Способ выделения иерсиний

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике желудочно-кишечных заболеваний. Цель изобретения - ускорение способа. Исследуемый материал засевают в накопительную среду, содержащую 300 мл 6,7 М раствора калия фосфорнокислого двузамещенного, 700 мл 6,7 М раствора калия фосфорнокислого однозамещенного, 5-6 г/л буфера натрия хлористого и 0,04-0,05 г/л буфера магния сернокислого, PH 7,4-7,6. Подращивание осуществляют при 4-8°с в течение 18-24 ч. Затем культуру однократно пересевают на элективную среду, содержащую, г/л: сухая среда эндо 40-50

сахароза 4,5-5

мочевина 0,4-0,5

калий углекислый 0,8-1

калий метабисульфит 0,8-1

желчь сухая 1-1,2

аммоний молибденовокислый 0,8-1

конго красный 0,07-0,08

генцианвиолет 0,014-0,016

вода дистиллированная до 1 л. После 18-24 ч инкубации при 37°с отбирают колонии с темно-красным центром и светлой периферией.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 С 12 q 1/04

ОПИОАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4161935/28-13 (22) 16.12.86 (46) 30.05.89. Бюл, У 20 (71) Днепропетровский медицинский институт (72) П.А.Канищев, М.Л.Горбунова и В.П.Маганчук (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Лабораторное дело, 1980, »» 6, с.367-369. (54) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ ИЕРСИНИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике желудочно-кишечных заболеваний. Цель изобретения — ускорение способа. Исследуемый материал засевают в накопительную среду, содержащую 300 мл 6,7 »» раствора калия фосфорно-кислого двуИзобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике желудочно-кишечных заболеваний.

Цель изобретения — ускорение способа.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Исследуемый ма:териал (испражнения, кровь, слизь из зева, влагалища) забирают эа 2 ч до исследования в стерильные пробирки с 5 мл концентрированной фосфатно-солевой средой накопления, приготовленной из расчета 300 мл 6,7 М раствора калия фосфорно-кислого двузамещенного и 700 мл 6,7 N раствора

Калия фосфорно-кислого однозамещенно„.Я0„„148 944

2 замещенного, 700 мл 6,7 М раствора калия фосфорно-кислого одноэамещенного, 5-6 г/л буфера натрия хлористого и 0,04-0,05 г/л буфера магния серно-кислого, рН 7,4-7,6. Подращио вание осуществляют при 4-8 С в течение 18-24 ч. Затем культуру однократно пересевают на элективную среду, содержащую, г/л: сухая среда эндо

40-50; сахароза 4,5-5; мочевина 0,40,5; калий углекислый 0,8-1; калий метабисулъфит 0,8-1; желчь сухая 11,2 аммоний молибденово-кислЫй 0,81; конго-красный 0,07-0,08; генцианвиолет 0,014-0,016; вода дистиллированная до 1 л. После 18-24 ч инкубао а ции при 37 С отбирают колонии с тем- И но-красным центром и светлой перифеС:

ro с добавлением 0,04 г/л буфера магния серно-кислого и 5 г/л бункера натрия хлористого, рН среды 7,4.

Посев подращивают при 4 С в течение 18 ч. Затем осуществляют однократный пересев на электнвную питательную среду, содержащую г/л: сухая среда Эндо 40, сахароза 4,5, мочевина 0,4, калий углекислый 0,8, калий метабисульфат 0,8, желчь сухая 1,0, аммоний молибденово-кислый

0,8, конго красный 0,07, генцианвиолет 0,014, вода дистиллированная до 1 л, рН среды 7,2.

Перед посевом среду подсушивают.

Посев инкубируют 18 ч при 37 С, после чего отбирают для дальнейшего ис4 4

Результаты исследований показывают, что предлагаемый способ.по сравнению с известным .в более короткий срок позволяет выявлять иерсиннй из исследуемого материала при сохранении высокой чувствительности.

Формула изобретения

Сухая среда Эндо 40-50

Сахароза: 4,5-5 0, Мочевина 0,4-0,5

Калий углекислый 0,8-1,0

Калия метабисулъфит 0,8-1,0

Желчь сухая 1,0-1,2

Аммоний молибденовокислый

Конго красный

Генцианвиолет

Вода дистиллированная До!л и после инкубирования отбирают колонии с темно-красным центром и светлой периферией.

0,8-1,0

0;07-0,08

О, 014-0, 016

Составитель Г,.Смирнова

Техред М.Дидык 4

Корректор С.Шекмар

Редактор М.Недолуженко

Заказ 2785/21 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издателъский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина, 101 з 148294 следования с темно-красным центром и светлой периферией.

Пример 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но s накопительной среде магний сернокислый и натрий хлористый исполь- зуют в количестве 0,045 и 5,5 г/л буфера соответственно, рН среды 7,5.

- Подращивание ведут при 8 С в течение 10

24 ч.

Для приготовления основной среды компоненты исполъзуют в следующнх соотношениях, г/л: сухая среда Эндо

45, сахароза 4,7, мочевина 0,45, ка- 15 лий углекислый 0,9, калия метабисульфит 0,9, желчь сухая 1,1, аммоний молибденово-кислый 0,9, конго красный 0,075, генцианвиолет 0,015, вода дистиллированная до 1 л. После инку- 20 бирования в течение 24 ч отбирают ко лонии иерсиний для дальнейшего исследования, II p и и е р 3. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но 25 в накопительной среде добавки солей натрия хлористого и магния сернокислого берут в концентрации 6,0 и

0,05 г/л буфера соответственно, рН среды 7,6. 30

Пересев осуществляют на элективную среду, содержащую компоненты .в следующем соотношении, г/л: сухая ,среда Эндо 50, сахароза 5,0, моче вина 0,5, капий углекислый 1,0, калия метабисульфит 1,0, желчь сухая

1,2, аммоний молибденово-кислый 1,0, конго красный 0,08, генцианвиолет

0,016, вода дистиллированная до 1 л.

Через 24 ч инкубации отмечается рост 40 колоний пирамидальной формы разме ром 2"3 мм со светлой периферией ,и темно"красным центром.

Способ выделения иерсиний путем подращнвания исследуемой культуры в фосфатно-буферном реакторе на холоду с последующим пересевом на плотную питательную среду, инкубированием посевов и отбором выросших колоний, о т л и ч. а ю шийся тем, .что, с целью ускорения способа, подращивание осуществляют в фосфатно-буферном солевом растворе, содержащем 300 мл

6,7 И раствора калия фосфорно-кислого двузамещенного и 700 мп 6,7 М растsopà калия фосфорно-кислого однозамещенного, 5-6 г/л буфера натрия хлористого и"0,04-0,05 г/л буфера магния серно-кислого, пересев осуществляют однократно на среду, содержащую, г/л: