5 @ -фосфонаты 3 @ -азидо-2 @ ,3 @ -дидезоксинуклеозидов, являющиеся специфическими ингибиторами вируса спид в культуре лимфоцитов человека н9/шв

 

Изобретение касается сахаров, в частности 5Ъ-фосфонатов 3Ъ-азидо-2Ъ,3Ъ-дидезоксинуклеозидов общей ф-лы RO @ , где R - Ia)-CH<SB POS="POST">2</SB>-P(O)(OH)<SB POS="POST">2</SB>

IIa-IIг)-PH(O)OH

IIIa) -P(O)(CH<SB POS="POST">3</SB>)OH

B-а) тимин-1-ил

б) цитозин-1-ил

в) аденин-9-ил

г) гуанил-9-ил, являющихся специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ, что может быть использовано в вирусологии и медицине. Цель - создание новых активных и малотоксичных веществ указанного класса. Синтез ведут восстановлением, например, 3Ъ-азидо-2Ъ,3Ъ-дидезокситиамидина с помощью диметилформамидной суспензии гидрида натрия с последующим добавлением диэтилоксиметиленфосоната. Выход целевых веществ 40-80%. Новые вещества менее токсичны, чем известные аналоги. 2 ил., 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК..Я<.<„„ ЫЫЫ. А 1 (5l)5 С 07 Н 19/073, А 61 К 31/70

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ фосфонат 3 -азидо-2,3 -дидезоксинуклеозидов (III) формулы

Ro%0B

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ CCCP (21 ) 4404761/31-04 (22) 29,12,87 (46) 07.03.90. Бюл. N ; 9 (71) Институт молекулярной биологии

AH СССР, Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского АМН СССР и Все-. союзный кардиологический научный центр АМН СССР (72) А.А. Хорлин, Н,Б. Тарусова, Н.Б. Дяткина, А.А. Краевский, P.m. Бибилашвили, Г.А, Галегов, В.M Жданов, М.H. Корнеева,.

Д.Н. Носик, С.Н.Майорова и В.М. Шобухов (53) 547, 963. 2, 07 (088, 8) (56) Mitsuya Н., Broder S. Strategy

for antivirus tегоpy in AIDS.

Nature, 1987, ч. 325, - 6107, р. 773-778. 1

Изобретение относится к молекуляр-: ной биологии, вирусологии и медицине и касается группы новых соединений

51-фосфонатов З -азидо-2,3 -дидезоксинуклеозидов: 5 -метилеифосфонат

3 -азидо-2,3 -дидезоксинуклеозидов (Х), 51-гидрофосфонат 3 -азидо-2,3 - . дидезоксинуклеозидов (II), 5 -метил2 (54) 5 -ФОСФОНАТЫ 3 -АЗИДО-2 -3 -ДИДЕЗОКСИНУКЛЕОЗИДОВ, ЯВЛЯЮЩИЕСЯ СПЕЦИФИЧЕСКИМИ ИНГИБИТОРАМИ ВИРУСА СПИД

В КУЛЬТУРЕ ЛИМФОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА Н9/ШВ (57) Изобретение касается сахаров, в

) 7 1 частности 5 -фосфонатов 3 — азндо-2

3 -дидезоксинуклеозидов общей фалы по- о з

N3 где R - Ia) — СН -Р(О)(ОН), ТТа-(гавЂ

PH(0)0H; IIIa) — P(0) (CHg) 0H;  — a) тимин-1-ил; б ) цитозин-1-ил; в) аденин-9-ил; r) гуанил-9-ил; являющихся специфическими ингибиторами вируса щ

СПИД в культуре лимфоцитов человека

Н9/ШВ, что может быть использовано в вирусологии и медицине. Цель — создание новых активных и малотоксичных

al веществ указанного класса. Синтез ведут восстановлением, например 3 -азидо-2,3 -дидезокситиамидина с по) ) мощью диметилформамидной суспензии гидрида натрия с последующим добавлением диэтилоксиметиленфосфоната, Выход целевых веществ 40-807. Новые вещества менее токсичны, чем известные аналоги. 2 ил., 3 табл.

