Питательная среда для размножения пиона травянистого в культуре тканей

 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к питомниководству декоративных культур, к размножению пиона травянистого в культуре тканей. Цель изобретения - повышение степени регенерации эксплантатов и ускорение их развития. Для размножения пиона травянистого в культуре тканей предложена питательная среда, содержащая набор минеральных солей, витамины, глицин, борную кислоту, натрий этилендиаминтетраацетат, сахарозу, агар-агар, воду и три регулятора роста: 6-бензиламинопурин, гибберелловую кислоту и индолилуксусную кислоту при определенном соотношении компонентов. 7 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51) 5 А 01 k 3/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

C (O

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3667549/30-63 (22) 30.1 I.83 (46) 07.04.90. Бюл. N 13 (71) Научно-исследовательский зональный институт садоводства нечерноземной полосы (72) Ф.Я. Поликарпова, Г.А. Талалаева и В.А. Высокий (53) 581.143.6(088.8) (56) Ponnesbech М. Cultivation of asparagus plumosus shoot tips in vitro

with special referense to vegetative

propagation. Acta hortic. The IIague, 1975, Ii 54, р. 93-94 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ РАЗМНОЖЕНИЯ ПИОНА ТРАВЯНИСТОГО В КУЛЬТУРЕ

ТКАНЕЙ

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к питомнико- водству декоративных культур, в котором для получения большого количества посадочного материала от ограниченного числа растений новых сортов и ценных гибридов используют метод клонального микроразмножения in vitro, в частности при размножении пиона травянистого в культуре тканей.

Цель изобретения - повышение степени регенерации эксплантатов и ускорение их развития.

Il p и м е р 1. Изучали влияние . соотношения 6-бензиламинопурина (БАП), индолилуксусной кислоты (ИУК) и гибберелловой кислоты (ГК) на количество и качество эксплантатов пиона травянистого при его размножеSU» 1554838 А 1

2 (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к питомниководству декоративных культур, к размножению пиона травянистого в культуре тканей. Цель изобретения - повышение степени регенерации эксплантатов и ускорение их развития, Для размножения пиона травянистого в культуре тканей предложена питательная среда, содержащая набор минеральных солей, витамины, глицин, борную кислоту, натрий этилендиаминтетраацетат, сахарозу, агар-агар, воду и три регулятора роста: 6-бензиламинопурин, гибберелловую кислоту и индолилуксусную кислоту при определенном соотношении компонентов. 7 табл. нии в культуре тканей с использованием новой и известной питательных сред.

В качестве исходных эксплантатов использовали латеральные почки пиона, которые обрабатывали растворами стерилизующих веществ и после трехкратной промывки стерильной ди,стиллированной водой высаживали на ис кусственную питательную среду, На начальных этапах развития учитывали количество погибших эксплантатов и количество эксплантатов, продолживших развитие, наблюдали динамику роста и развития эксплантатов. В последующих пассаж х, когда эксплантаты начинали формировать допслнительные побеги, определяли значение коэффициента размножения микропсбегов.

1554838

В табл. 1 показано влияние состава питательной среды на процесс размножения на ней пиона травянистого в культуре тканей.

Как видно из табл. 1, использование новой среды с содержанием оптимальных концентраций регуляторов роста и сахарозы позволяет увеличить коэффициент размножения микропобегов по сравнению с известной средой на

150-2004 степень выживаемости эксплантатов возрастает на 204; длина стебля и число листьев, образующихся в среднем на 1 эксплантат за пассаж, увеличиваются на 75-854. . Пример 2. Испытана шкала концентраций с градацией 0,1 мг/л для регуляторов роста и 1000 мг/л сахарозы. Критерием оценки действия различных концентраций компонентов среды. на изолированные эксплантаты пиона служил коэффициент размножения микро побегов in vitro, поскольку это основной показатель эффективности микроразмножения методом культуры тканей.

В табл. 2 представлены результаты выявления оптимальных концентраций сахаразы и стимуляторов роста в новой среде.

