Способ коррекции рациона питания кормящих матерей

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологическим исследованиям, проводимым с целью обоснованного выбора элиминационной диеты для кормящих матерей, дети которых страдают пищевой аллергией . Целью изобретения является повышение точности способа. Способ осу-, ществляется следующим образом. В сыворотке крови матери, ребенка и грудном молоке определяют уровень антител к отдельным фракциям молока, яйца, пшеницы, а также выявляют бычий сывороточный альбумин и овальбумин в грудном молоке. Из рациона питания исключают виновные белковые антигены при обнаружении антител к ним в титре 1:40 и выше в сыворотке крови матери и ребенка и 1:8 и выше в грудном молоке. Это в полной мере относится к бычьему сывороточному альбумину и овальбумину, обнаруженному в грудном молоке. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„,SU„, 145531 (59 4 G 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4132326/28-14 (22) 13. 10,86 (46) 30.01,89, Бюл, Ф 4 (71) Институт питания АМН СССР (72) И.Б.Куваева, О.Л.Веселова, К.С.Ладодо и Т.Э.Боровик (53) 615 . 3 73 (088 . 8) (56) Cliè. allergy. 1981, VII, Р 6,, р. 533-539. (54) СПОСОБ КОРРЕКЦИИ РАЦИОНА ПИТАНИЯ

КОРМЯЩИХ МАТЕРЕЙ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологическим исследованиям, проводимым с целью обоснованного выбора элиминационной диеты для кормящих матерей, дети которых страдают пищевой аллер1.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам иммунологических исследований, проводимых с целью обоснованного выбора элиминационной диеты для кормящих матерей, дети которых страдают аллергическими заболеваниями.

Цель изобретения — повышение точности способа коррекции рациона кормящих матерей ° 10

Способ осуществляется следующим образом.

Биологические жидкости — сыворотку крови матери и ребенка и грудное молоко — исследуют в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) для выявления антител к 10 пищевым белкам: казеину, БСА, й, -лактальбуминовой-и

В-лактоглобулиновой фракциям коровьегней. Целью изобретения является повышение точности способа. Способ осуществляется следующим образом. В сыворотке крови матери, ребенка и грудном молоке определяют уровень антител к отдельным фракциям молока, яйца, пшеницы, а также выявляют бычий сывороточный альбумин и овальбумин в груд .ом молоке. Из рациона питания исключают "виновные" белковые антигены при обнаружении антител к ним в титре 1:40 и выше в сыворотке крови матери и ребенка и 1:8 и выше в грудном молоке. Это в полной мере относится к бычьему сывороточному альбумину и овальбумину, обнаруженному в грудном молоке °

2 го молока, овальбумину, овомукоиду и общему яичному протеину, глиадиновой и глютениновой фракциям белков пшеницы и изоляту белков сои, В грудном молоке с помощью реакции торможения непрямой гемаглютинации (РТНГА) и в реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини определяют антигены (овальбумин и БСА), Для постановки РНГА используют

0,2-0,3 мл сыворотки крови. Сыворотку крови разводят стерильным физиологическим раствором 1 5(0,2 мп сыворотки и 0,8 мл стерильного физиологического раствора) . Разведенную сыворотку инактивируют в течение о

30 мин при +56 С в водяной бане для уничтожения термолабильных антител и комплемента, Затем в пробирку г

1455319

40 инактивированной сывороткой добавля ют 50 -ную взвесь бараньих эритроцитов без антигена (по 2 капли 50%-ной взвеси на 1 мл разведенной сыворотки)

5 для абсорбции гетерогемагглютининов.

Пробирку хорошо встряхивают и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. Далее в пробирку добавляют 2 капли 25%-ного раствора каолина для очи- 1р стки от липидных компонентов, Каолином чистят также мутные, долго хра-нившиеся в холодильнике, сыворотки.

Еще через 1 ч сыворотку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10- 15

15 мин, Инактивированную абсорбированную сыворотку хранят в холодильнике не более 2-3 дней, не допуская замер зания.

Образцы грудного молока центри- 2р фугируют в течение 30 мин при

5000 об/мин. Удаляют молочный жир и осторожно, чтобы не попали частицы жира отбирают молочную сыворотку, Грудное молоко разводят физиологическим 25 раствором 1:2 (0,5 мл сыворотки грудного молока и 0,5 мл физиологического раствора) . Далее образцы грудного молока обрабатывают так же, как и сы— воротку крови, при этом очистка мо — 30 лочной сыворотки 25%-ным раствором каолина от липидов является строго обязательной. В противном случае можно получить ложно положительную реакцию а 35

Для постановки микромодификации

РНГА используют 1гикротитратор системы Такачи, содержащий планшеты для иммунологических реакций, микропереноски и микрокапельницы на 25 мкл.

