Способ криоконсервации спермы птиц

 

Изобретение относится к области биологии размножения животных и может быть использовано в криобиологии и генетике для консервации генетических ресурсов домашних птиц. Целью изобретения является повышение числа функционально полноценных спермиев. Способ заключается в ступенчатом охлаждении разбавленной и эквилибрированной спермы до начала кристаллизации со скоростью 10-20 град/мин, а затем выдерживании в течение 1-3 мин и ступенчатом замораживании до температуры от -16 до -22°С со скоростью 25-30 град/мин, от -80 до -90°С со скоростью 50-70 град/мин и до -196°С со скоростью 30-50 град/мин. Использование способа позволяет увеличить выход функционально полноценных спермиев в 5,5 раз по сравнению с известным способом. Табл. 5.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А") u1) 4 А 61 1) 7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ в г()ЩЩЯ (!Атс 4 Ч". j,- ), ЧЕР.М

E„,)Бд) !О .) А

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР! (21) 4395197/30-15 (22) 22.03 ° 88 (46) 30.11.89. Бюл. М 44 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) Н,И.Сахацкий, А.В.Терещенко, А.Н.Новиков, Т.П.Линник и А.Б.Артеменко (53) 636.082,453 ° 5(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

O 1136806, кл. А 61 D 7/02, 1983. (54) СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СПЕРМЫ

ПТИЦ (57) Изобретение относится к области биологии размножения животных и может быть использовано в криобиологии и

Изобретение относится к биологии размножения животных и может быть использовано в криобиологиии генетике для консервации генетических ресурсов домашних .птиц.

Целью изобретения является повышение числа функционально полноценных спермиев.

Пример. Сравнение известного и предлагаемого способов криоконсервации спермы птиц.

Объектом исследований служила сперма петухов пород белый леггорн, родайланд, полтавские глинистые. Использовалась как смесь, так и индивидуальные эякуляты.

Число поврежденных и функционально полноценных спермиев в оттаянгенетике для консервации генетических ресурсов домашних птиц ° Целью изобретения является повышение числа функционально полноценных спермиев. Способ заключается в ступенчатом охлаждении разбавленной и эквилибрированной спермы до начала кристаллизации со скоростью 10-20 град/мин, а затем выдерживании в течение 1-3 мин и ступенчатом замораживании до, температуры от -16 до -?2 С со скоростью. 2530 град/мин, от -80 до -90 С со скоростью 50-70 град/мин и до -196 С со скоростью 30-50 град/мин. Использование способа позволяет увеличить выход функционально полноценных спермиев в 5,5 раз по сравнению с известным способом. 5 табл. ной сперме определяли по известной методике.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Свежеполученную сперму разбавляют 4, в соотношении 1:1 при комнатной температуре любой из известных защитных сред, например ЛКС-1, и помещают в холодильник при 2-4 С на 45 мин. ,В сперму добавляют криопротектор, например диметилацетамид или диметилформамид и эквилибрируют. В процессе эквилибрации проводят расфасовку спермы, например, в полиэтиленовые пробирки емкостью 0,6 мл, которые при необходимости маркируют, а в одну из них вставляют термопару, подсоединенную к контрольно-измери1524882

)О

:З - 1«ri, <. <.Э <Р

<:. ;н,: - иэмери гельном приборе, ча К< 1 4) приостанавлива<1«..ние температуры,.

<««Н СПЕР<.<Ь, В н. " основанием этих пре<:,«у<1<4 <е э1<спериман i ап<, <с<де.;,:«ке . течение

i =< i! f

< г.ерм".ев <.о<.т<:<в<-<яеv 17,5+5,ь, 1 мин

33,- i 2. 2 м<<н - 2 7,5+4,5:6, 3 мин

2: < . ";,«15. О+5,0,<,, 5 <и<-1

4, 5 (:, - ."".. 1 .<« -,разам, выдержку сг1ермь в гене« » процесса кристаллиэа-4» ции целе.:оо:naэно проводить не более

<л че < «-. нее 1 мин.

