Способ определения оплодотворяющей способности спермиев птиц

 

Изобретение относится к области биологии размножения животных, криобиологии и предназначено для оценки способности спермы к оплодотворению. Целью изобретения является повышение точности способа. Для осуществления способа отмеривают в пробирку в соотношении 1 : 2-3 сперму и рабочий раствор флуорохрома. В качестве флуорохрома используют α - нафтиламин. Тщательно перемешивают и наносят на предметное стекло каплю смеси. Накрывают покровным стеклом. Исследуют под люминесцентным микроскопом. Повреждения мембран спермиев, отклонения формы акросом от нормы хорошо различимы. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„„SU„„1475645 (51) 4 А 61 Р 7 /02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПР СС ,, (21 ) 4241244/30-15 (22) 07.05 ° 87 (46) 30.04.89. Бюл. 1 - 16 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) А.В.Терещенко, Н.И.Сахацкий и А.Б.Артеменко (53) 591.463.1:591.166.1 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

9 345919, кл. А 61 D 7/02, 1971.

Авторское свидетельство СССР

У 1329780, по заявке 4035697/30-15, кл. А 61 9 7/02, 1976. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОПЛОДОТВОРЯ10ЩЕЙ СПОСОБНОСТИ СПЕРМИЕВ ПТИЦ (57) Изобретение относится к области

Изобретение относится к биологии размножения животных криобиологии и предназначено для оценки способности спермы к оплодотворению.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, включающему смешивание спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, последующий анализ под микроскопом качества спермиев по состоянию их акросом, в качестве флуорохрома используют Ы -нафтиламин в концентрации

5 "10 -5 10 И, а об оплодотворяющей способности спермы судят по проценту спермиев, не имеющих изменений акросомы.

Пример. Вначале готовят спиртовой (на этиловом спирте) маточный. биологии размножения животных, криобиологии и предназначено для оценки способности спермы к оплодотворению.

Целью изобретения является повышение точности способа. Дпя осуществления способа отмеривают в пробирку в соотношении 1 2-3 сперму и рабочий раствор флуорохрома. В качестве флуоро-, хрома используют 0 -нафтиламин. Тщательно перемешивают и наносят на предметное стекло каплю смеси. Накрывают покровным стеклом. Исследуют под люминесцентным микроскопом. Повреждения мембран спермиев, отклонения формы акросом от нормы хорошо различимы.

1 табл. раствор флуорохрома, содержаший

5 .10 -5 10 э Ы -нафтпламина. Затем риим готовят рабочий раствор флуорохрома, состоящий из 1 части маточного раствора и 100 частей питательной среды (физраствор или среды для разбавле- щ ния, хранения, замораживания спермы).

Непосредственно для осуществления способа отмеривают в пробирку в соот- © ношении 1:2-3 сперму и рабочий раствор флуорохрома (к примеру, берут

0,01 мл спермы и 0,03 мл раствора), тщательно перемешивают и наносят на предметное стекло каплю смеси. Затем эту каплю плотно накрывают покровным стеклом так, чтобы движение спермиев было ограничено. После этого препарат помещают под люминесцентный микроскоп, например 1Л-3. При этом используют возбуждающий свет с длиной †14756

Проинку6 иро вано яиц у шт.

ОплодоКоличество спермиев,, имеющих нормальные акросомы при определении из состояния способом

Группа творенность яиц, известным предлагаемым без учета сомни с учетом сомнительных тельных

81,2

74,6

42,5

41,8

2,3

53

59

47

68

37

71

62

28

61

44

31

14

II

ХХХ

IV

V волны 400 нм, а флуоресценцию наблюдают в области 500-700 нм. Препарат рассматривают под имерсией при увеличении не мейее 90" 15 в отраженном свете. При этом на темном фоне видным светящиеся светло-салатные спермии, у которых четко просматриваются все. составные части от акросомы до хвостика, в том числе границы (кон10 туры) этих частей. .:Повреждения мембран спермиев, отклонения формы акросом от нормы хорошо различимы. Для достижения цели достаточно учитывать лишь состояние акросом спермиев. Та15 ким образом, в поле зрения под микроскопом учитывают число (процент) спермиев с акросомами, не имеющими морфологических изменений, т.е. процент нормальных спермиев. К нормальным относят спермии петуха, акросо20 ! ма которых имеет форму конуса с основанием, совпадаюшим по диаметру с диаметром головки. Все остальные спермии, акросома которых отличается 25 по морфологии (форме) от описанных вьппе нормальных, относят к поврежденным. Предлагаемый способ позволяет учитывать при необходимости по меньшей мере 3 степени повреждения акросомы спермиев: набухшая (имеет ром30 бовидную форму; диаметр, особенно в средней части акросомы, существенно превьппает диаметр головки);; шаровидная (сильно набухшая, до приобретения формы шара); стержневидная (шапочка акросомы утеряна, но сохранился еще ствол). Точно также четко различима еще одна, самая сильная степень повреждения, связанная с полной потерей спермиями акросомы. Однако, как уже отмечалось вьппе, для достижения поставленной цели достаточно лишь учесть процент спермиев, имеющих нормальную акросому. Для этого удобно подсчитывать подряд в поле зрения микроскопа 100 спермиев и одновременно отмечать, сколько из них имеют морфологически нормальные акросомы. При этом затраты времени на анализ образца спермы не превышают 3-5 мин .

Данные сравнительного испытания эффективности прогноза оплодотворяющей способности спермы петухов известным и предлагаемым способами представлены в таблице.

Для проведения испытаний вызывали повреждения акросом путем хранения цельной спермы при комнатной температуре. Для этого получалй сперму от нескольких петухов в один спермоприемник, так как собирали объем, необходимый для осеменения 60 кур (5 групп по 12 голов в каждой). Полученную сперму тщательно перемешивали и использовали для осеменения кур I группы после 10 мин хранения, затем оставшуюся сперму хранили еще

70 мин (80 мин общего хранения) и использовали соответствующую ее часть для осеменения кур II группы. Кур

Ш и IV групп осеменяли затем спермой, хранившейся в течение 140 и

200 мин соответственно. Часть спермы (1/5 часть) сразу же после получения замораживали по повреждающему акросомы режиму и использовали для осеменения кур Ч группы. Непосредственно перед использованием спермы для осеменения кур учитывали в ней число спермиев с нормальными акросомами известным и предлагаемым способами, представленными в таблице.

1475645 лодотворяющей способностью. Коэффициент корреляции 0,97. Продолжительность анализа одного образца спермы

3-5 мин.

Формула изобретения

Составитель А.Филиппова

Редактор В.Ковтун Техред М.Ходанич Корректор Н.Король

Заказ 2098/8 Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Данные показывают, что при использовании известного способа для оценки качества спермы, не подвергающейся сильному повреждающему действию (I-IV группы) и поэтому имеющей слабые повреждения акросом, имеется значительное число (от 1ОЖ по I группе до 24K rio III) спермиев, которые по состоянию акросомы относят к категоФ рии сомнительных. В то же время при оценке спермы, подвергавшейся сильному повреждающему действию (Ч группа, замороженно-оттаянная сперма), сомнительных по состоянию акросом спермиев не обнаружено.

Предложенный способ показал хорошую совпадаемость данных оценки качества спермы с ее фактической опСпособ определения оплодотворяющей способности спермиев птиц, включающий смешивание спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, последующий анализ под микроскопом качества спермиев по состоянию их акрасом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве флуорохрома ис,пользуют о -нафтиламин в концентрации 5.10 4 -5 10 1" .