Способ размножения вишни в культуре ткани

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при клокальном микроразмножении косточковых культур, в частности вишни. Целью изобретения является улучшение укореняемости побегов, повышение выхода растений - регенераторов и повышение их приживаемости при высадке в нестерильные условия. Поставленная цель достигается тем, что перед вычленением апикальных меристем растение вишни обрабатывают 0,05 - 0,075%-ным водным раствором паклобутразола. При этом вычленение меристем осуществляют в весенний период следующего года, после чего их помещают на питательную среду для введения в культуру ткани и после подращивания пересаживают на питательную среду с цитоканалами и культивируют до получения побегов. Побеги пассируют на питательную среду для укоренения, а затем полученные растения - регенераты переносят на питательный субстрат в нестерильные условия. При осуществлении способа процент профилирующих почек на среде с цитокининами до 45 - 75% против 20% в известном способе. Укореняемость возрастает до 50 - 80%, а в результате значительно возрастает количество полученных при размножении данным способом саженцев. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧ Е С К ИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 А 01 Н 3/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4680568/13 (22) 19.04.89 (46) 30.07.91. Бюл. М 28 (71) Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева

{72) Н.В.Агафонов, О.Н.Аладина, И.В.Жаркова, В.В.Фаустов и А.Г.Матушкин (53) 581.143 (088.8) (56) Попов Ю.Г.. Высоцкий В.М. Культура стеблевых верхушек in vitro, как метод ускоренного размножения плодовых и ягодных растений. Вестник с/х науки,.1978, М 3.

{54) CflOCO6 РАЗМНОЖЕНИЯ ВИШНИ В

КУЛЬТУРЕ ТКАНИ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при клокальном микрораэмножении косточковых культур, в частности вишни. Целью изобретения является улучшение укореняемости побегов, повышение выхода растений — регенератов и повышение их приживаемости при высадке в нестерильные условия, ПоИзобретение .относится к биотехнологии и может быть использовано при клональном микроразмножении косточковых культур, в частности вишни.

Цель изобретения — улучшение укореняемости побегов, повышение выхода растений-регенератов, повышение их приживаемости при высадке в нестерильные условия.

Пример. В период активного роста побегов на маточном растении проводят обработку маточных растений вишни водным раствором паклобутразола в концентрации

0,025, 0,05, 0,075 по д.в.. Внесение препа„„5UÄÄ 1665986 А1 ставленная цель достигается тем, что перед вычленением апикальных меристем растение вишни обрабатывают 0,05 — 0,075 (-ным водным раствором паклобутразола, При этом вычленение меристем осуществляют в весенний период следующего года, после чего их помещают на питательную среду для введения в культуру ткани и после подращивания пересаживают на питательную среду с цитоканалами и культивируют до получения побегов. Побеги пассируют на питатель:ную среду для укоренения, а затем полученные растения — регенераты перЕносят на питательный субстрат в нестерильные условия. При осуществлений способа процент пролифирирующих почек на среде с цитокининами до 45-75 против 20ф в известном способе. Укореняемость возрастает до 50-80, а в результате значительно возрастает количество полученных при размножении данным способом саженцев.

2 табл. рата в почву производят рано весной до сокодвижения в тех же концентрациях.

Весной следующего года с обработанных деревьев заготавливают верхние части побегов длиной до 1 см и боковые вегетативные почки с участком стебля. В качестве эксплантата используют верхушечные меристемы с двумя-тремя примордиальными листьями (300-400 мкм). Эксплантаты стерилизуют и проводят введение эксплантатов в культуру путем посадки меристематических верхушек на модифицированную питательную среду МурасигеСкуге и после подращивания в течение 3-х недель пересаживают на питательную сре1665986 ду Готре с цитокинином 6-EllA в количестве

0,5 мг/л. После получения побегов в большем количестве, чем исходные зксплантаты, их пересаживают на среду

Мурасиге-Скуга половинного состава, содержащую в качестве регулятора адксин РИМК в количестве 0,5 мг/л.

Условия выращивания: 16-ти часовой день, освещенность 3-5 тыс.лк, температу,, ра 22 — 26 С.

Испытания проводят на сорте вишни

Апухтинская с крайне низкой эффективностью размножения в культуре ткани, Результаты по изучению влияния пред,варительной обработки маточных растений, водным раствором паклобутразола на обра, зование боковых почек и образующихся из них побегов представлены в табл.1.