В качестве среды для реакции применяют нормальную кроличью сыворотку (НКС) в разведении 1: 100, которая обеспечивает необходимый белковый минимум для РНГА, 45

Рабочие концентрации эритроцитарных антигенных диагностикумов: О,З ный 0С -лактальбуминовый, 0,3%-ный Ялактоглобулиновый и т.д. Кроме того,используют 0,3%-ный раствор контроль- 50 ных бараньих эритроцитов, не нагруженных антигеном, для контроля зя полнотой абсорбции испытуемой сыворотки от нормальных гетерогемагглютининов к бараньим эритроцитам.

РНГА BHIIQJIHHI0T по общепринятой методике путем двукратного разведения исследуемых образцов начиная с разведения 1: 10 для сыворотки крови и 1:4 для грудного мочока с обязательной постановкой контроля. Результаты РНГА учитывают только при наличии 2 отрицательных контрольных ис- следований. Учет ведется через 2-4 ч по общепринятой 4-крестовой системе, учитывая характер оседания эритроцитов на две лунки. Титром сыворотки считают то ее последнее разведение, которое вызывает агглютинапию эритро-. цитов, нагруженных пищевым антигеном.

Устанавливают диагностически значимые титры антител для сыворотки крови 1:40 и выше, для грудного молока

1:8-1: 16 и выше °

Пищевые антигены в молоке матерей определяют с использованием одного нз

2 методических приемов, в обоих случаях для исследования необходимы гипериммунные кроличьи антисыворотки к указанным антигенам.

Во-первых, используют модифициро— ванный метод определения основных классов иммуноглобулинов сыворотки крови в реакции простой радиальной иммунрдиффузии в агаре. Основное отличие заключается в том, что в агар вносят гипериммунную кроличью янтисыворотку против овальбумина или БСА с содержанием антител в титре не ниже

1:5120. В лунки раскапывают по 4 мкл освобожденного от липидов центрифугированием (5000 об/мин в течение

30 мин) грудного молока и в качестве стандарта ряд разведения белка антигена, пластины инкубируют во о влажной камере 24 ч при +4 С. Затем измеряют диаметр колец преципитации и рассчитывают по стандартной кривой концентрацию антигена в мг/100 мл грудного молока. Чувствительность метода 6,5-10 мг/100 мл, Во-вторых, антигены определяют в РТНГА. Для проведения этого метода требуются те же материалы и оборудование, что и для РНГА, но вместо испытуемой сыворотки в лунки вносят кроличьи антисыворо ки к овальбумину и BCA. РТНГА выполняют следующим образом: в 3 ряда лунок на пластине для микротитрования раскапывают по

25 мкл НКС 1:100, далее раститровы— вают кроличью антисыворотку, содержащую антитела к овальбумину или БСА, затем в первый ряд в каждую лунку, кроме двух последних (2 последние лунки те же контроли, что и в РНГА), вносят по 25 мкл грудного молока в раз5 14553 ведейии 1:2 (инактивированного при

56 С и абсорбированного от гетероге1 магглютининов 50 -ной суспензией бараньих эритроцитов) и 25 мкл 0 ЗЙ° о

5 ной взвеси эритроцитарного антигенного диагностикума к овальбумину или к

БСА; во второй ряд лунок вносят только 25 мкл эритроцитарного диагностиI кума к овальбумину или БСА; после, 10 обычного интервала (2-4 ч) учитывают результаты реакции: в контрольных лунках агглютинация должна отсутствовать: во втором ряду выявляется титр используемой кроличьей антиеыво- 15 ротки (например, 1:2560 или 1:5120), а в первом ряду при наличии антигена в исследуемом молоке число лунок с гемагглютинацией уменьшается. Положительным результатом считают сни- 20 жение титра антител в кроличьей антисыворотке не менее чем на 2 разведения. Например, титр антител в кроличьей антисыворотке (2-й ряд лунок) к овальбумину 1:5120, а при добавлении грудного молока (1-й ряд лунок) титр снизился до 1: 1280 или 1:640 - в данном образце грудного молока при- сутствует овальбумин. Эту реакцию используют для качественного обнаруже- ЗО ния пищевых антигенов в молоке матерей, однако РТНГА при необходимости может быть использована и для количественной оценки.

