Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных

 

Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных. Цель изобретения - повышение титра антител в крови животных. Для этого подопытному животному одновременно с итактивированной вакциной, приготовленной из штамма вируса гриппа А/385/80- R, внутрибрюшинно вводят полисахарид B. MUCILAGINOSIS в количестве 1,0 - 5,0 мкг/кг. Использование предлагаемого способа иммунизации животных обеспечивает повышение титра антител в 3,5 - 4,3 раза по сравнению с контролем. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) ОПИСЛНИК ИЗ0БРКтЕния

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ П.(НТ СССР

{21) 4258325/30-13 (22) 05.06.87 .(46) 07.02.90, Бюл. У 5 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им, Пастера (72) Ф,С,Носков, E.Я.Виноградов, Г,Г,Няникова, Л,Е,Никитина и Т.С.Разоренова (53) 576,8.097.3:612,017,1(088.8) (56) Лазарева Д,Н,, Алехин Е.К.

Стимуляторы иммунитета. — M,: Медицина, 1985, Авторское свидетельство СССР

Ф 540640, кл. А 61 К 39/18, 1976.

Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных, Цель изобретения — повышение титра антител в крови у животных, Способ осуществляют следующим образом.

Подопытному животному одномоментно с гриппозной вакциной внутрибрюшинно вводят полисахарид Bacillus mucilaginosus в количестве 1,0-5,0 мкг/кг, Используемый иммуностимулятор полисахарид В,mucilaginosus получают известным способом. Культуру слизистых бацилл В.mucilaginosus (штамм BKMB1446 ) выращивают на мясо-пептонном агаре (MIIA), содержащем 4-5% глюкозы, о при температуре 37-39 С в течение (gI)g А 61 К 39/00, 39/27, 39/12

2 (54) СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКОГО

ИММУНИТЕТА К ВИРУСУ ГРИППА У ЖИВОТН11Х (57) Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных. Цель изобретения — повышение титра антител в крови животных, Для этого подопытному животному одновременно с инактивированной вакциной, приготовленной из штамма вируса гриппа A/385/80-R, внутрибрюшинно вводят полисахарид

В,тесilaginosis в количестве 1,05,0 мкг/кг. Использование предлагаемого способа иммунизации животных обеспечивает повышение титра антител в 3,5-4,3 раза по сравнению с контролем, 3 табл, 18-24 ч. Выделившуюся слизь смывают с поверхности агара изотоническим раствором хлорида натрия и центрифугируют при 600 об/мин в течение 30 мин, К надосадочной жидкости прибавляют 3 объема

96%-ного этилового спирта. Через 24 ч выпавший осадок отделяют, депротеинизируют и диализируют против дистиллированной воды.

Для осуществления предлагаемого способа иммунизации 1 мкг полисахарида В.mucilaginosus растворяют в

10 мл физиологического раствора (из расчета на 40 животных), смешивают и с 10 мл гриппозной вакцины и эту смесь вводят по 0,4 мл на мышь одним шприцом внутрибрюшинно, однократно, Вакцина инактивированная, элюатно-хроматографическая, .приготовленная из штам"

1540831 ма вируса гриппа H>N< А/385/80-R, высокое количество гемагглютинина

20 мкг/мл. Доза полисахарида В.mucilaginosus составляет 1 0 мкг/кг. На

14-е сутки животных обескровливают, сыворотки крови обрабатывают нейраминидазой нехолерного вибриона (уд, ак-" тивность 5,6 ед/мг) и затем исследуют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Об иммуностимулирующей активности полисахарида В,mucilaginosus судят по содержанию антител в сыворотках крови животных, Пример 1. Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг веса животного и вводят по 0,2 мл этого раствора мышам белым нелинейным весом 16-18 г внутрибрюшинно совмест- 20 но одним шприцом с 0,2 мл вакцины инактивированной, элюатно-хроматографической, приготовленной из штамма вируса гриппа А/385/80-К (20 мкг/мл по гемагглютинину). Контрольной группе 25 таких же мышей вводят по 0,2 мл той же вакцины, но вместо полисахарида

0,2 мл физиологического раствора. Через 14 сут мышей кровопускают, сыво.ротки исследуют в РТГА, В контроле . 30 титр антител в 4,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.

Пример 2.Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 10,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16-18 r внутрибрюшинио совместно с .0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R. Контроль и кровопускание проводят по при- 40 меру 1. В контроле титр антител в

2,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.

Пример 3. Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 0 1 мкг/кг и вводят но 0,2 мл мышам весом 1б18 г внутрибрюшинно совместно с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R. Контроль и кровопускание проводят по при-50 меру 1. В контроле титр антител в 2,1 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.

Результаты опытов обрабатывают методом вариационной статистики.

Иимуностимулирующее действие полисахарида В.mucilaginosus приведено в табл,1

Из табл,1 следует, что эффективными дозами полисахарида являются

1,0 и 5,0 мкг/кг. С увеличением дозы препарата его иммуностимулирующая активность снижается и при дозах

500 мкг/кг различие в среднегеометрическом титре антител статистически недостоверно, Снижение оптимальной дозы препарата на 1-2 порядка не влияет на иммуногенез, и содержание антител в сыворотках крови животных,.получивших 0,01 мкг/кг полисахарида, не превышает контрольного уровня.

