Способ получения стероидов или их фармацевтически приемлемых солей

 

Изобретение относится к получению стероидов ф-лы I @ , где R - группа - N<SB POS="POST">3</SB> или группа -NH<SB POS="POST">2</SB> или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих фармакологическими свойствами. Цель - выявление новых стероидов, обладающих указанными свойствами. Получение ведут реакцией соединения ф-лы I, где R - галоген или C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">2</SB>-алкилсульфонилокси с соединением ф-лы M-N<SB POS="POST">3</SB>, где M - катион щелочного металла, получая соединение ф-лы I, где R - группа-N<SB POS="POST">3</SB>

и если необходимо восстанавливают соединение ф-лы I, где R-группа - N<SB POS="POST">3</SB>, получая соединение ф-лы I, где R-группа - NH<SB POS="POST">2</SB>, и, если необходимо, переводят соединение ф-лы I в его фармацевтически приемлемую соль. 1 табл.

СО)ОЭ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

09) (11) (51) 5 С 07 д 1 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ (Т) 0

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4027926/23 -04 (22) 25, 07,86 (31 ) 851 9398 (32) 01. 08. 85 (33) (46) 30. 01. 90. Бюл. У 4 (71) Фармиталиа Карло 3р6а С.п.А. (IT) (72) Франко Фаустини, Роберто Д Алессио, Витториа Вилла, Энрико ди Салле и Паоло Ломбарди (IT) (53) 547.689.6.07 (088,8) (56) Brody А.N.Х. Cancer Research, 42. 3312 S (1982).

Kovey D.F., Hood V.F Cancer Research. 42, 3327 S, 1982. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТЕРОИДОВ ИЛИ

ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение относится к получению стероидов ф-лы I

Изобретение относится к способу получения стероидов, а именно 6-замещенных андроста-l,4-диен-3, 17 дионов, являющихся ынгибиторами ароматазы, точнее изобретение касается способа получения стероидов формулы

R где R — группа -N> или групп.а -NH<, или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих фармакологическими свойс твами, Цель — выявление новых стероидов, обладающих указанными свойствами. Получение ведут реакцией соединения ф-лы I, где Ь вЂ” галоген или С, -С -алкилсульфонилокси с соединением ф-лы М-Ns, где М вЂ” катион щелочного металла, получая соединение ф-лы I, где R — группа -N» и, если, необходимо, восстанавливают соединение ф-лы I,где К вЂ” группа -N>, получая соединение ф-лы I, где Rгруппа -NH< » если необходимо, переводят соединение ф-лы I в его фармацевтически приемлемую соль. 1 табл. где R — группа -Чз или группа -ЯНа или их фармацевтически приемлемых солей., обладающих ценными фармакологи" ческими свойствами.

Цель изобретения — получение производных с те роидов, обладающих и ре имуществами в фармакологическом отношении перед известными структурными аналогами подобного действия.

Солями согласно изобретению являются соли соединений формулы (1), в которой R представляет собой группу

-N, как определено выше, с фармацев— тически приемлемьпи кислотами, TAKE.

154 0656 ми, как неорганические (соляная, серная или фосфорная), органические (лимонная, фумаровая, малеиновая, яблочная, аскорбиновая, янтарная, винная, бензойнагг, уксусная, фенилуксус5 ная, циклогексилуксусная, 3-циклогексилпропионовая, метапсульфоновая,этансульфоновая, бензосульфоновая, р-толуолсульфоновая, р-нитробензолсульфо- 10 новая), Четвертичггые аммониевые соли и гидроокиси соединений формулы (If, Я, где R — N, охватываются изобрете- !5

Н нием и представляют собой, например, четвертичный алкил (метил, этил) .

Следующие примеры иллюстрируют изобретение. 20

Пример 1. Раствор 10 г андроста-1,4-диен-3,17-диона в 95 мл четыреххлористого углерода кипятят с

6,4 г N-бромсукцинимида и 0,4 г перекиси бензопила в течение 75 мин. Пос- 25 ле фильтрации сукцинимида фильтрат охлаждают во льду до завершения кристаллизации, Затем смесь фильтруют и сушат, получая 9,8 г сырого 6-бромандроста-1,4-диен-3,17-диона, пригод- 30 ного для следующей с тад ии. Образец для анализа кристаллизуют из смеси диэтиловый эфир /н-гексан; т,пл. 188190ОС; (о ) + 116; У Ф, (95 Et OH)

> йакс = 250 нм, 35

Пример 2. К раствору 6 -бромандроста-!,4-диен-3, 17-диона (5, 0 r) в 250 мл диметилформамида добавляют

I, 15 r порошкообразного азида натрия, растворенного в 14 мл воды, смесь на- г0 гревают до 100 С и выдерживают, перемешивая, при этой температуре в течение 120 мин. Затем всю смесь выливают в 1 л воды и экстрагируют четырьмя порциями (200 мл) этилацетата.

Объединенные экстракты промывают насыщенным водным раствором хлористого натрия и сушат. Растворитель удаляют в вакууме, получая сырой продукт,который очищают хроматографией íà Alrz0> 0 (нейтральной активности), применяя в качестве элюента смесь этилацетат/нгексан 40 .60, Получают 3,4 r чистого бс-азидоандроста-1,4-диен-3,17-диона.

Образец для анализа кристаллизуют из метанола; т.пл. 168-170 С. (М) + 93,2 (с = 1, СНС1 ); УФ (95X Et ОН) Я )цдкс = 244 у E- = 17,420;

ЯмР (CDClp) с1: 0>98 (ЗН, S), 1,3 (ЗН, S)., 431 (1Н, ddd), 644 (1Н, dd), 6,26 (1Н, сЫ), 7,02 (1Н, d), Пример 3. К раствору 6 -метансульфон илок сианд рос та- l, 4-диен3,17-диона (3,0 r) в 150 мл диметилформамида добавляют 0,67 г азида натрия, растворенного в 8,5 мл воды; смесь нагревают до 100 С и выдержива ют, перемешивая, при этой. температуре

90 мин.

При внешнем охлаждении всю смесь выпивают в 600 мл воды и экстрагируют четырьмя порциями (150 мл) этилацетата. Объединенные экстракты промывают насьгщенным раствором хлористого натрия для удаления остатка диметилформамида и высушивают над безводным сульфатом натрия, Затем растворитель удаляют в вакууме и получают сырой продукт, который очищают хроматографией на А1еО (нейтральной активности), используя в качестве элюента смесь этилацетат:н-гексан 40:60. Получагт 1,95 r чистого 6Ф.-азодоанд роста-!,4-3,17-диона; т.пл, 167169 С; fd) р —. 92,8 (с = 1, СНС1э), !.

Пример 4. К пе ремешиваемому раствору 6<-азидоандроста-1,4-диен3, -17-диона (О, 61 г) в тетрагидрофуране (3 мл) добавляют трифенилфосфин (0„79 г) .

После окончания выделения азота реакционную смесь разбавляют водой (1 мл) и кигятят 24 ч. Охлажденную реакционную смесь выливают в 1 н. водный раствор соляной кислоты (50 мл) и промывают метиленхлоридом, рН водного слоя доводят до 10 добав-. лением водного раствора NaÎH и тщательно экстрагируют метиленхлоридом.

Органическую фазу высушивают над

СаС1 и выпаривают в вакууме, получая желтую пену (0,44 г), которую экстрагируют диэтиловым эфиром (30 мл) и обрабатывают газообразным

НС1.

Образующийся осадок отфильтровывают, высушивают и разделяют на части между метиленхлоридом и 2 н, водным раствором NaOH

Органический слой отделяют, высушивают над СаС1 и выпаривают в вакууме, получая б -аминоандроста-1,4диен-3, 17-диона (О, 40 г); т, пл. 186191 С; ЯмР (CDCJy) 8: 0,93. (ЗН, S) )

1,25 (ЗН, S), 3 71 (I Н, ddd), 6,27 (1Н, сЫ), 6 39 (! Н, сЫ), 7 01 (1Н d) .

