Способ размножения культурных растений in viтrо
Изобретение относится к сельскому хозяйству. Цель изобретения - повьшение выхода приживающихся при пересадке саженцев. Культивируют эксплантанты на среде Мурасиге-Скуга.. Доращивают, проростки на той же среде с уменьшенным в пять раз содержанием солей. Среда дпя доращивания дополнительно содержит 2-20 мг/л соединения общей формулы R-CONR R,, где при R-CHj, CHjCl, CHClp CHClj, СС1з; R и Rj вместе - группа (CHj) или при R - СНС12 и R -водород; Rj- изопропил, С -С -алкил,цик- /логекснл, фенил, бензил, аллил или группа (CH2)jNCOpHC, или при R-CHCl и R,- метил, этил-, RI,-изопропил или бензил, нпи при R - СНСХд; R и R каждьй - изопропил, изобутил, амил. При добавлении дихлорацетилгексаметиленимина в питательную среду количество переживших пересадку саженцев гвоздичных растений при концентрации 6 мг/л поднялось до 96%, а в варианте без добавления составило 46%. Показано также применение способа при получении вегетативного материала герберы, виноградного растения для тканевой пересадки, растений: ежевики , для размножения не пораженных вирусом привоев яблок. 9 табл. СУ) 00
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
COLlHAËÈÑÒÈ×ЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (sg 4 А 01 Н 3/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ к гьаткнт
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
rtO ДЕЛАМ ИЗОБРЕ ГЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3526204/30-15 (22) 18.12.82 (31) 3840/81 (32) 18. 12. 81 (33) HU (46) 15.08.88 Бюл, У 30 (7t) Эсакмадьярорсаги Ведьимювек (ни) (72) Тибор Фаркаш, Ференц Феглейн, Иболиа Хорват, Янош Надь, Ласло
Виг, Аннамариа Месарош и Иштван Тот (HU) (53) 631 ° 547(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
У 1076034, кл. А 01 Н 3/00, 12.11.8t
Патент Франции 9 2153002 кл. А 01 N 21/00, 1973.
Патент CI1IA В 3574746,кл.260-561, 1971. (54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ КУЛЬТУРНЫХ
РАСТЕНИЙ IN VITRO (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству. Цель изобретения— повышение выхода приживающихся при пересадке саженцев. Культивируют
„„SU „„1417787 А 3 эксплантанты на среде Мурасиге-Скуга.. Доращивают,проростки на той же среде с уменьшенным в пять раз содержанием солей. Среда для доращивания дополнительно содержит 2-20 мг/л соединения общей формулы R-CONRgRg „ где при R-CH, СН Cl СНС1, СНС1, СС19 э К1 и Кх вместе — группа (СН ) или при R — СНС12 и Rq-водород; R - изопропил, С, -С -алкил,цик)логексил, фенил, бензил, аллил или группа (СН ) < ИСО НС, или при R-СНС1 и R, — метил, этил; R -изопропил или бензил, или при R — СНС1 ; R и R каждый — изопропил, изобутил, амил.
При добавлении дихлорацетилгексаметиленимина в питательную среду количество переживших пересадку саженцев гвоздичных растений при концентрации
6 мг/л поднялось до 96Х, а в варианте без добавления составило 46Х. Показано также применение способа при получении вегетативного материала герберы, виноградного растения для тканевой пересадки, растений: ежевики, для размножения не пораженных вирусом привоев яблок. 9 табл.