Одинаковыми буквами в табл. 2 (о, а,с, либо 6, 1, 1 ) обозначены результаты, несущественно отличающиеся от результатов, полученных при

35 оптимальных концентрациях регуляторов роста и сахарозы, мг/л: БАП 0,5;

ИУК 0,5, ГК 1,0; сахароза 40000. Разными буквами обозначены результаты, существенно отличающиеся ат результатов, полученных при оптимальных концентрациях регуляторов роста и сахарозы.

Из табл. 2 видно, что в интервал оптимальных концентраций наряду с концентрациями, мг/л: БАП 0,5; ИУК

0,5; ГК 1,0; сахароза 40000 входят также концентрации, мг/л: БАП 0,4;

0 6; ИУК 0 4; 0,6; ГК 0,9; 1,1; сахароза 39000; 41000, поскольку при использовании данных концентраций регуляторов роста и сахарозы были по-, лучены наиболее высокие, существенно не отличающиеся одна от другой величины коэффициента размножения микро- . побегов.

При использовании же более низких, мг/л: БАП 0,2; 0,3; ИУК 0,2; 0,3;

ГК 0,7; 0,8; сахароза 37000; 38000), и более высоких, мг/л: БАП 0,7; 0,8;

0,9; ИУК 0,7; 0,8; 0,9; ГК 1,2; 1,3;

1,4; сахароза 42000; 43000; 44000 концентраций регуляторов роста и сахарозы значения коэффициента размножения значительно ниже, чем при оптимальных концентрациях (табл. 2).

Таким образом, как видно из табл.2, интервал концентраций компонентов среды, мг/л: БАП 0,4...0,6; ИУК 0,4.. ° ...0,6; ГК 0,9...1,1; сахароза

39000...41000 является оптимальным,.

Пример 3. Изучали влияние концентрации сахарозы в новой среде на способность эксплантатов пиона травянистого к микроразмножению на новой питательной среде. Результаты приведены в табл. 3.

Представленные в табл. 3 данные свидетельствуют об оптимальной концентрации сахаровы в новой среде в пределах 39000-41000 мг/л.

Пример 4. Изучали действие каждого из регуляторов роста на развитие изолированных эксплантатов пиона. Для этого были заложены опыты по следующей схеме:

Препараты Концентрация, мг/л

БАП 0 0,1 0,5 1,0 1,5 2-,0 2,5,5,0

ИУК О О,1 05 1,0 1,5 2,0

ГК О 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 5,0

В табл. 4-6 показано действие

ИУК, ГК и БАП соответственно на способность эксплантатов пиона к размножению.

Как видна из табл. 4-6, наличие в среде одного из регуляторов роста не давало положительного эффекта (в случаях с ИУК и ГК) - размножения эксплантатов не происходило; или давало недостаточный эффект (в случае с БАП) — каждый эксплантат давал максимум по одной дополнительной точке роста, т.е. в течение 1 мес.из одного эксплантата были получены два микропобега (коэффициент размножения 2).

Пример 5. Провели сопоставление новой питательной среды с известной средой следующего состава, мг/л: аммоний азотно-кислый 825> калий азотно-кислый 950; кальций хлористый - 220; магний серно-кислый

185; калий фосфорно-кислый 85; натрий этилендиаминтетраацетат 18,65;

54838

815-835

940-960

210-230

175-195

75-95

13,4-14,4

11,05-11>25

4,2-4,4

0,385-0,445

О, 075- О, 175

0,0075-0,0175

0,0075-0,0175

3,0-3,2

18,15-19,15

0,4-0,6

0,4-0,6

0,4-0,6

0,9-1, 1

90-110

1,9-2,1

0,4-0,6

0,9-1, 1

0,4-0, 6

39000-41000

4700-5300

Остальное

5

15 железо серно-кислое " 13,9; борная кислота 3,1; марганец серно-кислый

11,15; цинк серно-кислый 4,3; калий йодистый 0,415; натрий молибденовокислый 0,125; медь серно-кислая

0,0125; кобальт хлористый 0,0125; мезоинозит 100; никотиновая кислота

0,5; пиридоксин 0,5; тиамин 0,5; глицин 2,0; сахароза 30000; агарагар 5000; б-бензиламинопурин 0,01; д :- нафтилуксусная кислота 0,01, ГК

0,1; вода до 1 л.