1548182 где Ia R- -СН -Р-OH

Ь

ОН

О

II

I I a-r ) Р, — — Р— ОН

Н

О

II

Р,— -Р-OH

1 сн, 10

I II a!

В - a) тимин-1-ил; б) цитозин-1-ил; в) аденин-9-ил; r) гуанин-9-ил, которые избирательчо подавляют репро- 20 дукцию вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/ШВ.

Целью изобретения является снижение токсичности избирательных ингибиторов репродукции вируса СПИД в культуре клеток лимфоцитов человека, которая достигается применением в качестве веществ, блокирующих размножение вируса СПИД, соединений формулы (I-III).

Пример 1. Синтез 5 -метилен7 7 фо сфоната 3 -азидо-2, 3 -дидез ок ситимидина (Та).

К суспензии гидрида натрия (54 мг, 2,25 моль) в 3 мл диметилформамида в течение 15-20 мин в атмосфере инерт ного газа добавляют раствор 3 -ази1 до-2.,3 -дидезокситимидина (AzT)

) 1 (200 мг, 0,75 моль) в 5 мл диметилформамида, перемешивают 30 мин при 40

20 С. Затем добавляют раствор толуо олсульфоната диэтилоксиметиленфосфоната (240 мг, 0,75 моль) в 3 мл диметилформамида и интенсивно перемешивают 3 сут при 20 С. Ход реакции 45 о контролируют по ТСХ в системе В. По окончании реакции добавляют 0 13 мп уксусной кислоты, реакционную массу упаривают, переупаривают с 5 мл ди" метилформамида. Остаток экстрагиру»т 0 хлороформом (5 ° 5 мл). Экстракты упаривают, остаток очищают на колонке с силикагелем 40/100 (12 ° 2,5 см).

Элюцию проводят 300 мл хлороформа, затем 400 мп смеси хлороформ-этанол (9:1), собирая фракции по 2 мп..Соот55 ветствующие фракции собирают и упари- вают. Получают в виде масла 130 мг вещества с В 0,63 (В), которое растворяют в 3 мл диметилформамида, добавляют триметилсилилбромид (О 3 мл).

О

Э при 4 С, перемешивают 30 мин и выдерживают еще 24 ч при 20 С. Реакционную массу упаривают, добавляют

5 мл воды и триэтиламин до рН 9, выдерживают 1 ч и экстрагируют хлоро- формом (3 ° 5 мл). Водный слой упаривают, остаток очищают на колонке с целлюлозой ДЕ-32 в НСО -форме объеэ мом 300 мл в линейном градиенте бикарбоната аммония от 0 до О,ЗМ, об щий объем элюента 3 л. Фракции, содержащие соединение (Ià), упаривают, переупаривают с водой (5 10 мл) и этанолом (3- 20 мл).

Остаток экстрагируют 10 мл метанола, упаривают до 2 мл, добавляют

30 мг NaC10< и 5 мл ацетона. Осадок отделяют, промывают ацетоном, сушат.

Получают белое аморфное вещество, вы,ход 82 мг, 407., R 0,2 (А).

УФ-спектр: Я 265 нм (Я 9600, рн 1). Н-ЯМР-спектр Д О,о ), м.д.:

1,95 д (ÇH, СН, J СН Нб = 0,5 Гц);

2,60 м (2Н, H2,); 3,69 д (2Н, СН Р, J CH P = 8,6 Гц); 3,70-4,80 м (ÇH, Н4 + 2Н5 ); 6,18 м (1Н, Н1, J Hl, Н2 = 6 Гц); 7,54 д (1Н, Нб, Х =

= 0 5 Гц), Пример 2. Синтез гидрофосфоната 3 -азидо-2,3 -дидезокситимиди) Ф l на (II а).