Пример 1. Ребенок К., 7 мес. находящаяся на смешанном вскармливании (грудное молоко, кефир и овощное пюре), страдает экссудативным диатезом с 1-месячного возраста, кожные проявления аллергодерматоза усили- 40 лись с введением в рацион питания цельного молока и овощного пюре. Аллергоанамнез отягощен (мать страдает лекарственной аллергией). После клинического обследования бып постав- 45 лен диагноз истинной экземы, среднетяжелое течение.

Исследование проводили по предлагаемому способу.

В результате исследования быпи об- 50 наружены антитела в сыворотке матери и ребенка к следующим пищевым антигенам: каэеину 1:160 (в сыворотке крови матери 1:320), бычьему сывороточному альбумину 1:40 и яйцу 1:40.

При анализе полученных данных выявили, что клиническая картина аллергодерматоза у ребенка обусловлена сенсибилизацией пищевыми антегенами, 19 о чем свидетельствовало наличие гемагглютинирующих антетел в сыворотке крови, причем имелась наследственная предрасположенность к заболеванию, так как в сыворотке крови ребенка и матери циркулировали одни н те же антитела к пищевым антигенам. Присутствие антител к яичному белку объяснялось достаточным количеством яичного антигена в грудном молоке (ребенок яйца не получал). Назначение элиминационной диеты ребенку и матери с исключением причинно значимых аллергенов на 2 мес привело к улучшению состояния кожных покровов. Однако и через 2 мес в крови ребенка присутствовали антитела к белкам коровьего молока в низком титре 1: 10 и 1:20.

Включение в рацион питания сливочного масла, содержащего белки молочной сыворотки, вызвало обострение заболевания. Таким образом, эффективность элиминационной диеты должна контролироваться исследованием триады биологических жидкостей матери и ребенка, так как присутствие антител даже в низких титрах является прогностически неблагоприятным признаком.

Пример 2. Под наблюдением находились 139 детей с кожными проявлениями пищевой аллергии, у 587. из них первые признакн аллергического заболевания появились на чисто грудном вскармливании. При кормлении грудью многие матери употребляли избыточное количество молока и молочных продуктов. Резкое обострение заболевания у части детей возникло при первом введении прикорма в виде молочных каш или кефира. Вначале было исследовано 65 пар мать-ребенок (сыворотка крови матери и ребенка), что соответствовало клинико-лабораторному обследованию детей по способу-прототипу, так как в обоих случаях изучали сенсибилизацию организма ребенка и матери, в первом случае к пищевым продуктам, протекающую с образованием IgEантител, во втором случае — к пищевым антигенам с образованием Ig G-антител, которая в большинстве случаев протекала параллельно, Результаты такого обследования позволили выявить в

72,1Х случаев причинно зависимую связь между аллергическим настроем организма матери и ребенка, особенно при отягощенном аллергоанамнезе. Тем не менее у 27,97. обследованных пар матьГ

5319

7 145 ребенок такой прямой зависимости не установлено. В связи с этим у этой группы детей было проведено комплексное иммунологическое исследование сыворотки крови ребенка и матери, а также грудного молока с применением способа диагностики по примеру 1.

Предлагаемым способом обследовано, 47 детей, находящихся в момент иссле-! дования на чисто грудном и смешанном (преимущественно грудном) вскармпива-! нии, из общего числа детей с кожными проявлениями пищевой аллергии.

Для оценки результатов комплекс нои диагностики сенсибилизации орга1 низма пищевыми антигенами учитывали дифференциально-диагностические кри терии, разработанные на группе прак:тически здоровых детей в возрасте от

,6 мес до 1,5 лет (24 ребенка) и взрослых доноров (45 человек), а также на

,.пробах грудного молока от 42 практически здоровых матерей. Титр антител для сыворотки крови от 1:5 до 1:20 считали слабо выраженной сенсибилизацией, что свидетельствовало о проникновении белковых макромолекул через эпителиальный барьер желудочно-кишечного тракта, для грудного молока титр антител 1:2-1:4 также считают нормальным прохождением материнских

:IgG-глобулинов в грудное молоко. Титры антител в сыворотке крови 1:401:80 (умеренно выраженная сенсибилизация) и 1:160- I 320 и выше (резко выраженная сенсибилизация), а для грудного молока 1:8-1: 16 и .выше считают диагностически значимыми титрами ° Наличие антигенов в грудном молоке считают прогностически неблагоприятным признаком. Установлено совпадение степени выраженности кожных проявлений аллергической реакции с предложенными дифференциально-диагностическими критериями. Так, например, частота обнаружения сенсибилизации к яичному протеину. у детей на грудном вскармливании находится в зависимости от степени тяжести заболевания. Из представленных материалов видно, что с возрастанием степени тяжести заболевания возрастала и частота обнаружения диагностически зна 1 чимых титров к яичному протеину.