1540656

10

I5

MK (KBr} см : 3450, 3380, 3000, 2940 2860в 1730э 1655э 1615ю 1600

Приме р 5. Раствор065г бс -аминоанд рос та-1, 4-диен-3 1 7-диона в 30 мл этанола обрабатывают 21,71 мл

0,1 н. водного раствора НС1. Желтый раствор обесцвечивается, затем его фильтруют и удаляют спирт при пониженном давлении. Образующийся водный раствор лиофилизируют 0,7 г сухого б -аминоандроста-1,4-диен-3, 17-диона гидрохлорида в виде светло-желтого порошка. .ИК (КВг) g.<,„, = 3460, 3380, 1730, 1695 см .

Соединения по изобретению обладают способностью ингибировать ароматазу.

Ароматаза (эстроген-синтетаза) представляет собой фермент, ответственный за последнюю стадию биосинтеза эстрогенов . Как известно, превращение. андрогенов в эстрогены (например, андростендиона и тестостерона в эстрон и эстрадиол.1 происходит при посредстве аромата зы микросомного фермента Р450, которая действует на субстрат андрогена.

Продукты действия ароматазы, т.е. эстрогены, помимо того, что они существенны для репродукции, могут быть также ответственны за рост гормон-зависимых опухолей.

С учетом изложенного ингибиторы ароматазы по изобретению могут найти применение для воздействия на растущие гормон-зависимые опухоли, в особенности опухоли груди, яичника, матки и поджелудочной железы. Благодаря своим свойствам ингибировать ароматазу соединения могут также найти применение для лечения гиперплазии простаты, при которой происходит доброкачественный рост предстательной железы. Более того, данные соединения вызывают уменьшение образования эстрадиола и поэтому могут быть полезны при лечении нарушений мужской плодовитости, Ингибирование ароматазы соединениями по изобретению определялось как n vitro (человеческая плацентальная ароматаза), так и in vivo (активность яичниковой ароматазы) для крыс. !

Было найдено, что данные соединения являются особенно сильными ингибиторами ароматазы in vivo

Ингибирование apova asta in vitro определялось следующим образом: ферментную систему выделяли из микросомной фракции человеческой плацентальной ткани по стандартной процедуре.

Бып использован метод Томпсона и Ситери (E.À,Òîìïñîí и П.К.Снтери. Т,Biol,Chem 249, 5364, 1974), который позволяет определять скорость ароматизации по измерению освобождения Э

Н О из 4 f1), 2 Н) андростен-3,17диона, Все образны выдерживали во встряхиваемой водяной бане при 37 С на воздухе в 10 мР калийно-фосфатного буфера, рН. 7, 5, который содержал

100 мИ КС1, 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты и 1 м1Ч дитиотрейтола. Эксперименты проводили в 1 мл инкубационного объема, содержащего

50 нМ 4- Н/андростендиола, различные

3 концентрации ингибиторов, 100 мкИ никотинамидадениндинуклеотилфосфата и

О 05 мг микросомных протеинов. После

15 мин инкубации реакцию останавливали путем добавления хлороформа. После центрифугирования при 1500 g в течение 5 мин аликвотную долю (0,5 мл) удаляли из водной фазы для определения образующейся И О. Концентрация

3 каждого соединения, требующаяся для снижения действия ароматазы на 50К (ТС ), определялась путем записи процента ингибирования при логарифме соответствующей концентрации ингибитора. Относительная эффективность каждого соединения к 40Н-А вычислялась по уравнению.

