Способ моделирования эпилепсии
Изобретение относится к экспериментальной медицине. Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа. Животным в течение 20-25 дней ежедневно однократно вводят субконвульсивную дозу коразола. На стадии развития эпилептиформных проявлений удаляют головной мозг у животных и замораживают его. Замороженную ткань помещают в гомогенизатор с уксусной кислотой и вьщерживают в кипящей бане. Ткань диспергируют,Суспензию охлаждают и центрифугируют. Доводят рН надосадочной жидкости до 7,0. Осадок отделяют фильтрованием и полученный раствор лиофилизируют. На кору головного мозга животных апплицируют полученные кристаллы.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„1444872 А 1 (51) 4 G 09 В 23/28
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 4226928/28-14 (22) 26.01.87 (46) 15.12 ° 88, Бюл. В 46 (71) Одесский медицинский институт им. Н,И.Пирогова (72) Г.Н.Крыжановский, А.А.Шандра, Л.С,Годлевский, P.Ô.Ìàêóëüêèí, М.IO.Êàðãàíîâ и В.К.Луценко (53) 615.476 (088.8) (56) Karpiak S.Е. et а1. Autiserum
to brain gaugliosides produces reccurrent epileptiforue activity. Scie«nce 1969, 194, 660-662, (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭПИЛЕПСИИ (57) Изобретение относится к экспе-, риментальной медицине. Цель изобретения — повьппение воспроизводимости способа, Животным в течение 20-25 дней ежедневно однократно вводят субконвульсивную дозу коразола. На стадии развития эпилептиформньтх проявлений удаляют головной мозг у животных и замораживают его. Замороженную ткань помещают в гомогенизатор с уксусной кислотой и выдерживают в кипящей бане. Ткань диспергируют.Суспензию охлаждают и центрифугируют.
Доводят рН надосадочной жидкости до
7,0. Осадок отделяют фильтрованием и полученный раствор лиофилизируют.
На кору головного мозга животных апплицируют полученные кристаллы.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ." .::...,,,/
1444872
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть ис- ° пользовано для изучения патофизиологических механизмов развития эпилеп- 5 тич е с к ог о синдр o MR .
Цель изобретения — повышение вослроизводимости способа.
Способ осуществляется следующим образом. 10
Крысам в течение 3 недель ежеднев" но однократно вводят субконвульсивную дозу коразола (25-30 мг/кг).При этом отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от 15 единичных миоклонических вздрагиваний отделъных мышц до повторяющихся клонико-тонических судорог с падением животных на бок, вегетативными.расстройствами и постприступной депрес- 20 сией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируюту удаляют головнои мозг с моз жечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при -20 С. 25
Замороженную ткань помещают в гомогенизатор, содержащий 1 М уксусную кислоту, нагретую до 90 С, гомогенизатор выцерживают 5 мин в кипящей бане, а затем диспергируют ткань стеклянным 30 пестиком 10 мин {9). В некоторых опытах используют экстракцию хлороформ-. метанольной смесью (10), Суспензию охлаждают и центрифугируют при
10000 об/мин 15 мин (К-24). Надосадочную жидкость отбирают и доводят рН до 7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют фильтрованием, полученный раствор лиофилизируют. Полученные кристаллы аппли- 40 цируют на кору головного мозга экспериментальных животных. Наблюдают развитие в зоне аппликации эпилептических потенциалов типа спайковых разрядов, а также острых волн. 45
Пример 1. Крысам линии Вистар массой 250-300 r в течение
20 дней ежедневно однократно внутри-, брюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (30 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпи.пептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-тонических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией, На этой стадии развития эпи" лептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при
-20 С. Замороженную ткань помещают о в гомогенизатор, содержащий 1 М укC? сусную кислоту, нагретую до 90 С,гомогенизатор выдерживают 5 мин в кипящей бане, а затем диспергируют стеклянным пестиком 10 мин. Суспензию охлаждают и центрифугируют нри
10000 об/мин 15 мин. Надосадочную жидкость отбирают и доводят РН до
7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяют фильтрованием, полученный раствор лиофилизируют.