1417787
Изобретение относится к способу растений переживают пересадку, а разтканевого раэмноже«ия растений и мо- витие самих переживших растений прожет найти применение в сельском хо-, исходит сильнее. зяйстве. Обработку растений водными раствоНедостаток известных способов за- рами соединений общей формулы произвоключается в том, что хотя растения в дят следующим образом:а) соединение в условиях in vitro размножаются без, концентрации 1-20 мг/л растворяют в пиограничений, при пересадке в почву в тательной среде, в которой находятзависимости от нида культуры 20-607 10 ся корни растений, б) выращиваемое на выращиваемых в стерильных условиях питательной среде растение корнями перастений погибают. ред пересаживанием окунают в водный
Цель изобретения — повышение выхо- раствор концентрацией 1-20 мг/л сое« да приживающихся при пересадке сажен- динения общей формулы, б) выращиваецев.. 15 мое в условиях in vitro растение пеСогласно предлагаемому способу тка- ресаживают в пропитанную водным растневого разведения выращиваемые рас-, вором соединения общей формулы землю, тения обрабатываются водным раствором r} выращиваемые в условиях in vitro соединения общей формулы растения после выкапывания в случае Н1 2р необходимости орошают несколько раз всоы водным раствором указанных соедине 2 ний концентрацией 5-15 мг/л. после выращивания в условиях in vit- При экспериментах была использого растений отходы после высажива- вана питательная среда для размножения в условиях in.vivo существенно 25 ния в условиях in vitro, содержащая ! уменьшаются и эначительно больше мг/л:
СаС1 2 2Н О 439 у 300 Zn$04 > 7Н О 8,600
СоС1 2Н О 0,025 .Сахар 3-45,000
Cu$0 5Н О 0,025 Инозит 100,000
FeNaEDTA 336,6 ;Никотиновая кислота,10,000
Н3803 6,200 - Солянокислая соль тиамина 30,000 . KH KJ 0,830 .. Аденинсульфат 2Н О 0-80,000 KNOg 1900.000 Индолоуксусная кислота 0-10,000 gSOq" 7Н О 370,000 Кинетин 0-30,000 :Мп$0 4Н О 22,300 Агар-агар 7-10,000 NaH„ РО 2Н О 96,000 Na MoO42Н О 0,250 NH(NOg 1650,000 Перечисленные вещества растворялись в дистиллированной воде, при рН 5,8, затем добавлялся агар-агар 45 и питательная среда кипятилась до просветления, потом в стерильных условиях расфасовывалась в колбы, отверстия которых закрывались бумажной пробкой. Затем колбы устанавливались в автоклав и питательная среда стерилизовалась при 121 С. Пример 1. Получение вегетативного материала гвоздичных растений для тканевого разведения. Мерис55 темные ткани выращиваемых по известному способу н теплице черенков гвоздичных растений готовились в стерильных условиях и размножались на питательных средах Мурашиге-Скууга, . Меристемы гвоздик вначале прорастали, затем начинали делиться. Из каждого отростка через 6 недель после введения в питательную среду вырастало 10-15 побегов, которые высаживались по отдельности на свежей питательной среде и были пригодны для дальнейшего размножения. Скорость размножения побегов составляла в месяц 10-15 побегов. После фазы деления побегов гвоз" дичных растений обеспечивалось образование корней, для чего применялась основная питательная среда с ослабленной в пять раз концентрацией с той разницей, что в эту питательную 87 4 в концентрации 0,1 мг/л была,цобавлена и-хлорфеноксиуксусная кислота в концентрации О, 1 мг/л. Затем к питательной среде были добавлены различные соединения по общей формуле в различных концентрациях .и растения выращивались на этих питательных средах до образования корневой системы. Когда корни стали достаточно большими для высаживания,-растения были высажены в теплицу и развивались в ней. Влияние предлагаемых соединений на развитие растений гвоздики представлено в табл,2. 14177 Примененная вместо индолуксусной кислоты и-хлорфеноксиуксусная кислота повысила долю переживших растений гвоздики с 46 до 61Х. С другой стороны видно, что применение растворов соединений согласно изобретению еще больше повысило жизнеспособность после высадки. Стебли и листочки выращиваемых гвоздик были толще, а их . зеленая окраска отличалась более темным тоном, чем у необработанных контрольных растений. Пример 4. Вегетационный материал герберы готовился путем тканевого разведения, как указано в примере 2. Наименования примененных соединений по общей формуле, концентра., ции, в которых они применялись, и процентное соотношение переживших растений показано в табл.