Растворяют имидазол (0,50 г, 7,36 моль) в 15 мл. абс. ацетонитрио ла и охлаждают до 0 С. При перемешивании добавляют треххлористый фосфор (0,19 мл, 2,17 моль) и затем триэтиламин (1,05 мл, 7,54 моль). Реакционную смесь перемешивают 15 мин при

О С, затем в течение 30 мин добавляют о по каплям раствор 3 -азидо-2,3 -диде-

) т г зокситимидина 135 мг (0,5 моль) в

10 мл ацетонитрила так, чтобы температура реакционной массы не поднималась выше +5 С. о

Реакционную масу перемешивают 2 ч при 20 С, добавляют 3,5 мл и через о

30 мин упаривают. Удаление ацильных защит с аминогрупп гетероциклов проводят насыщенным раствором аммиака в метаноле при 20 С в течение 24 ч.

Затем вещество наносят на колонку с тоеперлом (5 25 см) и элюируют бикарбонатом аммония в линейном градиенте концентраций от 0 до 0,3 М, общий объем 1 л. Соответствующие фракции

82

0-0,5 М„затем 0,5 М БН НСО„в 30% спирте элюируют ??б, упаривают досуха, остаток очищают еще раз на колонке (30 2,0 см) с ДЕАЕ-целлюлозой (НСО1), элюируя градиентом концентрации NH НСО: (О - 0,3 М).

Фракции с веществом упаривают, переупаривают с водой и высушивают отгонкой абс. спирта. Выход 97 мг, 32% константы как в примере 3, Пример 5. Синтез 5 -гидрофосфоната 3 -азидо-2,3 -дидезокснаде1» 1 ) козина (ТХв), метод A.

Синтез Ils проводят, исходя из

190 мг (0,5 моль) 3 -азидо-2,3 -дидеэокси-Ná-бенэоиладенозина по методу, как в примере 2.

Выход Ils 116 мг, 66%, R = 0,18, УФ (вода) . A „ „,,260 нм, ВЭЖХ, время удерживания в условиях примера .2-8, 9 мин, Р-ЯМР-спектр (Д О), 0, м.д.:

6,5 д (1Н, Н, Тц,p = 630 Гц, Т нз

= 6 3 Гц, Jp« 1,6 Гц). Н-5IMP-сйектр Д О, 3, м.д.:

8,42 с, (1Н, Н8); 8,18 с (IН, Н2);, 6, 39 т (I H, H I l, Тн1; qq = б, 5 Гц);

5,05-4.22 м (2Н, HÇ + H4" ); 4,164,01 м (IН, HÇ ); 3,06-2,52 м (2Н, H2i)..

Пример 6. Синтез 5 -гидро) фосфоната. 3 -азидо-2, 3 -дидезоксиаденозина (IIg), метод Б.

Синтез Ila проводят, исходя из

275 мг (1 моль) 3 -азндо-2,3 -дидезоксиаденозина (АкА), как.в примере 4. Выход 70 мг, 20% константы как в примере 5.

П р и и е р 7. Синтез 5 -гндрофбст

) 1 фоната 3 -азидо-2,3 -дидезоксигуано- зина (Ilr), метод А.

Синтез IIr проводят, исходя из

225 мг (0,5 моль) 3 -азидо-2,3 -дидезокси-N2-пальмитоилгуанозина по методу, как в примере 2.

Выход (IIr) 97 мг; 52%, Rg

= 0,14, УФ (вода), 3 с 250, 270 нм, ВЭЖХ, время удерживания 8,4 мин, условия примера 2.

25 Р-ЯМР-спектр (Д О 8 м.д.):

P ъ.