Полученные кристаллы хранят при
-20 C. Кошке весом 2,7 кг под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 2,5 ч после прекращения подачи эфира на переднюю сигмовидную извилину апплицируют кристаллы экстракта. Через
5,5 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 500-800 мкВ и частотой 7-10 в секунду, а также острых волн амплитудой 500-700 мкВ, возникающих с частотой 1-4 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов длительностью
10-15 с, Пример 2. Крысам линии Вистар массой 250-300 г в течение 25 дней ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (30 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпи- лептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до повторнйя генерализованных клонико".тонических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией, На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при
-20 С. Замороженную ткань помещают в гомогенизатор, содержащий 1 М уксусную кислоту нагретую до 90 С,гомогенизатор выдерживают 5 мин в кипящей баке, а затем диспергируют атеклянным пестиком 10 мин. Суспензию охлаждают и центрифугируют "-при
10000 об/мин 15 мин. Надосадочную
1444872 жидкость отбирают и доводят рН до
7,0 концентрированным раствором аммиака. Осадок отделяит.фильтрованием, полученный раствор лиофилизируют. Полученные кристаллы хранят при
-20 С. Крысе массой 290 грамм под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное р переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через
3,0 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга апплицируют кристаллы экстракта. Через 6,0 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амплитудой 400-900.мкВ и частотой
7-10 в секунду, а также острых волн амплитудой 400-600 мкВ, возникающих 2р с частотой 2-3 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов дли"гельностьи 10-20 с.
Пример 3. Крысам линии Вистар массой 250-300 г в течение 20 дней 25 ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (25 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от отдельных миоклоничес- 30 ких вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-тонических судорожных припадков с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постпристунной депрессией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируют, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, а затем готовят экстракт. Полу.ченные кристаллы хранят при -20 С.Кро 40 лику массой 2,37 кг под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 2,5 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга апплицируют кристаллы экстракта. Через
6,5 мин : в чоне аппликации отмеча- яп ется появление спайковых разрядов амплитудой 650-.1000 мкВ и частотой
8-11 в секунду, а .также острых волн амплитудой 500-650 мкВ, возникающих с частотой 2-5 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов длительностью от 5-10 до 20-30 с.
Пример 4, Крысам линии Вистар массой 250-300 r в течение 25 дней ежедневно однократно внутрибрюшинно вводят коразол в субконвульсивной дозе (25 мг/кг). Отмечают постепенное нарастание тяжести эпилептиформных проявлений от отдельных миоклонических вздрагиваний до повторных генерализованных клонико-тонических судорожных приступов с падением животных на бок, вегетативными расстройствами и постприступной депрессией. На этой стадии развития эпилептиформных проявлений животных декапитируит, удаляют головной мозг с мозжечком и стволом мозга, замораживают в жидком азоте и хранят при
-20 С, приготавливают экстракт. Морской свинке массой 280 r под эфирным наркозом проводят трахеотомию, трепанацию черепа, вскрытие твердой мозговой оболочки. Животное переводят на искусственное дыхание путем введения миорелаксантов. Через 3,0 ч после прекращения дачи эфира на лобные отделы коры головного мозга апплицируит кристаллы экстракта, Через
5,0 мин в зоне аппликации отмечается появление спайковых разрядов амттлитудой 400-800 мкВ и частотой 6
10 в секунду, а также острых волн амплитудой 400-600 мкВ, возникающих с частотой 1-5 в секунду, сгруппированных в "пачки" разрядов длительностью 10-20 с.
Предлагаемый способ позволяет воспроизводить модель эпилепсии в
100Х экспериментов, тогда как прототип только в 10-40Х.
Формула изобретения
Способ моделирования эпилепсии путем воздействия веществами пептидной природы на головной мозг экспериментальных животных, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, группе животных дополнительно ежедневно в течение 20-25 дней однократно вводят коразол в субконвульсивной дозе, затем из мозга этих животных выделяют пептиднуи фракцию и производят аппликации этого вещест- ва на кору головного мозга экспериментальных животных.
