Способ оценки индивидуальной чувствительности к энергостабилизирующим препаратам при сахарном диабете

 

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и клинической биохимии, и может быть использовано для оценки индивидульной чувствительности к энергостабилизирующим лекарственным препаратам. Целью изобретения является ускорение и снижение травматичности способа. Для этого в эритроцитах, выделенных из крови больного сахарным диабетом, определяют разность концентрации аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) до и после инкубации в полиионной среде, содержащей лекарственное вещество, а также разность концентрации эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде без лекарственной добавки и при показателе K = (ΔАТФ<SB POS="POST">о</SB> - ΔАТФ<SB POS="POST">к</SB>)/ΔАТФ<SB POS="POST">к</SB> где ΔАТФ<SB POS="POST">о</SB> - разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в присутствии исследуемого лекарственного препарата

ΔАТФ<SB POS="POST">к</SB> - разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде, не содержащей лекарственной добавки. При K*981 констатируют индивидуальную чувствительность к препарату. Точность способа 95%. Простота выполнения позволяет использовать его в практической медицине.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)5 0 О! И 33 48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21 ) 4229187/28-14 (22) 13.04.87 (46) 23,02.90. Бюл. Ф 7 .(71 ) Саратовский государственный медицинский институт (72) В.Г. Чобитько и Н.Б. Захарова (53) 616,07 (088.8) (56) Вопросы эндокринологии. Тезисы докладов 6-й конференции эндокринологов. - Минск, 1973, с. 40-42. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ K 3H "ÐÃÎÑÒÀÁÈËÈÇÈÐÓЮП1ИМ ЛГКАРСТВГННЬМ ПРЕПАРАТАМ ПРИ

САХАРНОМ ДИАБЕТЕ (57.) Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и клинической биохимии, н может быть использовано для оценки индивидуальной чувствительности к энергостабилизирующим лекарственным препаратам, Целью изобретения является ускорение и снижение травматичности способа, Для

Изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии, клинической биохимии.

Цель изобретения — ускорение и снижение травматичности при оценке индивидуальной чувствительности боль-.. ных сахарным диабетом к энергостабилизирующим препаратам.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного натощак, после 10-часового периода голодания, из локтевой вены берется 3,0-4,0 мл крови

„„ЯУ„„3 545158

2 этого в эритроцитах, выделенных из крови больного сахарным диабетом, определяют разность концентрации аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) до и после инкубации в полиионной среде, содержащей лекарственное вещество, а также разность концентрации эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде без лекарственной добавки и при показателе К = (А АТФ вЂ”

АТФ )/! АТФк, где МАТФ вЂ” разность между концентрацией эритроцитарной

АТФ до и после инкубации в присутствии исследуемого лекарственного препарата; g АТФ вЂ” разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде, не содержащей лекарственной добавки.

При К > 1 констатируют индивидуальную чувствительность к препарату, Точ;. ность способа 957.. Простота выполнения позволяет использовать его в практической медицине. в пробирку, содержащую гепарин, из расчета 12 МЕ гепарина на 1 мл крови, р

Эритроциты отделяют от плазмы центрифугированием при 1500g в течение

15 мин, трехкратно отмывают в КребсРингер-фосфатном буфере (рН 7,4), разводят тем же буфером до показателя гематокрита 40Х и инкубируют при и

Т +37 С и постоянном перемешивании в течение 20 мин. Число используемых кювет определяется числом изучаемых лекарственных препаратов плюс одна контрольная, Лекарственные добавки

1545158

При расчете содержания адениловых нуклеотидов используют следующую формулу:

Е а е

АТФ = е Й.vI

45 количества/микромолей нуклеотида в экстракте ткани или эритроцитов; объем элюата пятна на хроматограмме; объем всей пробы; объем всей пробы, нанесенной на хроматограмму; коэффициент малярной экск". 55 тинкции, равный для АТФ

14,700 мкмоль см длина оптического пути, где АТФ ч а

F. вносят в кюветы из расчета их среднетерапевтических доз..

Расчет количества кокарбоксилазы, вносимой в пробу: средняя масса тела

72 кг, средняя терапевтическая доза

5 ° кокарбоксилазы — 50 мг:

50 мг 72 кг

0,694 мг 1 кг (1000 мл)

0,694 ° 10 мг 1 мл. 1О

Таким образом, на 1 мп взвеои эрит1 роцитов нужно добавить 0,694>10 мг кокарбоксилазы, В контрольную кювету добавляют буферный раствор, равный по объему лекарственным добавкам.

До и после инкубации исследуют концентрацию -АТФ в эритроцитах. Для это1, го 0,5 — 1 мл эритроцитарной массы в, центробежной пробирке смешивают с равным объемам 0,8 н.хлорной кислоты, : Через 10-15 мин смесь центрифугируют при 1500@ в течение 10 мин и для, дальнейших исследований отбирают 0,5 1 мл супернатанта, Последний нейтрализуют 2 М раствором К<СОэ. Через

3-4 мин после выпадения в осадок перхлората калия прозрачный надосадочный .раствор наносят в количестве

0,05-0,1 мл в виде узкой полосы длиной 1-1,5 см на пластинку для хромато- 0 графии. На пластинах "Силуфол" хрома-.с тографию проводят в течение 25-30 мин.