Э. Пример 5. Способ по примеру 3 был применен для ежевики без колючек„ Результаты измерений приведены в табл.4. Пример 6. Как и р примеР@.3> готовился вегетационный материал виноградной лозы для метода тканевого размножения. Примененные соединения по общей формуле, их концентрации, процентное соотношение переживших растений видны иэ табл.5. Пример 7. Способ по примеру Э бып применен также .для размножения не пораженных вирусом привоев яблок. Примененные соединения, их концентрация и процентное соотношение переживших растений показаны в табл,б. Способ согласно изобретению может успешно применяться для повышения среду была добавлена индолуксусная кислота в концентрации 0,1 мг/л. С помощью питательной среды за счет добавления в нее различных коли5 честв дихлорацетилгексаметиленимина готовилась серия питательных сред различной концентрации и выращивание производилось на этих питательных средах. Когда корешки достигли за- 1р данного размера, гвоздичные растения для получения саженцев в условиях in vivo высаживались в теплицу. В табл.1 представлен выход прижившихся саженцев по предлагаемому )S способу. У гвоздичных растений при добавлении дихлорацетилгексаметиленимина в питательную среду количество пе реживших пересадку саженцев гвоздич- 2р ных растений при концентрации бмг/л поднялось до 967.. Таким образом,эффективность техники разведения была увеличена более чем на 1007, что существенно улучшает экономичность 25 предлагаемого способа. Пример 2. Получение вегетативного материала герберы для тканевой пересадки. Растения герберы размножались 1п vitro по предлагаемому спо- 30 собу размножения и образования корневой системы. К одной части пита. тельной среды для образования корневой системы в концентрации 10 мг/л добавлен дихлорацетилгексаметиленимин и половина растений образовала корневую систему. Затем выращенные in-vitro растения были помещены в теплицу и у развивавшихся в условиях in vivo растений производился под- 4р счет погибших и переживших саженцов. Было установлено, что 98-100Х развивших на питательной среде с содержанием 10 мг/л дихлорацетилгексаметиленимина корневую систему растений пережили пересадку, тогда как на необработанной контрольной питательной среде из образовавших корневую систему растений погибло 30-35Х. Обработанные растения были более плотными, их листы были тверже и более развитыми. Пример 3. Как и в примере 1, бьш приготовлен вегетационный материал гвоздичных растений с тем отличием, что к разведенному в пять раз основному питательному раствору для стимуляции образования корневой системы вместо индолуксусной кислоты 35 или при R — СНС1 и R — метил,этил, R <- изопропил или бенэил, или при R — СНС1, R ) и R каждый— изопвопил. иэобутил, амил. Т а блица 1 47 6 96 10.12 20 О (контроль) 70 46 5 14177 эффективности размножения как культурных, так и декоративных растений посредством тканевого разведения,а также для повышения способности к вы5 живанию растений после высаживания. Кроме того, стебли и листья обработанных растений становятся сильнее, лучше развиваются, их окраска становится более темной, чем у необработанных растений, а слой воска на листьях становится толще. Обработанные предлагаемым раствором соединений по общей формуле растения после пересадки начинают быстрее расти и в целом на две недели раньше приобретают размеры, необходимые для их реализации в торговле. Пример 7. Материал для размножения гвоздик приготовляется путем 20 выращивания ткани, как в примере 3. Название используемых соединений общей формулы, их используемая концентрация и процент выживающих при посадке растений представлены в табл.7. 25 Пример 8. Материал для размножения герберы приготовляется путем культивирования ткани, как в примере 3. Название используемых соедине- 30 ний общей формулы, их используемая концентрация и процент выживающих при посадке растений представлены в табл.8. Пример 9. С помощью способа и препаратов согласно примеру 7 приготовляют материал для размножения лишенной колючек малины (ежевики), винограда и не зараженного виру87 6 сом яблочного привоя. Соединения общей формулы используются в концентрациях 2,5,10,20 и 50 мг/л, причем сделаны наблюдения, что доля укоренившихся соответственно корню или выживших растений не зависит от концентрации. В табл.9 указаны применяемые соединения и определен процент выживания растений. Формула изобретения Способ размножения культурных растений in vitro, включающий культивирование эксплантатов в среде Мурасиге-Скуга н доращивание проростков на той же среде с уменьшенным содержанием макросолей, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода приживающихся саженцев, доращивание проростков осуществляют на среде, содержащей дополнительно 2-20 мг/л соединения общей формулы ЯСОНА" 1 у, где при R -CH>, СН С1, СНС1, СС1З, R, и Rg вместе — группа (СН ) <, или при R — СНС1 и R „-водород, R>-изопропил, С -С -алкил,циклогексил, фенил, бензил, .