В табл, 2,3 и 4 представлены экспериментальные данные по обоснованию граничных пределов скорости замораживания спермы, а также граничных преде,ш,. упеней режима замораживания.

Аору « -апример пс <:=нцио Г" . для контроля эа режимаэ1< <,:, "я и замораживания. Об::шо<о< <<а металлическую под< < -..., . - ю в -B

-."ую<,<1е канистры спермохрани-:îáõoäèèîñòè используют

=:i. †.<<»

<«-;, —:, «»! .<

-(1 предназначено обоснова-.

<:ределов скорости ох-. ..г (! С до начала про < <: < .,.< -< Ц1 < < 1

i <",,i<-. <<р :.д а вле нные ь табл. 1, . э о <. <О) (! 1-оМ, что От 0 С до

-,.< «.< <<<цесса кристаллизации сперму

::р..<:<1<о <.хлаждать со скоростью

<< :«<««»

Представленные в табл. 2,3 и 4 экспериментальные данные свидетельствуют о том, что наибольший выход функционально полноценных спермиев обес печивается при замораживании спермы до (-16)-(-22) С со скоростью 2530 град/мин, затем до (-80)-(-90) С со скоростью 50-70 град/мин и до

-196 C со скоростью 30-50 град/мин.

В табл. 5 представлены результаты сравнительного испытания эффективности криоконсервации спермы петухов известным и предлагаемым способами.

Таким образом, применение предлагаемого способа позволяет повысить выход функционально полноценных спермиев в 5,5 раза.

Кроме того, при использовании предлагаемого способа важно лишь выдержать укаэанные параметры охлаждения и замораживания спермы, объем эамораживаемых образцов, их форма, гип облицовки спермы не имеют значения. Это позволяет в отличие от известноно способа рационально исполь зова гь полезную площадь спермохран;<11.

:,яд<<виду"-,ëüíûõ эякулятов, а следовательно использовать предлагаемый способ в селекционно-генетической работе.

Формула иэобре гения

Способ криоконсервации спермы птиц, включающий ее разбавление, о:;паждение, эквилибрацию, замораживание, хранение в замороженном состоянии, отличающийся тем, что, с целью повышения числа функционально полноценных спермиев, охлаждение спермы осуществляют со скоростью

10-20 град/мин до наступления процесса кристаллизации, выдерживают в течение 1-3 мин, а замораживание осуществляют по ступенчатому режиму: до (-16)-(-22) С со скоростью 2530 град/мин, до (-80)-(-90) С со скоростью 50-70 град/мин и до -196 С со скоростью 30-50 град/мин.

1524882

Та бли ца 1

Спермии с повреждениями, б

ФЭВнккионально пол ноценные спермии, Скорость охлажде ния спермы, град/ акросомы головки

/мин

96,7+0,8

97,0 1,4

91,6+1,8

77,6+1,6

71,6+2,6

69,0+275

78,6 2,0

89,96 2,1

42,2+1,4

40,062,3

35,4 0,2

31,3 0,3

27,7ц-0,5

25, 1 -0, 1

Z6,410,9

24,7+1,1

25,5+0,8

27,2+1,2

3,3+0,8

3,0+1,4

8,4+1,8

22,4+1,6

28,4 2,6

31,0+2,5

21, 4 .2, 0

17 143,0

10, 1+2, 1

7,0+2,1

Таблмца2

Выход оункцнонально полноценных сперм .В,В, I

Скорость ьамораын ванна tt7ti7 мы после кг» осой проведено аамооаммьанне, С

-22 -23 T

Темгюратуоа

Т

-16

-30

-25

-15

-2п

-!з ее крмсталлнзацмй, град/ммн 3,3!3,3

16,143,2

I9,о21,6

27,3+2,7

31,033,5 зо,в з,i

20,3+3,0

21,1+2,2

13,4+2,9

10, 7!

14,9ti,9

19,1!7.

