Среда для криоконсервации семени баранов

 

Изобретение относится к области сельскохозяйственного животноводства ,в частности, к искусственному осеменению. Целью изобретения является повышение криорезистентности гамет и стерильности семени. Среда содержит, мас.% : лактозу 7,8-9,6

глицерин 2,4-5,0

желток 8,2-14,2

общие липиды актиномицетов 0,008-0,021

воду бидистиллированную остальное. Среда позволяет повысить подвижность гамет после оттаивания на 0,75 балла, выживаемость на 1,3 ч, антиокислительную активность липидов гамет и их санитарные показатели по сравнению с известной средой ЛГЖ. 6 табл.

СОЮЗ СОБЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИИ (5u 4 А 61 П 7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Э

-и

К Д BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Г21) 4280455/30-15 (22) 07.07.87 (46) 07.08.89. Бюл. М 29 (71) Институт зоологии и физиологии

AH МССР (72) А.M.Ãóñüêoâ, В.А.Наук, M.Ã.Áóêàð÷óê, Ю.М.Казакова, И.В.Тикан, Л.П.Ковальчук, С.А.Бурцева и В.М.Богуславский (53) 636.082.453.5(088.8) (56) Платов Е.М. Замораживание семени барана в лактозо-желточно-этиленгликолевой среде. — Овцеводство, 1965, Ф 9, с. 11-12. (54) СРЕДА ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СЕМЕНИ,БАРАНОВ

Изобретение относится к сельскохозяйственному животноводСтву, в частности к искусственому осеменению овец.

Целью изобретения является повьппение криорезистентности гамет и стерильности семени.

Пример. Для получения среды было подготовлено 5 вариантов состава среды (табл. 1), следующим образом.

В кипяченой бидистиллированной воде растворяли соответствующее количество лактозы, стерилизовали 10 мин на кипящей водяной бане, растворяли о глицерин, охлаждали до 45 С, а затем растворяли соответствующие количества желтка и общих липидов актиномицетов.

Общие липиды актиномицетов (ОЛА) выделяли из биомассы актиномицетов, „„SU„„1498489 А 1 (57) Изобретение относится к области сельскохозяйственного животноводства, в частности к искусственному осеменению. Целью изобретения является повышение криорезистентности гамет и стерильности семени. Среда содержит, мас.7.: лактозу 7,8-9,6; глицерин 2,45,0; желток 8,2-14,2; общие липиды актиномицетов 0,008-0,021; воду бидистиллированную остальное ° Среда позволяет повысить подвижность гамет после оттаивания на 0,75 балла, выживаемость на 1,3 ч, антиокислительную активность липидов гамет и их санитарные показатели по сравнению с известной средой ЛГЖ. 6 табл. например Асс. griseus, экстракцией смесью хлороформ: этанол (2:1) по методу Фолча.

Биомассу Асс. griseus выращивают как кормовую добавку на биохимических заводах по традиционной технологии на стандартных средах. Например, использовалась культуральная среда, содержащая муку кукурузную, мелассу, селитру аммиачную, калий фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый (рН = 7,2-7,8) и штаммы 15, 307-Ф (ВНИИГ), 420 и др. Выход ОЛА из биомассы 4 5-137

Каждый вариант среды испытали в лабораторных условиях на подвижность, выживаемость и абсолютный показатель выживаемости деконсервированных га:мет при 38 С. Результаты представлены в табл. 2.

1498489

Этот состав был испытан в .сравнении с известной ЛГЖ-средой, а также с добавлением в эту среду спермосана-3 (50000 ед. на 100 мл среды), который утвержден в качестве антимикробного препара а для обеззаражи1 вания семени производителей сельскохозяйственных животных. Эффективность. разработанной среды оценивали по устойчивости гамет к температурному шоку, подвижности гамет после разбавления, охлаждения и оттаивания, выживаемости и абсолютному показателю выживаемости деконсервированных га- 20 мет при 38 С, сохранности акросомы гамет после охлаждения и замораживания-оттаивания семени, антиокислительной активности липидов гамет и антимикробнаму действию. Результаты показали, что ЛОЛАГЖ-среда обладает высоким криозащитным и антимикробным дейстВием, обеспечивая высокую эффективность криоконсервации.

Характеристики гамет при различных средах приведены в табл. 4.

Антиокислительная активность липи" дов гамет приведена.в табл. 5, Ветеринарно-санитарные показатели семени представлены в табл. 6.