Как видно из табл.1, при обработке ма,точных растений водным раствором паклобутразола в концентрации 0,05, 0,075%,,,процент пролифирирующих почек возра,стает до 45-75%, Несмотря на то, что внесение паклобут, разола в почву (до сокодвижения 200 мл на дерево) в ряде случаев оказывает положительное влияние на пролиферацию пазушных почек и укореняемость микропобегов, большие выпады при пересадке в нестерильные условия существенно снижают общий выход растений. В связи с этим предпочтение следует отдать способу обработки — опрыскиванию препаратом в указанном интервале концентраций.

Отмечается высокий процент микрочеренков, пригодных для укоренения. В этом же варианте на этапе укоренения наиболее активно протекает процесс ризогенеза (укореняемость 80%). а появление корней у основной части побегов отмечается на 30 дней раньше, чем в контроле, При этом у микропобегов формируется более сильноразвитая система (в несколько раз увеличивается количество корней l и И порядков ветвле° ния,ихдлина,что,несомненно,играетбольшую роль при пересадке пробирочных растений в нестерильные условия, (табл.1).

Влияние обработки раствором паклобутразола на укореняемость побегов, полученных на питательной среде Гобре, показано в табл.2, Как видно из табл.2 укореняемость побегов в-культуре ткани возрастает с 20% на контроле без обработки маточных растений до 50-80% на варианте с обработкой паклобутразолом.

Также из табл.2 видно, что при использовании предварительной (эа год) обработФормула изобретения

Способ размножения вишни в культуре ткани, включающий вычленение апикальных меристем с маточных растений, введение эксплантатов в культуру путем посадки

40 на питательную среду и подращивания, пересадку на питательную среду с цитокининами и культивирование до получения побегов, пересадку побегов на питательную среду с ауксинами для укоренения и высад45 ку полученных растений-регенерантов на субстрат в нестерильные условия, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью улучшения укореняемости побегов, повышения выхода растений-регенерантов и повышение их

50 приживаемости при высадке в нестерильные условия, перед вычленением апикальных меристем в период интенсивного роста побегов на маточном растении его обрабатывают водным раствором паклобутразола

55 в концентрации 0,05 — 0,075 J(по д.в„причем вычленение апикальных меристем осуществляют в весенний период следующего года.

30 ки маточных растений-регенерантов раствором паклобутразола положительно сказывается на приживаемость в нестерильных условиях, значительно повышается процент прижившихся растений; до 98% в сравнении с 12,5% без обработки, Получаемый положительный эффект проявляется на конечном результате размножения — увеличивается количество саженцев, полученных предлагаемым способом (до 264 шт,) в сравнение с 1 шт на варианте без обработки.

Вычленение апикальных меристем через год после обработки маточных растений паклобутраэола обусловлено тем, что опрыскивание деревьев проводят летом в период активного роста побегов, а лучшее время года для введения эксплантатов в культуру — февраль-март, т,е. ранний весенний период следующего года. Тогда интенсивнее протекают процессы регенерации, и при ранних сроках посадки есть возможность получить растения-регенеранты к октябрюноябрю этого же года.

Таким образом, использование в технологии микроразмножения обработки маточных растений вишни трудноразмножаемых сортов водным раствором паклобутразола стимулирует пролиферацию пазушных почек, сокращает и упрощает этап укоренения, обеспечивает высокий выход пробирочных растений, имеющих хорошо развитую корневую систему.

1665986

Таблнца

Влияние способа обработки растений раствором плклабутраэола на пролифирацию почек и ускаряемость в>пчнн

Средняя длина, см

Количество корней, шт.

Укареняемасть, При пересадке на укоренение

Варианты т

I nop. II nop

I nop. II nop средняя длина, см

0,5

20 2 20

1,3

Контроль

Внесение о почву раствора паклобутравола:

1,0

33

1,0 0,5

2,0

25

Онрыскивание: растений раствором паклобутравола:

0,5

5,0

2,5

0,5

4,0

НО

2 0

2,8

Таблица 2

Влияние обработки маточных растений на укоренение и омкол роотениадегенератав вишни

Вариант

Укореняемость, Х

Всего побегав, шт. олучено оеменнея, шт

Контроль des обработки

12,5

20

0,025Х р-р паклобутразола

0 ° 05X p-p паклобутразола

300

294

375 80

0,075Х р-р паклобутравола

84,5

180 50

< — испытуемый сорт Апухтинская.

Составитель С.Куваева

Техред М.Моргентал

Корректор И.Муска

Редактор В.Ковтун

Заказ 2471 Тираж 368 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород. ул,Гагарина, 101

0,025Х

0,05Z

0,075Х

0,0251

0,05Х

0,075Х

Процент пролнфернрующих почек на среде равмнамения, 1 пассам

Количество пробудившихся почек, шт. среднее число побегав, шт

Среднее число боковых побегов к концу

II этапа

Получена укорененных растений, шт.

Примнваемость в не стерильных условиях, Х