6,45 д (IН, Н, Тй = 630 Гц,,Т „1- Н-ЯМР-спектр (Д О, Р ), м.д.:

7,91 с (IН, Н8; 6,85 т (IН, Нl ), Т н21 ?,О Гц)» 4,85-4,00 м (4Н, I НЗ+Й4+2Н5 ) 2,02-2,61 м (2Н, Н2 ).

15481 собирают и упаривают. Избыток соли удаляют многократным переупариванием с водой. Остаток лиофилизуют нз воды.

Выход IIa 140 мг, 80% в расчете на аммонийную соль. Ri (А): 0,25 (IIa).

УФ-спектр (вода) AА1 „С269 нм.

Время удерживания на колонке Iucleosil 120-7 NHg в линейном градиенте КН РО от 0,05 до I М 7,2 мин, скорость потока 1 мл/мин, Р-ЯМР-спектр (Д 0,3), м.д

6,5 д (IH, Н, Jgl = 629 Гц, = 6,3 Гц, J<< = 1,6 Гц). 15

Н-ЯМР-спектр (Д О, Р ), м.д

7,66 д (IН, Нб, Тиб си = 1 Гц);

4,60-3,95 м (4Н, HÇ + Н4 + 2H5 );

2,55 (2Н, Н21); I 92 д (ЗН, СН, 20 М,сн,- ""

Пример 3. Синтез 5 -гидрофосфо1

I ната 3 -азидо-2,3 -дидезоксицитидн. на (ХХб), метод А.

Синтез (ТХб) проводят, исходя из 150 мг, 0,5 моль 31-азидо-2,3 дидеэокси-Н -ацетилцитидина аналогично примеру 2.

Выход ТТб 94 мг, 62%, R$ = 0,20, 30

УФ-спектр (вода). Ъ 1С11 273 нм. ВЭЖХ, время удерживания 5,1 мин, условия как в примере 2. P-ЯМР-спектр (Д О, о ), м.д.:

6,4 д (IH, Н, Jp p =- 63) Гц,,Т Рц э 35

= 6 3 I ö У ено1 = 1,5 Гц) ° Н-ЯМР-спектр1 (Л О, 11 ), м.д.:

7,66 д (IH Н5 ° JH5 H6 — — 8,0 Гц)

5,79 д (IН,, Нб,,Тн c = 8,0 Гц);, 5,95 т (IН, BI 1 J H2 = 6,0 Гц);

4,21-3,89 м (2Н, H3 + Н4 ); 3,843,80 м (2Н, H5 ); 2,91-2,14 м (2Н, Н2 ).

Пример 4. Синтез-51-гидрофосфоната 3 -азидо-2 3 -дидезоксицити45 дина {Ila), метод Б, К раствору 252 мг (моль) 3 -азидо2,3 -дидезоксицитидина (AzC). в

10 мл абс. пириднна добавляют

1,4 моль. трибутиламмониевой соли фосфористой кислоты в 5 мл пнриднна и далее 290 мг (1,4 моль) N,N -дициклогексилкарбоднимида (ДЦК). Через

3 сут к реакционной смеси добавляют

20 мл воды, перемешивают 1 ч, упаривают досуха, остаток растворяют в

200 мл воды, наносят на колонку с

20 мл Даукса 1 ° 8 (НСО,), промывают в градиенте концентрации NH HCOg

1548182

Пример 8. Синтез 5) -гидрофосфоната 3 -азидо-2, 3 -дндезоксигуаноэина (Т?г)» метод Б..

Синтез (IIr) проводят, исходя из

292 мг (1 моль) 3 -азидо-2,3 -дидезоксигуанозина (AzG), как в примере

4. Быход 98 мг, 26%» константы как в примере 7, Пример 9. Синтез 5 -метилфосфоната 3 -аэидо-2,3 -дидезоксити1 ) мидина . (IIIa) .