Высокий криозащитный эффект ОЛА обусловлен их специфическим влиянием иа липидный бислой биомембран, котоСреда для криоконсервации семени баранов, включающая лактозу, глице25 рин, желток куриного яйца и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения криорезистентности гамет и стерильности семени, среда дополнительно содержит общие липиды

30 актиномицетов при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Лактоза 7,8-9,6

Глицерин 2, 4 -5, 0

Желток 8,2-14,2

Общие липиды актиномицетов 0,008-0,021

Вода бидистиллированная Остальное

Таблица 1

Ингредиенты, мас.%

Глицерин Желток Общие липиды актиномицет

Состав среды

Вода бидистиллированная

Лактоза

0,001

0,008

0,015

0,021

0%030

4,4

8,2

11,5

14,2

16,7

0,9

2,4

3,8

5,0

6,0

До 1OO

До 100

До 100

До 100

До 100

6,6

7,8

8,8

9,6

10,4

2

4

Оптимальный состав лактозо-ОЛАглицерино-желточной среды (ЛОЛАГЖ) для криоконсервации семени баранов приведен в табл. 3. рое сопровождается повышением актиокислительной активности липидов гамет. Кроме этого, они обладают большим антимикробным действием.

В лабораторных условиях на протяжении ряда лет испытывались разные штаммы актиномицетов, а также питательные среды самого разнообразного состава и было установлено, что эти факторы влияют на выход антибиотика и ОЛА, но отмеченные колебания в качественном и количественном составе ОЛА не оказывали существенного влияния на их актиокислительиые и антимикробные свойства. Поэтому эффективность ОЛА в указанных дозах не зависит от штамма и среды культивирования..

Формула иэобретения

1498489

Та блица 2

Ингредиенты, мас.7.

Физиологические показатели гамет после деконсервации

Состав среды

ОЛА

Вода бидистил лированная

ЖелГлиЛактоза

Выживае- Абсолютный

Подвижность1 балл церин ток мость, ч показатель ныживаемости, у.е.

До 1ОО

До 1ОО

До 100

До 100

До 100

3,3+ 0,114 6,2+ 0,29 11,21 0, 74

8,8 3,8 14,2 0 До 100

Таблица 3

СодержаИнгредиенты Содержание на 1 л биние, мас.Х дистиллированной воды

8,8

115 r

50 мл

150 мл

О,!8 r

3,8

11,5

0,015

ОЛА

Вода бидистиллированная

До 100

Таблица 4

Показатели

Вариант среды

ЛГЖ + спермосан-3 ЛОЛАГЖ

ЛГЖ (контроль) Коэффициент устойчивости гамет к температурному шоку, у.е.

0,364 0,022*

О, 29 О, 16

0,29» 0,018

Подвижность гамет (балл) после разбавленияохлаждения-оттаивания

7,32"- 0,16

6,431 0,14

3,25+ 0,12

7,32+ 0,16

7,11 Т 0,12

4,07 и 0,22*

7,.32+ О, 16

6,84+ 0,14

3,29 . 0,14

Выживаемость деконсервированных гамет при 38 С,ч 6,214. 0,29

7,57 + 0,30**

6,36+ 0,27

1 .2

4

Контроль

6,6 0,9

7,8 2,4

8,8 3,8

9,6 5;О

10,4 6,0

4,4 0,001

8,2 0,008

11,5 0,015

14,2 0,021

16;7 0,030

Лактоза

Глицерин

Желток

1,7

3,6+

4,3+ 4, 1+

2,9+

0,14

0,11

0,14

0,11

0,21

4 0,5

7,2+ 0,22

7,6+ 0,27

7,6+ 0,27

5,4 4- 0,27

5;65+1,49

14,5+1, 70

29, 85 1, 10

18,! 5 1, 48 !

0,85 0,95

1498489 Продолжение табл.4

Вариант среды

Показатели

ЛГЖ (контроль) ЛГЖ + спермосан-3 ЛОЛАГЖ

Абсолютный показатель выживаемости деконсервированных гамет при 33 С, о у.е.

11в21+Оэ74 . 11 23+ 0.55

16,54+ 1,12*

Сохранность акросом ra" мет (Ж) после охлаждения-оттаивания

66, 16 «+ +О, 90

27,52+ 0,95

67,91+ 0,97

28,01+ 0,75

70,45+ 0,82**

35,24 + 1,45k**

Таблица 5

Вариант среды

ЛГЖ (контроль)

ЛГЖ + спермосан-3

2633,2 1 146,9

ЛОЛАГЖ р 0,01.

Таблица 6

Ветеринарно-санитарные показатели замороженнооттаянного семени (в 1 мл) Вариант среды

Грибы

Кишечная палочка

Общее кол-во микроорганизмов

1,0 «+0,82

2397,5 + +117, 13 111, 5 + 1, 91

ЛГЖ (контроль) 8,0 А 4,90 **

5,5 1,37 **

** р, 0,001, Составитель И.Марченко

Техред А.Кравчук Корректор Т.Колб

Редактор В.Данко

Заказ 4482/5 Тираж 643 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîë, ул. Гагарина,101

*р < 0,05.

**р "- 0,01.

***р < 0,001.

ЛГЖ + спермосан-3

ЛОЛАГЖ ) Антиокислительная активность липидов замороженно-оттаянных гамет, ч/г./мл

7153,11 68211

8857,8 4 709,1**