульфида (ДДД) в ацетат-вероналовом буфере (рН 8,5), переносят бюкс со срезами в термостат 50"С и инкубируют

60 мин, Охлаждают до комнатной температуры быстро промывают в дистиллированнои воде и инкубируют в двух сменах дистиллированной воды, подкисленной уксусной кислотой до рН 4,0-4,5, по

5 мин в каждой, Экстрагируют свободные нафтолы в спиртах восходящей концентрации и затем промывают в течение 1О мин в трех порциях эфира, Помещают срезы в 70-градусный спирт (2 мин), затем промывают в дистиллированной воде.

Окрашивают в течение 2 мин при комнатной температуре свежим раствором прочного синего, Промывают в проточной воде, Обезвоживают срезы в спиртах восходящей концентрации, просветляют в двух сменах ксилола и заключают в канадский бальзам. Фотометрируют контрольный препарат (содержание сульфгидрильных групп) и препарат, исследуемый на содержание йода (сульфгидрильные группы исходные с сульфгидрильными группами, эаместившими йод). По разности оптических плотностей контрольного и исследуемого препаратов на содержание йода определяют содержание йода в условных единицах.

В таблице приведены данные о содержании йода в структурах щитовиднбй железы ребенка.

Из таблицы видно, что предлагаемый способ позволяет количественно определить содержание йода в различных структурах щитовидной железы.

Предлагаемый способ в отличие от известных позволяет провести количественное определение йода в гистологическом препарате щитовидной железы и тем самым может быть использован при диагностике заболеваний щитовидной железы, при изучении ста.новления ее функции в онтогенезе, синтеза гормонов, патогенеза различных заболеваний щитовидной железы, изменений ее функций при различных состояниях организма, механизма влияния различных лекарственных веществ с целью коррекции ее функций при раз личной патологии самого органа и организма в целом., формула и э о б р е т е н и я

Способ гистохимического определения йода, включающий приготовление парафинового среза, его депарафинирова ние, окрашивание, обезвоживание и заключение в канадский бальзам, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью количественного и локального определения связанного йода в тканях щитовидной железы, после депарафинирования срезы обрабатывают 0,4-0,5 И раствором гидросульфида натрия в диметилсульфоксиде в течение 3-7 мин о при 20-24 С. проводят реакц по на сульфгидрильные группы, фотометриру1435993 ют и по разности оптической плотнас- препаратами определяют содержание ти между исследуемым и контрольным связанного йода.

Яоллеатраоал тнроцлта

Содераа аае Яод

° клета

Содераа нле Яод в Ьоллнк ле трааиа коллолде 1

S1> ))од еатраааа ооеданнтала

° оЯ ткала

$Н + ) Sh йод

+ 1 SII Яод

О, 319> О, 1564 0,0635 о„ззз о,г81

0,29Ь

0,334

0,293

0,323

О ° 180

0,214 о,г»

О,)ОО

О, 224

О,)ЗО

0,012 0,011 0,009

Полеречлололооатаа а>ае о>аа ткана (поперела>7) орет волокон) аоадаатраллл

S8 + ) 0,508+0,011

8Н - О,44ОЯО,ОО7

Яод 0,068+0,008

0,271

0,293

0,287

0 323

0,384

0,284

0,090

О, 140

0,240

О,) 21

О, 096

О, 198

5164+ 0,420+ 0,162+ 0,257+ )391,17+ 0,309+ 0>)92+ 0,))зе

1005 9I О 036 0,014 О 24 365 08 О 010 О 007 О 012

1),07+

1 ° 29

Составитель М.Позняк

Техред К.Моргентал Корректор I- .)))екмар

Редактор Н.Тупица

Заказ 5639/42

Тираж 847

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауаская набев д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

) 1913 66

4679>82

6167,43

5208,03

3743,91

1337 1l

1029>56

7019, 84

5264,88

4011 ° 34

758 1, 41

40 l I > 34

0,526

0,555

4), 503

О, 215

О, 576

0 332

О,257

0,433

0,605

О,З74 о,г)2

0,454

0,346

О, 34 I о,грг

0, ) 15

0,352

0,202

О, 167

О, 293

0,365

0,253

О,)04

0,256

41 22>13

1595,84

1800,89

598 ° 92

)З)7,86 гзо,)

171,94

2056,81

192),68

)014,87

796,05

1026,50

0,208

О, 186

0,185

О,200

0,)66

0,)6)

0,168

0,159

О,)79

0,202

0,233 о,254

0,125

О, 095

0,)11

О,134

О,)27

О,) 62

О,)ОЭ

0,о9Я.

О,)О8

0,1г1

О,)51 о,озо

13,21

10, 04

11 ° 74

14 ° 16

)3,42

17>12

10,88

9,94

10,41

12,79

I5 9Ü

3,17