К раствору 3 -азидо-2,3 -дидезокситимидина (130 мг, 0,5 моль) в 2 мп .триметилфосфата при 0-4 С прибавляют о в течение 3 ч дихлорметанфосфонат (200 мг, 1, 5 моль), перемешивают ночь при 4 С и 5 ч при RO С. Реакционную массу упаривают, к о;-.татку добавляют при охлаждении до О С 5 мл во- 20

II ды и 1 мл триэтиламина, выдерживают

1 ч и вновь.упаривают. Остаток очища. ют хроматографией на колонке(20 4 см) с целлюлозой ДЕ-32 в НСΠ— форме. Элю3 цию проводят 3 л линейного градиента 25 бикарбоната аммония от 0 до. 0,1 М, Соответствующие фракции упаривают.

Избыток соли удаляют многократным переупариванием с водой. Остаток экстрагируют 10 мл метанола, концентриру- 30 ют до 2 мл, добавляют 30 мг NaC104 и 5 мл ацетона. Осадок. отделяют, промывают ацетоном, сушат. Выход 120 мг, ЗЗ, считая на натриевую соль. Белое ., аморфное вещество. 35

0,6 (A), УФ-спектр. hмд„,265 нм (. 9600).

Н-ЯМР-спектр Д20, 3 » м.д.:

1,3 д (ЗН, СН »,Тси,р

88 д (ЗН, СР » 7и6 сн)= 0,5 Гц(» . 40

2,43-249 м (2Н, Н2), а.б); 3,80 4,90 м (3H, Н4 +2Н5 а,б); 6,16 т (1Н, Hl » ÕIII,Н2. 6,0 Гц); 760 д (1Н, Спектры ЯМР новых соединен и ре- 45 гистрируют в Д О на спектрометре

Uarian XL — 100-15. В качестве внутреннего стандарта используют триметилфосфат в случае P-ЯМР-спектров

51 ( и тетраметилсилан в случае Н-ЯМР50 спектров. Спектры УФ регистрируют на спектрофотометре Яресогй UV-vis

M-40 (ГДР). ТСХ проводят на силуфоле в системах изопропанол-25 -ный водный аммиак-вода 7:1:2 (A) и хлороформ-этанол 9:1 (В).

Пример 10. Изучение свойств соединений I-III ингибировать репродукцию вируса СПИД.

В качестве источника вируса СПИД использовали перевиваемую лимфобластопдную линию клеток человека — продуцентов вируса СПИД вЂ” 119/ШВ. Культура клеток была получена от д-ра

Б. Галло, Национальный институт рака, США, Продукция вируса клетками контролировалась в реакции непрямой иммунофлюоресценции, электронно-микроскопически и в реакции иммуноблот. Клетки культивировали в среде

RPMl 1640 с 15 .-ной инактивированной сывороткой эмбриона коров, с

300 мкг/мл глутамина, 100 мкг/мл гентамицина, 10 мМ НЕРЕ-буфера и выращивали в виде суспензии. Культуральную жидкость, содержащую вирус, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 мин и использовали для инфицирования культуры неинфинированных клеток Н9 из расчета 1 мл. супернатанта культивируемой жидкости„ содержащего приблизительно 10 вирусных частиц в

1 мл на мл клеточной суспензии, содержащей 10 клеток..Инфицирование клетки Н9 культивировали в среде KPNI

1640 с 15 инактивированной сывороткой эмбриона коров, 300 мкг/мл глутамина, 100 мкг/мл гентамицина, 100 мМ

НЕРЕ Я-буфера и инкубировали при 37 С в увлажненной атмосфере 5% СО . Все изучаемые соединения добавлялись в . среду непосредственно после инфициро1 вания клеток вирусом. Учет результатов проводят через пять-шесть суток после инфицирования клеток. Реакцию непрямой иммунофлуоресценции проводили в фиксированных препаратах антиген-содержащих клеток — продуцентов вируса СПИД. Подсчеты жизнеспособных клеток осуществляли с использованием красителя трипанового синего в гемоцитометрической камере Горяева.

