Способ получения растительного материала для размножения растений

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к вегетативному микроразмещению растений в стерильных культурах тканей. Целью изобретения является повышение эффективности способа. Получение растительного материала для размножения растений осуществляется путем высадки стерильных черенков побегов растений в сосуд с агаризованной питательной средой, содержащей в своем составе в качестве регулятора роста цитокинин. После этого сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного погружения черенков, культивируют при 16-часовом фотопериоде до появления боковых побегов, микрочеренкуют их и помещают черенки, полученные из верхушек побегов, на среду для укоренения, а черенки из средней и нижней частей побега возвращают на стадию культивирования с полным погружением в жидкую питательную среду. Укорененные черенки пересаживают в теплицу, а затем - в открытый грунт. Культивирование черенков на агаризованной питательной среде с дополнительным погружением их в жидкую питательную среду того же состава позволяет увеличить число боковых побегов, усилить их рост, побеги в 2-3 раза становятся толще. Путем систематического повторения способа в течение года можно получить до 100000 верхушечных побегов из одного исходного черенка.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) („.1) А 01 И 3/00

Н ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 3608352/30-15 (22) 27.06.83 (31 ) 2085/82 (32) 28.06.82 (33) IIU (46) 30.08.90. Бюл. 1 32 ,(71 ) Новотрейд (IIU) (72 ) Дьердь 11олнар, Петер Тетеньи, Ева Добош и Йене Бернат (HU) (53) 581. 143. 6 (088. 8) (56) Applied and Fundamontal Aspects

of Plant Cell Tissue and Organ Culture by 1.P incrt and Y.P.S. Bajaj.

New Jork ° 1977, р.28-30, 138-139, 197-202. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО

11АТГРИАЛА ДЛЯ РАЗМНОБЕИИЯ РАСТГНИЙ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к вегетативному микроразмещению растений в стерильных культурах тканей. Целью изобретения является повышение эффективности способа. Получение растительного материала для размножения растений осуществляется путем высадки стерильных черенков побегов растений в

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к вегетативному микроразмножению растений в стерильных культурах тканей.

Целью изобретения является повышение эффективности способа.

По способу-прототипу (вариант Т) черенок растения Amsonia tabernaemon

2 сосуд с агаризованной питательной средой, содержащей в своем составе в качестве регулятора роста цитокинин. После этого сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного погружения черенков, культивируют при 16-часовом фотопериоде до появления боковых побегов, микрочеренкуют их и помещают черенки, полученные иэ верхушек побегов, на среду для укоренения, а черенки из среднeé и нижней частей побега возвращают на стадию культивирования с полным погружением в жидкую питательную среду. Укорененные черенки пересаживают в теплицу, а затем— в открытый грунт. Культивирование черенков на агаризованной питательной среде с дополнительным погружением их в жидкую питательную среду того же состава поэволяр г увеличить число боковых побегов, усилить их . рост, побеги в 2-3 раза становятся толще. Путем систематического повторения способа в течение года можно получить до 100000 верхушечных побегов иэ одного исходного черенка.

tana дает в течение t мес. приблизительно 5 боковых ростков. Их срезают и помещают в твердую питательную среду. Через 1 мес, они начинают пускать корни. т.е. только одну фибриллу. 5 полученных растений пересаживают наконец в землю.

Для предлагаемого способа характерным является то, что стерильные

1590029 черенки побегов растений помещают в соответствующий сосуд с твердой питательной средой, затем сосуд заполняют питательным раствором, содержащим, при желании вещества, регулирующие рост, и оставляют побеги в этой погруженной системе для прорастания, Возникшие разветвленные культуры, имеющие пазушные почки If боковые побеги, нарезают на части, появившиеся при этом верхушечные побеги образуют корни по известному способу и по истечении переходного периода в теплице высаживают на открытом воздухе, :.еренки, полученные из нижней и средней части культуры побега, снова культивируют.

Для подкрепления твердой г:итательной среды представляется целесообразным применение агар-агара. Твердая питательная среда обеспечивает растение основными питательными веществами. Питательные вещества проводятся через сосудистый пучок. Твердая питательная среда необходима для того, чтобы побеги могпи принять положение, соответствующее естественным усло- виям, т.е. вертикальное.

