Штамм бактерий рsеudомоnаs fluorescens, синтезирующий внеклеточный эмульгатор

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма бактерий PSEUDOMONAS FLUORESCENS В-4097 /GS-ALK/, ПРОДУЦИРУЮЩЕГО ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ ЭМУЛЬГАТОР, КОТОРЫЙ МОЖЕТ БЫТЬ ИСПОЛЬЗОВАН ДЛЯ НЕФТЕОТДАЧИ, ОЧИСТКИ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ И ЕМКОСТЕЙ, ЗАГРЯЗНЕННЫХ НЕФТЕПРОДУКТАМИ, И ДРУГИХ ЦЕЛЕЙ. ЦЕЛЬЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ ЯВЛЯЕТСЯ ПОЛУЧЕНИЕ НОВОГО ШТАММА БАКТЕРИЙ, ПРОДУЦИРУЮЩЕГО НА МИНЕРАЛЬНОЙ СРЕДЕ С ГЕКСАДЕКАНОМ ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ ЭМУЛЬГАТОР, НЕРАСТВОРИМЫЙ В ВОДЕ И НЕ ТРЕБУЮЩИЙ ДЛЯ ЕГО ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ СТАДИЙ ОБРАБОТКИ. ШТАММ КУЛЬТИВИРУЮТ НА МИНЕРАЛЬНОЙ СРЕДЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ ГЕКСАДЕКАН В КАЧЕСТВЕ ИСТОЧНИКА УГЛЕРОДА И ЭНЕРГИИ. ВРЕМЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ 24-48 Ч. ВЫХОД ВЛАЖНОГО ЭМУЛЬГАТОРА 15 Г/Л, СУХОГО 1,4 Г/Л. ЭМУЛЬГИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОДУКТА ОПРЕДЕЛЯЕТСЯ ПО ВЫСОТЕ ОБРАЗОВАВШЕЙСЯ ЭМУЛЬСИИ, КОТОРАЯ СОСТАВЛЯЕТ ЧЕРЕЗ 20 МИН 5 СМ.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„Л0„„1472496

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМ

ПРИ П.1НТ СССР (21) 4278361/31-13 (22) 08.07.87 (46) 15.04.89. Бюл. N- 14 (71) Институт биохимии им. А.Н.Баха (72) М.М.Якимов, В.И.Маслова, А,С..Шульман, И.В.Улезло и. А.М.Безбородов (53) 663.15(088.8) (56) EP 1Ô 0161511, кл. С 12 1)! 1/20, 1985. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS

FLU0BESCENS, СИНТЕЗИРУЮЩИЙ ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ ЭМУЛЪГАТОР (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма бактерий Pseudomonas fluorescens

В-409? (GS-Alk) продуцирующего внеклеточный эмульгатор, который может быть использован для нефтеотдачи, 1

Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма бактерий, способного утилизировать углеводороды (н-алканы) с образованием поверхностно-активного вещества — эмульгатора, который может быть использован для повышения нефтеотдачи высоковязких нефтей со снижением вязкости и облегчения.их транспортировки по трубопроводам, очистки окружающей среды.

Цель изобретения — новый штамм бактерий синтезирующего на минеральной среде с н-алканами внеклеточный эмульгатор, нерастворимый в воде и ,не требующий для его выделения из культуральной жидкости дополнительных стадий обработки, (51)4 С 12 N 1/20, С 12 Р !/О- //

//(С 12 N 1/20, С 12 Н 1:39) очистки окружающей среды и емкостей, загрязненных нефтепродуктами, и других целей. Целью изобретения является получение нового штамма бактерий, продуцирующего на минеральной среде с гексадеканом внеклеточный эмульгатор:, нерастворимый в воде и не требующий для его выделения нз культуральной жидкости дополнительных стадий обработки. Штамм культивируют на минеральной среде, содержащей гексадекан в качестве источника углерода и энергии. Время культивирования 24-48 ч. Выход влажного эмульгатора 15 г/л, сухого — 1,4 г/л.

Эмульгирующая активность продукта д определяется по высоте образовавшей<Ф ся эмульсии, которая составляет через 20 минут 5 см.

С:

Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens ВК ПМ В-4097 (GS ALK) выделен из активных илов сточных вод предприятий микробиологической промышленности с помощью длительной экспериментальной адаптации к н-алканам как единственным источникам углерода и энергии.

Выделенный штамм проверен на активность при хранении и пересевах на неселективные среды.

Штамм Ps. fluorescens GS-А,К имеет следующую характеристику.

Культурально-морфологические признаки.