Затем хроматограммы высушивают и отме" чают пятна, видимые в ультрафиолето: вом свете, Отмеченное пятно элюируют

3 мл 0,1 н.раствора HCl и измеряют on35 ,,тическую плотность элюата при длине волны 260 нм против контрольного элюата пятна без нуклеотидов на хроматог. рамме. 40

После второго исследования кон центрации эритроцитарной АТФ в процессе инкубации клеток в полиионной среде, содержащей добавки различных лекарственных препаратов, вычисляется показатель К: ь АТФо — Ь АТФк

Ь АТФк где МАТФ вЂ” разность между концентрацией эритроцитарной

АТФ до и после инкубации в присутствии иссле-.

pyeMoio лекарственного препарата," АТФ - разность между концентk рацией эритроцитарной

АТФ до и после инкубации в полиионной среде без лекарственной добавки, При значениях К ) 1,0 констатируют индивидуальную чувствительность паци-, ента к испытуемому лекарственному препарату, Пример 1, Больная 111. 37 лет.

Диагноз: сахарный диабет, Т тип, тяжелая форма, стадия декомпенсации обменных процессов. Осложнения: диабетическая ангиопатия сетчатки. Диабетом страдает в течение 14 лет, заболевание началось остро с жалоб иа жажду, полиурию, похудание; все годы проводилась инсулинотерапия, перед госпитализацией получала инсулин "В"36 ед. перед завтраком и 12 ед, перед ужином, Заболевание протекает не стабильно, повторно развиваются состояния кетоцидоза, передки гипогликемии, Глюкоза крови 14,76 ммоль/л; сахар мочи -1,2Х; ацетон в моче — слабо положительный С-пептид крови — О пд.

Имеются клинические проявляения

В -гиповитаминоза: быстрая утомляемость, головные боли, парастезии в конечностях, боли в ногах в покое и по ночам, запоры. В -гиповитаминоз подтверждается снижением активности транскетолазы до 14,06 мкмоль С-7-ф

1 в млн эритр, в час и повышением

ТДФ-эффекта до 18,64Х.

Использован метод прогнозирования, Показатель К при внесении в инкубационную среду инсулина равен 0,06; инсулина и тиамина К 0,25; инсулина и кокарбоксилазы К = 1,5; инсулина с тиамином и аденином К = 0,88.

Следовательно, в данном случае наибо20

Формула изобретения

К = МАТФ вЂ” $ АТФ„/ЬАТФ„

Составитель А, Козлов

Техред Л, Олийнык Корректор О, Пипле

Редактор Е. Папп

Заказ 488 Тираж 506 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская" наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

1545 лее целесообразно назначение кокарбоксилазы, на фоне лечения которой

50 мг/сут) через 2 недели клинические проявления В -витаминной

1 недостаточности уменьшилось, нормализовались биохимические показатели

ТК крови: 19 3 мкмоль С-7-ф в 1 млм зритр. в час, ТДФ-эффект — 7,47.

Пример 2, Больная У..29 лет, Диагноз: сахарный диабет, I тип, тяжелая форма, декомпенсация обменных; процессов. Осложнения:жировая инфильтрация печени, ангиопатия нижних конечностей сетчатки. Диабетом больна с 16 лет, начало заболевания острое, течение со склонностью и гипогликемиям, проводится инсулинотерапия — перед завтраком вводится 24 ед, ИЦС-А и 64 ед. ИЦС.

Глюкоза крови 30,5 ммоль/л; сахар мочи 2,2Õ.

Из .клинических проявлений В -витаминной недостаточности имелась быстрая утомляемость, головная боль, бессоница, парестазии в конечностях, судороги в ногах по ночам. Диагноз подтверждается снижением активности транскетолаэы — 17,26 мкмоль С-7-ф в 1 млм эритр. в час и увеличением

ТДФ-эффекта до 24Х.

Применен метод прогнозирования.

При внесении в инкубационную среду инсулина показатель К=О; инсулина с тиамином К=1,0; инсулина и кокарбоксилазы К=3,0 инсулина с тиамином и аденином К=2,4.

Следовательно, в данном случае наиболее целесообразно применение кокарбоксилаэы или тиамина совместно с аденином. Было проведено двухнедельное лечение кокарбоксилазой (50 мг в день в/м), после чего отмечено уменьшение клинических проявлений В -гипо( витаминоза и нормализация биохимических показателей. По точности способ не уступает известному (80-100Ж), Граничное значение показателя К обос« новано статистическими расчетами. В

158 6 интервал К ) 1 попадают более 957 пациентов с индивидуальной чувствительностью к препарату, 5;

Относительная простота осуществле ния, возможность выполнения на доступном оборудовании, применяя общепринятые методики, позволяет испольэовать предлагаемый способ во всех крупных учреждениях здравоохранения, имеющих биохимические лаборатории.

Применение предлагаемого способа прогнозирования лечебного эффекта энергостабилизирующих лекарственных препаратов по изменению концентрации эритрЬцитарной АТФ в ходе инкубации клеток возможно не только при сахарном диабете, но и при других патологических процессах.

Способ оценки индивидуальной чувствительности к энергостабилизирующим

25 лекарственным препаратам при сахарном диабете путем обследования боль-. ного, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа и снижения его травматичности, опреде-, 3Q ляют в эритроцитах концентрацию аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) до и после инкубации их в полиионной среде в присутствии лекарственного препарата и без него, рассчитывают показатель индивидуальной чувствительности К по формуле

40 гце Д АТФ, — разность концентраций

АТФ до и после ичкубации в присутствии лекарственного препарата;

ДАТФ вЂ” разность концентраций

45 АТФ до и после инкубацни в среде, не .содержащей лекарственного препарата, и при их значении К ) 1 констатируют индивидуальную чувствительность к препарату