Жидкий питательный раствор обеспечивает культуру побега дополнительными питательными веществами,. Культуры, залитые негормональным питательным раствором, содержащим минеральные соли„ сахар и витамины, образуют побеги,,которые на 30 — 1007. толще и длиннее, чем побеги, не погруженные в питательнйй раствор. е

Однако к жидкому питательному раствору могут быть добавлены также рас- А0 тительные гормоны. Из них сл дует упомянуть ауксин, цитокинин гиббереллин. Из цитокининов особенно удачным оказался 6-бензиламинопурин (6-бензиладенин). Под воздей=твием регуляторов роста растений происходит массовое развитие побегов погруженной культуры. Это разв:лтие проиСходит интенсивнее примерно на

100-5002 чем г культу- ах которым

/Oy З регулятор роста подавался в основную питательную среду. В культуре, залитой жидким питательным, раствором, содержащим цитокинин, происходит образование листовых почек и верхушек побегов на всей поверхности погружен-1 ной части растения, даже вновь образованные почки продолжают разВетвляться дальше.

ИН„ИО

К 10.з

СаС1. 2Н О

И880 7Н О

КН,РО, I%a EI) Т А

Ге80,,„7Н О

ЦЗ З

ИпБО 7Н <О

ZnSO. 7Ii 0

KJ

Иа Хо Од 211 0

СПЯОФ 5Н20

СоС1 6Н О, Сахароза

Агар-агар

Никотиновая кислота

Пиродоксин

37,2

27,8

6,2

22,3

8,6

0,83

0,25

0 025

0,025

10000

Вариант II, Из исследованных 1015 летних растений Amsonia tabernaemontana на содержание биологически активных веществ был отобран один экземпляр с содержанием таберзонина

12,26Х. В апреле от этого растения были срезаны побеги длиной 25-30 см примерно с 20 листочками. Затем побеги для лучшего пользования нареза-, лись на части длиной примерно 10 см и в течение 1 ч промывались под водопроводной водой. Затем листья снова срезались примерно на четверть своей величины. Подрезанные таким образом части побегов стерилизовались в ЗЖном растворе гипохлорита натрия в течение 15 мин при постоянном встряхивании. Из раствора гипох лорита час ти растений помещались в дистиллированную воду, стерилизованную в автоклаве, и промывались при встряхи-ван пл в течение 10 мин. Зто действие также как и последующие осуществлялось в асептических условиях в стерильном прививочном шкафу. Побеги, взятые из стерильной воды, нарезались скальпелем в стерилизованной теплом чашке Петри на части, имеющие по 2-3 листочка, причем под самым нижним листком оставлялась часть побега длиной примерно 1 см.

Подготовленные таким образом черенки помещались в стеклянные колбы объемом 200 мл, каждая из которых содержала 100 мл улучшенной питательной среды Иурашиге-Скуга. Питательная среда имела слудующий состав, мг/л:

1590029

НС1. 0,5

Тиамин, 11С1 0,1

50 ти с 2-4 листочками, подходящие как

При использовании учитывалось то, чтобы черенки полностью до первого листочка находились в питательной среде. Колбы содержались при температуре 20-25 С в то время как ежеднев- о ное 16-ти часовое искусственное освещение достигла силы освещения 10000 лк церез неделю в пазухах листа появились листовые почки. %рез следующие две недели из них выросли побеги длиной примерно 5-7 см, имеющие 1012 листков.

Эти стерильные боковые побеги разделялись и нарезались на части, имеющие по 2-4 листочка. Эта рассада высаживалась в питательную среду указанного состава на глубину по мень шей мере 1 см (поэтому необходимо при нарезке под последним листком оставлять место соответствующей длины).

Затем еще раз подготавливалась подобная питательная среда, но без агар-агара, вместо которого использовали 1 мг/л 6-бензиламинопурин.

50 мл этого жидкого питательного раствора наливали в каждую колбу объемом 200 мл. Черенки, находящиеся под питательным раствором, при температуре 20-25 С постоянно подвергались освещению силой 8000 лк.

На всех пазухах листа образовались листовые почки, из которых в течение 3 — 4 недель выросли побеги длиной 5-10 см. Характерным для них явилось то, что они также со своей стороны снова образовали почки и побеги. Самые сильные побеги выросли из жидкой питательной среды, часть. находившаяся на воздухе, образовала мало листовых почек в пазухах листа или больше их не образовывала. Теперь культура делилась. Срезались верхушки побегов, имеющие 5 — 7 листков, ставились в твердую питательную среду и через 2 недели, когда образовывалось достаточно корней, высаживались в землю.

Оставшаяся нижняя и средняя часть культуры нарезалась на куски с 2-4 листочками или 5-10 почками на каждом.

Затем они также ставились в твердую питательную среду указанного состава. и по предлагаемому способу заливались жидким питательным раствором, содержащим 1 мг/л 6-бензиламинопури10

40 на. Культуры культивировали при 20о

25 С и постоянном освещении с силой освещения, равной 8000 лк в течение

2-4 недель. 3а это время вырастают уже имеющиеся боковые побеги, разветвляются дальше .и образуют новые почки. Соответственно образованные верхушечные побеги срезаются и образуют корни, остаток культуры снова нарезается на части с почками и побегами.