Ряд опытов, в частности с AzT проводили в аналогичных условиях с использованием культуры лимфоцитов периферической крови здоровых доноров, выделяемых в градиенте фиколла-изонака. За А,8 ч до инфицирования клеток в среду добавляли фитогемаггютинин концентрации 10 мкг/мл, а после инфицирования вносили в среду 10 -ный раствор природного интерлейкина-2.

На фиг. l и 2 и в абл.1, 2 приведены данные по изу IpIII þ подавления вируса СПИД в клетках с помощью AzT»

1548182

AzC, AzA и АхГ (как контроля) и фосфонатов I-III. Как видно из этих данных, например АкТингибирует репродук цию вируса СПИД, начиная с концентра5 ции 1 мк!р1, хотя при этой концентрации общее количество выросших составляет лишь 50% от контроля. Подавление роста клеток вызвано главным образом цитотокси .еским эффектом вируса (ана- Ip логично, как в контроле клеток с вирусам). Далее при более высоких «аицентрациях AzT начинает оказывать гоксическое действие, так как количество клеток уменьшается по мере по- 15 вышения концентрации AzT (0,58 ° 10 клеток/мл при 5 мкМ и 0,35 !Î клеб ток/мп при 10 Mr<0). В то же время в случае новых соединений, например Ia и IIa, количество выросших клеток Zp резко увеличивается по сравнению с условиями при низших концентрациях

Ia u IIa (с 0,75 10 до 10 кл/мл для Ia и с 0,65 10 до 1,0.10 кл/мл б б для IIa). 25

При этом содержание инфицированных вирусом клеток для Ia u IIa сохраняется на уровне фонов (IOX)

Данные экспериментов показывают, что все 5-фосфонаты 3 -азидо-2,3 — 30 дидезоксинуклеозидов эффективно подавляют репродукцию вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека, Пример 11. Определение ток-. сичности веществ на клетках Н9/11IB и МТ4 (табл.3).

К пробам суспензий по 1 мл клеток около 1 млн, растущих на среде как в примере 10 после окончаУ р

40 ,ния одной генерации размножения (около 18 ч) прибавляют 1-2 мкКюри ) H) тимидина, уд. активность 22-26 Кюри/

1 ммоль и затем ингибитор до концентраций 1, 10, 30, 100, 300 мкИ и 1 мИ.

Растворы инкубируют половину периора генерации (около. 9 ч) и клетки о1мывают центрифугированием I 5 тес. оборотов в 1 мпн, 10 мин), промываю т средой еше 2-3 раза с подобным центрифугированием, обрабатывают тритоном XIOO (прибавляя его до концентрации 5Е), наносят на фильтры r! /С, фильтры промывают 5Е-ной трихлоруксусной кислотой. Включение радиоактивного материала в контроле около 60 тыс. имп/мин, фоновое включение 500-600 имп./мин, Таким образом, соединения формулы

I-»Х ингибируют размножение вируса

СПИД в культуре лимфоцитов человека и проявляют меньшую токсичность по сравнению с известными структурными аналогами (фиг.1 и 2 и табл.1-3).

Фо р мул а и з о б р е т е н и я

I к I

5- Фосфонаты 3 -азидо-2,3 -дидезоксинуклеозидов обшей формулы

ROTOR

0

П де Ia) R — -СН вЂ” P-0H он о

II

» - ) R- -V-ОН

Н

0 !!

I IIa) ц р ОН

I снэ

 — a) тимин-1-ил; б ) цитозин-1-ил; в) аденин-9-ил; r) гуанин-9-ил, являющиеся специфическими ингибиторами вируса СПИД в культуре лимфоцитов человека Н9/!ПВ.