29,7 ;,а

3I.6t1,9

31,763.:В

20,722,1

17,ОЭ2,6

12, 2В 1,а

9.1+I 7

11,9!1,3

16,7т4,1

16,8ВЭ,2

19,4ь),2

16,0В2,7

8,972,2

11,124,3

Та блм ц а 3

Скорост ° аамораммеанмя от (-16) (-22) С, град/ннн

Выход цункцнонально полноценных спермнев, Е

Температура, до котород проведено ааморамнеанме, С

O.ВВ 1 -ВВ (-85 1 -ВВ | -ВВ

-95

-7о

-75

10,3i4,3

9,622,3

1З.7+o,8

15,3+2,7

15,4+1 I

13,4i2,9

11,7 1,1

16,0ь3,2

14.3ь5,5

13,260,8

15,461,7

16,бе3,4

25,645,4

29,624,6

26,0+3,2

16,2+1,4

12,140,7 !

3 ° 0+4,2

11,223,6

17,642,8

13,1+2,5 l6,921 3

l6,1t2,2

1!I. 7t 5,8

13,532,6

I2 ° 3i5i4

12,7ьб,l

12,0+2,2

14,623,4

l7,2+2.9

26,32 4,2

25 233 9

29,7t1,0

15,722,1

12,664,5

12,921,3

22

24

25 га

31

32

4В

72

75 во

7

13

18

22

7,3t2.1

6,5tl,B

10,1нс2, 4

10,8+1,4

8,221,5

7,1t3,6

9,Ю,В

5,4tl,з

4,7+1,5

12Вве1,5

13,526,3

Iз.ot2,2

15, 113,6

13.7t 1,5

13,6+3 ° 9

12,420,4

11, 1-+1,9

ll,4+2,5

9, 2+2,4

11,6ri 7

О .3+2, В

26,1+3,4

30,252,8

29,9t3,9

17.9t3,4

12,5+2,8

13,2 2,4

i 2,3 .9

i5 ВВ2,6

20,!В2,7

22,2 1,6

21,9В2,3

20,232,4

1в,газ,а

15,4 -2,7

12,141,7

15,4+2,3

18,5+3,2

27,3+3,1

26,1+2,4

30, 1+4,8

l6,3i0 5

16, li2,4

l3.6i3,9

13,2+1,6

17,.3t2,1 !

5,3УЭ,О

i5,9t2,4

i7.333,!

1т 163,4

17,5В2,6

17,1 3,9

15,1+2,5

io,iiÇ.3

16,4+1,8

16,4+2,8

15, 7t0,9

16,6+22,3

17,2 1 ° 9

13,3+3,6

11 oil 4

14,514,2

l7,923,5

1б,ос1,4

13,243,2

14,2+2,8

14,1+3,7

15,2+0,6

15,0+2,7

13,423 I

9,8i2,7

12, 124,6

14,1t1, l

12 ° О+1,5 в,бе3,1

12,422, О

10,123,2

12,322,!

10,2+3,4

1524882

Табли ца4

Выход функционально полноценных спермиев, в 3

Скорость замораживания от (-80 (-90) С до

-196ОС, град/мин

С перми и с повреждениями, Функционально полноценные спермии, головки акросомы

Табли ца 5

Биологически (функционально) полноценные спермии, 3

Спермии с повреждениями, К-во изучен- Подвижность ных образ- спермы, цов, шт. баллы

Способ криоконсервации спермы головки, акросомы

Известный 93

Предлагаемый 106

41,7 3,4 90,2+5,4 9,Ы5,4

4,1+0,2

4 3 0,3

23 9+2,1

45,1+7)8 54,9+7 8

Составитель И.Марченко

Техред M,Дидык Корректор Т.Малец

Редактор Л.Веселовская

Заказ 7166/4 Тираж 643 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул.Гагарина, 101

28

52

33 7+2,8

32,0+2,8

23,9+1,9

25,0+1,9

23)9 2)1

l3,3à0,7

21,5+0«9

30,5+0,6

88,2+2,9

88,7+2,0

77,0i2,6

64.9а5,6

45,1+7,8

48,019,9

70,0+4,2

73,6+5,2

11,8+2,9 11 3+2,0

23,0+2,6

33,1+5,6

54,9+7,8

52,0+9,9

30,0 4,2

26)3+5,2