Пример 4, Полисахарид В.muсilaginosus растворяют в физиологическом растворе иэ расчета 1,0.мкг/кг и вводят по 0,2 мл в смеси с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R мышам весом 16-18 г: первой группе — внутрибрюшинно, второй — интраназально,-Че рез 14 сут мышей кровопускают и ста-. вят РТГА, В первой группе животных при внутрибрюшинном введении препарата и вакцины титр антител в 2 ° 5 раза вьппе, чем при интраназальном спосо+ бе введения.

Пример 5, Полисахарид B,mucilaginosus растворяют в фиэиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 1618 г внутрибрюшинно первой группе од: новременно с 0,2 мл гриппозной вакци-. ны штамма А/385-80-R второй группе эа 24 ч до введения той же вакцины

Третью (контрольную) группу мышей иммунизируют той же вакциной, но вместо полисахарида смешивают с 0,2 мл физиологического раствора. Через

14 сут мышей обескровливают, сыворотки исследуют в РТГА. В первой группе животных прирост титров антител по., сравнению с контролем составляет 4,2 во второй 1,6, т,е. введение полисахарида. В.mucilaginosus за 24 ч до введения гриппозной вакцины дает незначительный иммуностимулирующий эффект по сравнению с одновременным введением полисахарида и вакцины.

Пример 6. Полисахарид В,mu -.

cilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 1618 г внутрибрюшинно первой группе одновременно с 0,2 мл гриппозной вакцины А/385/80-R, второй группе через

24 ч после введения той же вакцины.

Контроль и обескровливание осуществляют по примеру 5, Результаты РТГА,поСреднегеометрический титр антител, log 2

КоличестКратность Уровень прироста значимоститра ти P антител

Доза полисахарида, . мкг/кг во жи-вотных, шт.

3,0

4,3

5,4

5 ° О

4,5

4,2

3,8

3,3

0 01

0,1

1 0

5,0

10,0

100,0

500, О

Не вводили

)0,1 (О, 001 (0,001 (О, 001 (0,001 (О, 05 (0 l

0,8

2,1

4,3

3,5

2,3

1,9

1,4

Таблица 2

Доза полисахарида, мкг/кг

Время введения ПС ных, шт.

1,0

4,2 (О, 001 (0,1

ОдновременЧ но

За 24чдо введения вакцины

1,0

1,6

10 казали, что в первой группе мьппей содержание титров антител в крови в

4,2 раза больше, чем в контроле, Во второй группе содержание титров антител такое же, как в контроле, т.е. введение полисахарида В.mucilaginosus через 24 ч после введения вакцины не влияет на иммуногенез, В табл,2 приведена зависимость иммуностимулирующей активности полисахарида В,mucilaginosus от времени введения его животным, Предлагаемый в качестве иммуностимулятора полисахарид при проверке на мышах оказался нетоксичным. Это подтверждается следующим опытом, Полисахарид В.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе и вводйт мышам весом 16-18 r внутрибрюшинно однократно по 0,5 мл в дозах

25 ° 125.и 250 мг/кг, В течение 14 сут ведут учет гибели животных, Определение токсичности полиса,харида В.mucilaginosus и результаты опыта приведены в табл,3 °

Из табл.3 видно, что к 14-м суткам из 20 мьппей в 1-й и 2-й группах погибли по 1 мыши, что составляет

Опыт Группа Количество живот40831 б

0,57, а в 3-й группе — 2 мыши, т,е.

1%, Если принять во внимание, что. в контрольной группе погибла 1 мышь, то

5 их гибель в опытных группах можно считать не связанной с действием полисахарида, Учитывая, что гибель животных ни в одной иэ групп не достигла

50%, а также то, что испытуемые дозы превьппают эффективную дозу препарата в несколько тысяч раэ, можно сделать вывод, что предлагаемый препарат— нетоксичен.

Формула изобретения

Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных, включающий введение иммунизи20 рующего агента совместно с полисахарицом, отличающийся тем, что, с целью повьппения титра антител в крови, в качестве иммунизирующего агента используют инактивированную

25 вакцину, приготовленную из штамма вируса гриппа А-385/80-К, из полисахаридов используют Bacillus mucilaginosus ВКМВ-1446D в количестве 1,05,0 мкг/кг, а введение осуществляют

30 внутрибрюшинно.

Таблица 1

Кратность Уровень знаприроста чимости Р титров

1540831

Продолжение табл. 2

6 7

3 (контрольная)

l0 (0,001

4,2

1,0

Одновременно

Через 24 ч после введения вакцины

1,0

1аo

3 (контроль- 10 ная) Таблица 3

Гибель животных, сут

2 3 4 5 6 . 7 8 9 10 13

КоличестДоза ПС, кг/иьппь во живот ных, шт, 1

Составитель С,Пылова

Редактор Н,Тупица Техред М.Моргентал Корректор О.Дипле

Заказ 1011 Тираж 563 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/S

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

125

250

0 (конт-, рольная) 20

0 0 О

0 0 0

0 0 0

1 0 0

0 0 О

0,0 0

О O 0

О .О. 0

0 1 О 0 0 0

1 0 О 0 О О

1 0 1 0 0 0

0 0 0 0 0 0