1548182

Таблица 1

AzT

Условия опыта

Хв

IIa

IIIs

Клетки содер жащие вирус

Концентрация клеток, 10 мл

Клетки,содержащие вирус

Клетки,содержащие вирус

Концентрация кле" ток

Коицентрация клеток

10 мл

10 кл/мл X

IP 6 4. кл/мп

10Ã - X кл /мл

1,2! ° 1

46 0,5

10 0,15

1,2

0,52 52 0,60 0,21 36 0,5 0,52 52

О, ll 15 0,65 О, 12 18 1,2 0,26 22

Oi I I

0,50

0,60 0,06

0,58 . 0,06

0,60 0,13 22

0,06 6 I 0 . 0,14 14 0,75 0,13 17

0,035

0,35

10 1,0

Т а б л и ц а 2

АвС

AzG

АгА

Условия

Инфициров анИнфицированные клетки, X

Инфицированные клетки, X

Инфнциpos es= ные клетки, X

Живые клетки,X

Инфицирован-. ные клетки, X

Живые клетки,X

Живые клетки,X

Живые клетки,X

Живые

anew кн,X

Живые апе кнД ные клетки,X

4 дня инкубации

93,5 О

93,5 О

93,5 О

93,5 0

0 935 0

40 44

62 22

67 20

75 .16

75 14

40 44

50 41

77 36

77 .. 31

93 22

40 44 40

55 25 54

65 18 50

88 20. 62

95 20 60

44 40 44

40 40 43

31 45 35

22 45 30

16 52 31

6 дней инкубации

86 О

86 О

86 О 86

86 О

33 48

35 48

42 41

45 36

52 36

33 48

34 46

62 41

62 - 40

88 33

33 48

36 48 34 44

48 37

55 33

33 48

38 36

51 14

56 IS

86 14

48 . 33 48

38 35 48

32 . 45 40

36 36 32

I8 30 28

Данные выражены в процентах к исходному состоянию 1,2 ° 10 клеток в I мл, Примечание, Таблица 3

Вещество Подавление роста при концентрации 0,5 иИ,X

Н9/ШВ

100

Контроль

Контроль + вирус

Контроль + вирус + l мкм

Контроль + вирус + 5 мкм

Контроль + вирус +.10 мкм

Клетки (контроль) 93,5

Клетки +.

+ вирус 40

+1 мкИ 48

+ 5 мкИ 60

i+ I0мкИ72

+ 30 мкИ 92 Клетки

> (конт, . роль) 86

Клетки +

+ вирус 33

+ 1 мкИ 35

+5мкИ 54

+ I О мкИ 6 7

+ 30 мкИ 90

Инфицированны клет"

as„X

М

Ia

ХХа

Ша

AET

100

44

34

29

Клетки., содержащие вирус

IO кл/мл X

1З

Вещество

1548182 l4

Продолжение табл.З

Подавление роста при кон1 центрации 0,5 иИ,7.

Н9/UIB МТ4

+дэ

По,7 р,,р, +S, 10 РОЮ g

+д, + 7икФ

+Ю

+я 7м1 ю

+В, Юекн

У - кситрольный эксперимент В-Ьорус кидз — кяеткц ннрнццробаннве 8ирусом саиД. с =:д — клеткц не содержащие Ьорусо

502 . 7

12 7РУ

7 10 д 70 фъ

Е 70+ ь ro

2 70 о

12 70

7 70

8 7O

В 7О

@ и

2Ю

Ъ а

II6

AzC

IIB

AzA

II r

AzC

Az T 6, +fMKpf+5MEpf 70юм

100

1548182

4днЯ

N щZ

30 пяюю

g g g0lfh У

E8 AzA Ez АгЕ

3D 30

Я рд(ф зомк

Пб Аз С N AsA Zz Are

Фог.2

Составитель Г. Коннова

Техред А.Кравчук Корректор В. Кабаций

Редактор Н. Гунько

Тираж 316

Заказ 112

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул, Гагарина, 101

Щ, А3С

6 дней

ЮзВ и

1 510306кв