Изучалось погруженное размножение эстрагона Artemisia dracunculus беэ регулятора роста (вариант III).

От выросшего на открытом воздухе эстрагонного растения Artenisza dracunculus, сорт Grune Murre в июне были срезаны побеги длиной примерно

10 c».. Побеги промывали в течение

2 ч пад подопроводно11 водой, затем стерилизовали в 3 7-ном растворе хлорита натрия в течение. 10 мин, после чего промывали стерильной дистиллированной водой в течение 20 мин и нарезали в стерильных условиях на части примерно 3 см длиной и имеющие по

2-4 листочка. Эти черенки ставили в питательную среду соответственно варианту II. Однако питательный раствор «е содержал регулятора роста растений.

Под действием жидкого питательного раствора культуры побегов начинали интенсивно расти. Рост культуры оказался сильнее в 2-5 раз по сравнению с культурой, не имеющей жщкой питательной среды. Культуры выдерживаются при температуре 20-25 C npu постоянном искусственном освещении с силой освещения 8000 лк. Культуры побегов„ находящиеся в колбах объемом 200 мл и содержащими 100 мл питательной среды, за 4-5 недель полностью .занимали воздушное пространство колбы. Гобеги длиной 8- l5 см были толщиной 2-3 мм, набухшие и относительно мало разветвленные.

Культуры побегов нарезали на часдля корнеобразования, так и для культивирования следующих побегов.

Для корнеобразования черенки побегов ставили на 24-96 ч в питательную среду в соответствии с вариантом II которая дополнительно еще содержит

1 мг/л 2,4-дихлорйеноксиуксусную кислоту. Затем черенки переводятся в питательную среду без регулятора

1590029

8 чием, что раствор не содержал агарагар, а вместо него — кинетин в концентрации 1 мг/л. В колбах, заполроста, где через две недели на каж-. дом черенке образуются корни длиной

5-10 см по мере, надобности 2-5 см.

Растения с образованными корнями, если нужно получить материал для посадки, содержится без жидкого питательного раствора.

Однако растения с образсванными корнями можно также поместить в жидкий питательный раствор. В этом случае одновременно происходит массовое размножение побега. Путем систематического повторения предлагаемого способа в течение одного года

Формула изобретения

Способ получения растительного материала для размножения растении, включающий высаДку стерильных черенков побегов растений.в сосуд с агаризованной питательной средой, со25 держащеи в качестве регулятора роста цитокинин, культивирование на этой среде до появления боковых побегов, микрочеренкования их, помещение черенков на питательную среду для укоренения, пересадку укорененных черен30

Составитель С.Куваева

Техред Л.Сердюкова Корректор О.Ципле

Редактор И. Середа

Заказ 2549 Тираж 436 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 из одного побега можно получить

100 000 растений с корнями.

Изучалось погруженное размножение

Catharantus roscius (vinca rosca) с кинетином. С растений Catha. cantus, растущих в теплице, срезали боковые побеги длиной 10-15 см. В течение 4 ч побеги промывали под водопроводной водой, затем оставляли в 1Е-ном растворе гипохлорита натрия в течение

25 мин и непосредственно после этого промывали в стерильной дист:яллированной воде в течение 30 мин. Побеги нарезали на черенки с 2-4 листочками и по способу, описанному в варианте

II, ставили в твердую питательную среду, выдерживали при температуре

25-28 С и ежедневно в течение 16 ч освещали с силой освец1ения 10 000 лк.

Верхушки черенков продолжали расти, однако в целом не разветвлялись, а из черенков, полученных из боковых побегов, появлялись большей частью два боковых побега.

Через 3-4 недели возникшие боковые побеги и выросшие верхушечные побеги нарезали и черенки ставили в твердую питателнную среду согласно варианту II. Колбы с черенками заполняли жидким питательным раствором по 50 мл. Состав питательного раствора соответствовал рецепту, указанному в варианте II с тем разлиненных раствором, боковые побеги ста5 ли в 2-3 раза толц|е, чем побеги, выросыие на твердой питательной среде без заливки питательным раствором.

Чем чаще полученные побеги прививаются, тем интенсивнее становится развитие побегов, а также корнеобразование верхушечных побегов становится лучше. Путем систематического повторения предлагаемого способа из одного единственного верхушечного побега в течение одного года можно получить примерно 100 000 верхушечных побегов ° ков в теплицу, а затем в открытый грунт, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, после высадки стерильных черенков побегов растений в сосуд с агаризованной питательной средой, сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного погружения черенков, культивирование осуцествляют при 16-часовом фотопериоде, причем на питательную среду для укоренения помещают черенки, полученные из верхушек побегов, а черенки из средней и нижней частей побегов возвращают на стадию культивирования с полным погружением в жидкую питательную среду.