Среда для хранения — мясо-пептонный агар (МПА). На твердой среде

MIIA штамм образует золотисто-желтые

1472496

4 колонии, а на жидкой — пленочнослизистый рост. Клетки — слегка изогнутые палочки, подвижные (движутся при помощи полярных жгутиков)., грамотрицательные, спор и капсул не образуют. На среде КИНГА и КИНГБ флюоресцирующий пигмент не продуцируется, Длина клеток на МПА и MIIA с 7 . глицерина 1,2-2,4 мкм, ширина

0,8-0,9 мкм, на среде с н-алканами (тетрадекан и гексадекан) клетки имеют длину И 1,0-2,0 мкм, ширину 1 01,2 мкм. На твердой среде (МПА) об" разует слизистые, размером 1,3 мм. золотисто-желтые полупрозрачные колонии, Физиолого-биохимические признаки.

Аэроб, растет при 4 С. Оптимальная температура роста 28 С, рН 6,87,0, Крахмал не гидролизует, При росте на средах, содержащих.:органическую серу, выделяет сероводород.

Обладает каталазной, оксидазной, липазной и уреазной активностью.

Усваивает сахарозу, глюкозу, фруктозу, мальтоэу, арабинозу, лактозу и ксилозу .с образованием кислоты;

Утилизует . аргинин, нафталин, дифенил, алифатические углеводороды с содержанием атомов углерода от С« до С20.

Штамм не патогенен.

Синтез эмульгатора штаммом GS-ALK происходит на средах простых синтетических, не содержащих каких-либо индукторов. Предпочтительным источником азота являются соли аммония.

Кратковременное хранение штамма осуществляется на косяках с MIIA npu

4 С. По истечении 2-3 мес желателен пересев на свежие среды MIIA, Для более длительного хранения штамм по" о мещают либо в кельвинатор при -70 С в 10/-ном растворе глицерина, либо хранят в лиофилизованном состоянии в запаянных ампулах с 12 -ной сахарозой в качестве криопротектора.

Штамм Pseudomonas fluorescens

GS-ALK снособен через 40-48 ч культивирования синтезировать эмульгатор в количестве 15 г/л, из расчета на сухой вес 1,4 г/л. Гексадекан, используемый в качестве единственного источника углерода и энергии, потребляется за это время на 95-98%.

Эмульгатор в культуральной жидкости находится в эмульсионном слое в виде кремообразной массы, легко застывающей при температуре ниже

+10 С, и отделяемый центрифугированием при 0 С (4500 об/мин, 25 мин), Эмульгатор представляет собой сложную смесь нейтральных липидов и гли" колипидов. Сложный состав эмульгато" ра во многом определяет стабильность получаемых эмульсий. Эффект эмульгирования проверен на ряде нефтей.

Эмульгатор в концентрации не более

0,05 способствует образованию стойких эмульсий нефти с водой., Свойства штамма синтезировать эмульгатор иллюстрируются примером,.

Пример. Штамм"Ps. fluorescens GS-ALK выращивают в минеральной среде, содержащей в качестве источника углерода гексадекан. Состав среды, г/л воды: К НРО 4,3;

КН РО 3,4; (NHp)ISO< 2,0; МАМБО w

0,2; CaC) 0,026; МпС1 0,001; РeSO4>

20

«7Н О 0,0006;.NaMoO, ° 2НдО 0,002; гексадекан I, рН 7,0, Стерилизация при 0,5 атм 30 мин. Инокулируют среду культурой, выращенной в течение

24 ч в среде, описанной выше. После двух суток культивирования при 28 С в колбах на 250 мл на качалке, дающей 220 об/мин, отделяют синтезированный эмульгатор.

Эмульгатор в культуральной жидкости находится в эмульсионном слое в виде кремообраэной массы сложного состава, которая легко отделяется ат культуральной жидкости центрифугированием (4 500 об/мин) при 0 С в течение 25 мин.

Таким образом, данный штамм

P. fluorescens GS-ALK при росте на

Выход влажного эмульгатора 15 г/л, из расчета на сухой вес 1,4 г/л.

Определение эмульгирующей активности эмульгатора, Активность эмульгатора образовывать эмульсию определяют следующим образом. 5 мл 0,1 M Na CO> добавляют

5 мл смеси н-алканов (См 2,6;

С у 74 7; С 19 5; С „2 6; С О 6 (g), вносят аликвоту (0,1 мл) эмульгатора и интенсивно перемешивают с помощью миксера в течение 30 с. Активность эмульгатора определяют пери одическим измерением высоты столба образовавшейся эмульсии (см), которая составляет через 5 мин 7 см, 20 мин 6 см.

Составитель 3. Фалунина

Техред М, Дидик Корректор Н. Гунько

Редактор И. Сегляник

Заказ 1673/27 Тираж 501 Подписи о е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101 гексадекане может быть использован для синтеза поверхностно-активного вещества, обладающего эмульгирующей активностью.

1472496 6

Формула изобретения

Штамм бактерий Гвепйопопаз fluorescens BKIIM В-4097, синтезирующий внеклеточный эмульгатор.