Способ диагностики мастита

 

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита. Целью изобретения является увеличение точности и ранняя диагностика. Для этого пробу грудного молока обследуемой в объеме 0,20-0,04 мл с каплей 0,01%-ного водного раствора метиленового зеленого наносят на верхнюю поверхность столбика из 15%-ного полиакриламидного геля и подвергают электрофоретическому разделению в 0,9 н. уксусной кислоте в течение 3 ч. После окраски геля красителем амидочерным 10В визуально оценивают спектр кислоторастворимых белков молока и измеряют длину пробега отдельных белковых франкций. При появлении на электрофореграмме катодной полосы с R<SB POS="POST">F</SB>=0,47-0,49 по отношению к метиловому зеленому диагностируют раннюю стадию мастита. Способ относительно несложен, позволяет достоверно различать мастит и лактостаз на доклинической стадии. Точность способа составляет 97%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1529124

А1 (5l)4 G 01 ki 33/68

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4245011/28-14 (22) 26.05.87 (46) 15.12.89. Бюл. У 46 (71) Научно-исследовательский институт экспериментальнои медицины АМ1

СССР и Ленинградский педиатрический медицинский институт (72) В.Н. Кокряков, Ю.А. Спесивцев, В.Е. Пигаревскии, Ф.Х. Кутушев, Г.И. Алешина и А.В. Андреев (53) 616.07(088.8) (56) Голота В.Я., Алтуев Г.H. 1 .ачественный состав молока при лактационном мастите. — Акушерство и гинекология, 1984, 89 9, с. 48-50. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ 11АСТ11ТА (57) Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита, Целью изобретения является увеличение точности и ранняя диагностиИзобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита.

Целью изобретения является увеличение точности способа и ранняя диагностика °

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу молока в объеме 0,02-0,04 мл с каплей 0,01Х-ного водного раствора метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность предварительно .подготовленного столбика полиакриламидного геля и в течение 3 ч при силе тока 2,0 мА на трубку осуществляют электрофоретическое разделение белков

2 ка. Для этого пробу грудного молока обследуемой в объеме 0,02-0,04 мл с каплей 0,01 ;,-ного водного раствора

::стиленового зеленого наносят на верхнюю поверхность столбика из 15Х-ного полиакриламидного геля и подвергают электрофоретическому разделению в

0,9 н. уксусной кислоте в течение 3 ч.

После окраски геля красителем амидочерным 10В визуально оценивают спектр кислоторагтвори.1ыл белксв молока и измеряют длину пробега отдельных бе.I киных фракций. При появ.-, нии на элск-.;офореграмме катодной полосы с Е .

0,47-0,49 по отношению к метиловому еленому диагностируют раннюю стадию мастита. Спо: об относительно неслажен, позволяет достоверно различать мастит и лактостаэ на доклинической стадии. Точность способа составляет

97Ж, в кислом растворе до достижения метиловым зеленым финишной зоны геля.

После извлечения геля из трубочек их

-окрашивают раствором красителя амидочерного 10 В в течение 30-40 мин. а затем отмывают несвязавшийся краситель, визуально оценивают спектр кислоторастворимых белков и измеряют длину пробега отдельных белковых фракций. При появлении на электрофореграммах катодной полосы с Е г

0,47-0,49 по отношению к метиловому ".леному диагностируют раннюю стадию мастита.

Пример 1. Пробу молока здоровой родильницы в объеме 0,02 мл

1529124 вместе с каплей 0,0!7-ного водного красителя метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность предварительно подготовленного столбика полиакрил5 амидного геля, находившегося в стеклянной трубочке размером 0,5 х IO см, Подготовку полиакриламидного геля и процедуру электрофореза осуществляют по прописи Паниям и Чолкли. Полиакрил- 0 амидный геЛь готовят путем смешивания

3 растворов: раствор А: 607 акриламид (W/V); 0,4Х метиленбисакриамид (W/V) в Н О; раствор В: 43,27 уксусная кислота (V/V); 4X тетраметилэтилендиамин !5 (V/V) в И О; раствор С: IOt! раствор мочевины.

Все растворы можно готовить загодя и хранить на холоде (+4 С) в темной стеклянной посуде с притертой крышкой 20 в течение 2-4 недель. Непосредственно перед анализом растворы сливают в следующем соотношении A:Â;Ñ = 2:1:5.