Для каждого больного ребенка и матери составляли индивидуальную карту обследования сесибилизации пищевыми антигенами (по примеру 1) и лишь после этого назначали патогенетически обоснованную элиминационную диету, Результаты обследования позволили сохранить грудное вскармпивание у

31 ребенка (бб ) после соответствующей коррекции рациона питания матери (снижение или исключение потребления матерью молока и молочных про10 дуктов, исключение яиц и облигатных аллергенов). Коррекция рациона питания матери не дала желаемых результа. тов у 16 детей (34 ). Поэтому у этой группы детей было исключено грудное

15 вскармливание и назначена безмолочная диета с применением детской питательной смеси на основе сои "Изомил" в течение 1,5-3 мес. Постепенно улучшилась клиническая картина

20 заболевания и исчезли из сыворотки крови детей антитела к молочным белкам, что позволило расширить рацион детей с учетом их возрастных физиологических потребностей в белках за

25 счет осторожного включения белков говяжьего мяса и кисломолочных смесей.

При обследовании по способу-прототипу, если в сыворотке крови п6Наруживают специфические IgE-антитела

30 к молоку, яйцам и рыбе, из рациона питания матери полностью исключают указанные продукты, а при выраженности клинических проявлений пищевой аллергии заменяют грудное вскармпиваЗ5 ние на специализированные безмолочные смеси на основе растительных белков, Такой подход увеличивает неблагоприятную тенденцию к снижению грудного вскармливания младенцев.

40 Таким образом, необходимым этапом обоснованной коррекции рациона питания матери является диагностика наличия пищевых антигенов и антител к пищевым белкам в грудном молоке и в

45 крови матери, а также установление их присутствия в крови ребенка на грудном вскармливании. Кроме того, этот метод исследования позволяет выявить такие индивидуальные белки ко50 ровьего молока или яйца, а также рас" тительных продуктов, которые являются причинно значимыми аллергенами в каждом конкретном случае. Это открывает перспективы для технологическо55 го изготовления специализированных продуктов детского питания с исключением тех белков, которые наиболее час. то вызывают пищевую аллергию при пе,реходе ребенка с грудного вскармпива-.

10 ни, так как грудное молоко содержит, помимо пищевых веществ, ряд белксв, обладающих защитными свойствами, таких как лизоцим, лактоферрин, секреторный Ig А и т.д. формула и з о б р е т е и и я ный период не только коровьего моло—

Составитель В.Литовченко

Редактор Л.Пчолинская Техред М.Дидык . Корректор Н.Король

Заказ 7452/53 Тираж 788 Подписное

Ф,ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно †полиграфическ предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

9 14553 ния на смещенное. Например, и на основе коровьего молока можно приготовить альбуминовое молоко, не содержащее В-лактоглобулина, в случае аллер5 гии к яйцу — можно разрешить употребление белка или желтка куриного яйца,, что расширяет пищевой рацион ребенка первых месяцев жизни, при наличии в крови ребенка антител не только к ка- 1О зеину, но и к бычьему сывороточному альбумину элиминационная диета должна строиться с исключением на определен. ка, но и говяжьего мяса и т.д. 15

Перспективным является применение предлагаемого способа для контроля за качеством донорского молока, од— ним из условий качества которого можно было бы считать отсутствие в нем 2о пищевых антигенов как одних из фак— торов риска развития аллергических заболеваний у детей.

Предлагаемое комплексное иммунологическое обследование матери и ре- 25 бенка определяет выбор такой коррекции рациона питания матери, которая позволяет сохранить грудное вскармливание и является профилактикой возникновения аллергических заболеваний у детей раннего возраста при переходе на смешанное вскармпивание. Сохранение естестгенного вскармливания очень важно для детей первого полугодия жизСпособ коррекции рациона питания кормящих матерей, включающий забор крови у матери и ребенка, выделение из нее сыворотки, определение антител к пищевым продуктам и составление элиминационной диеты, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, одновременно определяют антитела в грудном молоке, сыворотке крови матери и ребенка к казеину, w -лактальбуминовой и Б-лактоглобулиновой фракций коровьего молока, бычьему сывороточному альбумину, овальбумину, овомукоиду, общему яичному протеину, глиадин;, глютенину из пшеницы и изоляту белков сои и выявляют наличие овальбумина и бычьего сывороточного альбумина в грудном молоке и при наличии титра антител 1:40 и выше к белкам в сыворотке крови матери и ребенка, при наличии антител в титре 1:8 и выше овальбумина и бычьего сывороточного аль— бумина в грудном молоке корректируют рацион питания кормящих матерей.