В табл. 7 показано развитие эксплантатов пиона травянистого in vitro в зависимости от состава питательной среды, Как видно из табл. 7, использование новой питательной среды с содержанием оптимальных концентраций регуляторов роста и сахарозы позволяет увеличить коэФФициент размножения микропобегов по сравнению с известной на 2701; степень выживаемости эксплантатов возрастает на 20 ; длина стебля и число листьев, образующихся в среднем на один эксплантат за пассаж, увеличивается на 108 и 814 соответственно.

Формула изобретения

Питательная среда для размножения пиона травянистого в культуре тканей, содержащая набор минеральных солей, витамины, глицин, борную кислоту, натрий этилендиаминтетраацетат, три регулятора роста, в том числе 6-бензиламинопурин и гибберелловую кислоту, сахарозу, агар-агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения степени регенерации эксплантатов и ускорения их развития, в качестве витаминов она дополнительно содержит аскорбиновую кислоту, а в качестве третьего регулятора роста содержит индолилуксусную кислоту при следующем соотношении компонентов, мг/л:

Азотно-кислый аммоний

Азотно-кислый калий

Хлористый кальций

Серно-кислый магний

Фосфорно-кислый калий

Серно-кислое железо

Серно-кислый марганец

Серно-кислый цинк

Йодистый калий

Молибденово-кислый натрий

Серно-кислая медь

Хлористый кобальт

Борная кислота

Натрий этилендиаминтетраацетат

Никотиновая кислота

Пиридоксин

Тиамин

Аскорбиновая кислота

Мезоинозит

Глицин б-бензиламинопурин

Гибберелловая кислота

Индолилуксусная кислота

Сахароза

Агар-агар

Вода

1554838

Та бли ца 1

Новая среда

Известная среда

Регистрируемые признаки

Испытанные уровни концентраций

БАП 0,5 БАП 1,0

ИУК 0,5 ИУК 1,0

ГК 1 0 ГК 2 0

Сахароза Сахароза

40000 мг/л 60000 мг/л

66,7

96,7

76,7

73,3

Длина стебля (мм/1 эксплантат за пассаж) 6 2

11,9

19, l

7,9

Число листьев (шт/1 эксплантат за пассаж) 2,9

2,4

5,8

3,1

Коэффициент размножения микропобегов 1,8

2,4

Таблица 2

Компоненты среды, мг/л

Концентрация компонентов

0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 070809 l,01,112

- 37000 38000 39000 40000 41000 42000

Новая среда

Коэффици" ент размножения

1,90 4,53 6,37 в в а

6,73 6,80 4,36 а а в

3,23 2,57 в в микропобегов

НСР„, = 1,77.

Таблица

Коэффициент размножения при концентрации сахарозы, г/л

30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 (43

15,6 15,7 15,5 15,5 16,0 l5,7 16,2 15,4 17,8 23,1 22,5 21,0 16,4 14,3

БАП

ИУК

ГК

Сахароза

Количество эксплантатов, продолживших развитие (3 от числа посажен ых) АП 1, Il Рг/л !

УК 0

ГК 0

Сахароза

30000 мг/л

БАП 0,1

ИУК 0,1

ГК 0,1

Сахароза

20000 мг/л

6,7

Оптимальный вариант

0,8

0,8

1,3

43000

019

0,9

1,4

44000!

554838 to

Таблица 4

Коэффициент размножения микропобегав" при концентрации ИУК, мг/л

0 0,1 0,5 1,0 1 5 2,0

Развития не наблюдали 1

1. 1

Табли ца 5

Коэффициент размножения микропобегов при концентрации ГК, мг/л

0 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0 5,0

Развития не наблюдали

Т а б л и ц а 6

Коэффициент размножения микропобегoB при концентрации БАП, мг/л

0 0,1 0 5 1,0 1 5 2 0 2 5 5 0

Развития не наблю1,7 1,4 1,0

l,9 20 22 дали

Табли ца 7

Характеристика

Показатели для среды . известной предлагаемой

Абс.ед. 3

Абс.ед.

96,9

76,5

Выживаемость эксплантатов, 3 от числа посаженных

Длина стебля, мм на

1 эксплантат

4исло листьев, шт./1 эксплантат

Коэффициент размножения микропобегов

5,8 100

3,2 !00

1,8 100

12,l 208

5,8 181

6,7 372