Далее к смеси добавляют катализатор полимеризации — персульфат аммония 25 (40 мг на 32 мл смеси; 50 мг на 40 мл смеси). Смесь с катализатором тщательно перемешивают и разливают с помощью пипетки или шприца в стеклян— ные трубочки на высоту 9 см, а затем 30 наслаивают на смесь дистиллированную воду. В течение 60-90 мин происходит полимеризация геля в трубочках. После окончания полимеризации, устанавливаемой по формированию четкой границы между гелем и водои и явлению синерезиса геля, вьькидают 1 ч и переносят трубочки с гелем в аппарат для лектрофоретического разделения (можно использовать отечественный аппарат 40 марки ПЭФ-1 или венгерский аппарат фирмы "Reanal" модель-69). В верхнюю (анодную) и нижнюю (катодную) камеры заливают по 0,5 л 0,9 н. раство„a уксусной кислоты в воде (буфер), 45 при силе тока 2-3 мА на трубку осуществляют процедуру преэлектрофореза, в процессе которой удаляют из геля компоненты, мешающие Ф роведенин аналитического электрофореза. После окончания проэлектрофореза буфер в верхней и некией камерах заменяют свежим.

Преэлектрофорез проводят в течение

5-16 ч до постоянных значений тока и напряжения. Можно гели с полиакрил55 амидным гелем подготавливать за 12 ч до проведения аналитического электрофореза. Пробы анализируемого молока с каплей 0,017-ного водного раствора метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность геля. Они являются достаточно плотными, поэтому быстрой диффузии белков в кислый раствор для электрофореза не наблюдается. Электрофорез ведут при постоянной силе тока

2,0 мА на трубку в течение 3 ч. По окончании электрофореза, фиксируемого по достижении индикаторным красителемметиловым зеленым — нижней финишной части столбика геля. Гели извлекают из трубочек традиционным способом и окрашивают в течение 30 мин О,IХ-ным раствором амидочерного !О В, растворенного в 207.-ном этаноле, 7Х-ной уксусной кислоте, остальное Н О. После скрашивания гели отмывают от несвязавшегося красителя, либо электрофоретически, либо путем смены раствора

0,9 н. уксусной кислоты. Спектр кислоторастворимых белков молока можно ,условно разделить на две зоны. В первой верхней зоне представлено 5 основных белковых фракций. Вторая зона в средней части геля представлена одинарной катодной полосой с R g = 0,370,38. R определяют как отношение длины пробега данной белковой полосы к длине пробега метилового зеленого, т.е. к общей длине геля. Диапазон значений Rg обусловлен тем, что белковая полоса после прокрашивания имеет определенную толщину, а потому определение длины пробега ее в геле можно осуществлять как по переднему, так и по заднему фронту полосы.

Пример 2. Проба молока в объеме 0,02 мл, взятая у родильницы, у которой клинически диагностирован лактостаз, подвергается электрофоретическому анализу так же, как в примере I. В спектре кислоторастворимых

„a белков молока этой пациентки выявлена дополнительная катодная полоса с

Ег = 0,47-0,49 ° Следовательно у больной имеет место начальный этап воспаления в молочной железе при отсутствии его клинического проявления. Диагноз подтвержден клиническими наблюдениями в течение последующих семи дней.

Пример 3. Проба молока в объеме 0,02 мл, взятая у родильницы, у которой клинически диагностирован лактостаэ, подвергается электрофоретическому анализу так же, как в примере 1.

В спектре кислоторастворимых белков молока этой пациентки изменений по мастит.

Составитель А. Аносов

Редактор Т. Парфенова Техред А.Кравчук

Корректор С.Шекмар

Заказ 7635/40

Тираж 789

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,1Я!

5 15 сравнению с нормой не обнаружено. Диагноз — лактостаз (застои молока), который подтвержден последующими кли1 ническими наблюдениями.

С помощью предлагаемого способа возможно однозначно диагностировать начальную стадию развивающегося мастита в тех случаях, когда известные биохимические и физические способы не позволяют этого осуществить, а также дифференцировать воспаление от лактостаза. Точность способа

97Х, что íà 16Х выше, чем способапрототипа.

29124 d

Формул а изобретения

Способ диагностики мастита путем биохимического исследования молока, 5 отличающийся тем, что, с целью увеличения точности способа и ранней диагностики, производят электрофоретическое разделение белков молока 0,9 н. уксусной кислотой в 15Хном полиакриламидном геле и при появлении в электрофореграмме катодной полосы с Г = 0,47-0,49 по отношению к метиловому зеленому диагностируют