Относительная эффективность о

ТС„ОН-А

ТС sp испытуемого соединения

Ингибирование ароматазы 1п vivo определяли на крысах по следующей процедуре: взрослым женским особям крыс дважды вводили подкожно 100 иммунизирующих единиц сыворотки гонадотропина (PN SG) из беременных кобыл с интервалом в 4 дня для того, чтобы повысить яичниковую ароматазную активность согласно пропедуре

Броди (А.Y.Х Броди и др. Stere ids

38, 693, 1 981), Через три дня после второго введения РИ SG группам из

6 животных каждая орально давали индифферентное вещество (О, 5Х метоиел) или ингибитор в дозе, указанной в следующей таблице. Спустя 24 ч живот1 540656

Фо рмула из об ре т ения !

Способ получения стероидов общей формулы I

20 где R - группа -N, или группа -ИН, или их фармацевтически приемлемых солей, о.т л и ч а ю шийся тем, что.соединение формулы II

25 1

М-N где N — катион щелочного металла, получая таким образом соединение формулы I, где К вЂ” группа -N, и, если . необходимо, восстанавливают соединение формулы I, где R — группа -N g, получая таким образам соединение формулы I где R — группа -NH, и, если необходима, переводят соединение формулы I в ега фармаиевтически приемлемую соль, ! аматазы крыс in viva ных убивали, из яичников выделяли микросомы. Их ароматазную активность определяли по методу, подобному описанному для оценки активнагти in vitro.

Инкубирование проводили в течение

30 мин в 1 мл инкубационного объема, содержащего 0,1 мг микросомных про-. теинов, 100 нМ 4-(Н) андростендиона

3 в 100 мкУ. никотинамид-аденин-динук." леотидфасфата. Вычисляли процент ингибирования контрольной активности ароматазы, Даже если in vitro соединения па изобретению могут быть только эквивалентными или менее эффективными, чем известные соединения, тем не менее они являются более эффективными ингибитарами араматазы 1п vlvo

В таблице указаны примеры активности, in vivo соединений по изобретению 6o(-азидоандроста-1,4-диен-3,17— диона (код УСЕ 24403) и бс -аминоандроста-1,4-диен-3,17-диона (код FCE

24968) в, сравнении с хорошо известными ингибиторами.ароматазы 4-оксиандроста-4-ен-3 17-дианам (4-.ОН-А), D-..ãoèo-l7а-оксаандроста-1,4-диен3,17-дианам (тестолактоном) и андрос- 30 та-1,4-диен-3, 17-дианам.

Хотя соединения FCE 24403 и FCE

24968 менее активны in yitrо, чем, например 4-0Н-А, они весьма эффективны при применении. in vivo орально в 3S

-.дозе, например, 10 мг/кг, вследствие необычной устойчивости к неченочному метаболизу, тогда как 4-ОН-А неэффективен даже в дозе в 10 раз большей (100 мг/кг), при этом они обладают низкой токсичностью.

Основным недостатком при терапевтическом использовании 4-ОН-А и качестве пративоопухалевога агента для женщин является необходимость парэнтерального применения, так как соединение сильно связывается после оральИнгибирав ание яичниковай ар ного применения (Р,C.Êóìáåñ и др.

Lancet II, 1237, 1984) .

Применение ингибиторов ароматазы, описанных вышее, позволит значительно улучшить оральную терапию эстрогензависимых болезней. где L — галоген или С -Cg-алкилсульфонилокси группа, подвергают взаимодействую с саедине— нием формулы I II !00

2! Н.3

7 Н.3

2 Н.3

4-Оксиандрас та-4-ен-3 7-диан (4-0 Н-А)

D-гомо-17а-аксаандроста-1,4диен-3, 1 7-дион (тесталак тон) 1540656

10 Продолжение таблицы

2. 3 Андрос та- l, 4-диен-3, 1 7-дион б азидоандрос та-1, 4-диен3,17-дион (FCE 244 03)

6 К-Аминоандроста-l,4-диен3-, 17-диОн (FCE 24968) 37

89

7l

"р (0,05; ""р а 0,01; Н.З не значительно (no сравнению с группой, образованной индиФферентным..веществом) Составитель И.федосеева

Редактор А.Маковская Техред М.Дидык Корректор М.Шароши

Заказ 234 Тираж 284 Подписное

ВНКИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101