аллил или группа (СН ) NCOCHC1, 141.7787 Та блица 2 61 61 81 81 76 76 100 100 100 100 63 63 61 68 72 71 72 100 100 100 N-Дихлорацетил-r ексамид Таблица 3 63 63 82 83 80 82 100 100 100 100 68 70 Химическое обозначение соединения по общей формуле Необработанные контрольные соединения N-Ацетип-гек саметиленимин N-Хлорацетил-гексаметиленимин N-Дихлорацетил-гексаметиленимин N-Трихлорацетил-гексаметиленимин N-Дихлорацетил-дииз обутил амид N-Дихлорацетил-изопропиламид N-Дихлорацетил-трет-бутиламид N,N-Бис(дихлорацетил)-гексаметиленамин Химическое обозначение соединения по общей формуле Необработанные (контрольные) растения N-Ацетил-гексаметиленимин N.-Хларацетил-гексаметиленимин N-Дихлораметил-гексаметкпенимин N-Трихлорацетил-гексаметиленимин Доля образовавших корневую систему или переживших растений, Ж, при концентрации соединения по общей формуле, мг/л 2 5 10 20 98 . 100 Доля образовавших корневую систему или переживших растений, 7 при концентрации соединения по общей формуле, мг/л 5 (10! 4! 7787! о Продолжение табл 3 70 73 74 75 72 7.5 75 100 100 100 100 100 100 100 100 Таблица 4 Доля образовавших корневув систему или перепивших растений, 7., при концентрации соединения по общей формуле, мг/л 2 5 10 20 Необработанные (контрольные) . растения 65 65 86 86 80 81 N-.Хлорацетил-гексаметиленимин 80 Ф 1-Дихлорацетил-гексаметиленимин 100 N-Трихлорацетил-гексаметиленнмин 70 N-Дихлорацетил-диизобутиламид . 70 ! N-Дихлораце тил-из опро пил амид 75 N-Дихлорацетил-трет-бутиламид 76 100 1.00 . 100 70 65 74 76 75 78. 100 100 100 100 100 100 100 100 Химическое обозначение соединения по общей формуле N-Дихлораметил-диизобутиламид N-Дихлорацетил-изопропиламид N-Дихлорацетил-трет-бутиламид N,N-Бис(дихлорацетил)-гексаметилендиамин N-Дихлорацетил-гексаметиламид Химическое обозначение соединения по общей формуле N-Ацетил-гексаметиленимин. c c N,N- -бис(дихлорацетил)-гексаметилдиамин N-Дихлорацетил- гексиламид 1 j! 141 7787 Таблица 5 Доля переживших пересадку растений, Е, при концентрации соединения, мг/л 62 И-Ацетил-гексаметиленимин 81 84 N-Хлораметил-гексаметиленимин 73 70 N-Дихлорацетил-гексаметиленимин 100 N-Трихлорацетил-гексаметиленимин 65 100 100 100 63 N-Дихлорацетил-диизобутипамид 72. 68 71 N-Дихлорацетил-изопропиламид 72 72 N-Дихлорацетил-трет-бутиламид 72 70 100 100 100 100 100 100 100 100 Таблица 6 Доля переживших пересадку растений по формуле, мг/л 2 5 10 20 70 70 85 83 79 N-Хпорацетил-гексаметиленимин 83 N-Дихлорацетил-гексаметиленимин 100 N-Трихлорацетил-гексаметиленимин 74 100 100 100 72 80 82 80 81 90 89 100 100 100 100 100 100 100 100 Химическое обозначение соединения по общей формуле Необработанные (контрольные) растения N,Ni -Бис(дихлорацетил)-гексаметилендиамин N-Дихлорацетил-гексиламид Химическое обозначение соединений по общей формуле Необработанные (контрольные) растения N-Аце тил-ге к саме т иле н ими н М-Дихлорацетил-диизобутиламид N-Дихлорацетил-изопропиламид N-Дихлорацетил-трет-бутиламид N N -Бис(дихлорацетил)-гексаме/ тилендиамин N-Дихлорацетил-гексиламид 1 I 1 5 10 20 14 1417787 с Таблица 7 (Г 2 5 10 20 61 100 98 76 75 8.5 83 75 80 75 N — (Дихлорацетил} -ди-н-бутиламид 63 68 N-(Дихлорацетил)-бензиламид 86 90.90 97 100 Таблица 8 Доля укореняющихся соответственно корню или выживающих растений, 7., при концентрации соединений общей формулы, мг/л 63 94 78 77 85 82 79 82 80 95 95 83 98 100 100 100 Химическое название соединения общей формулы Необработанный контроль N-(Дихлорацетил)-циклогексиламид N- (Дихлорацетил) -аллиламид N-(Дихлорацетил)-анилин N-(Дихлорацетил)-п-бутиламид N-(Дихлорацетил}-метил-Й-бензиламид Химическое название соединения общей формулы Необработанный контроль N-(Дихлорацетил)-циклогексиламид N- (Дихлорацетил) - аллиламид N-(Дихлорацетил)-анилин N- (Дихлорацетил) -н-бутиламид Ч- (Дихлорацетил) -ди-н-бутиламид N- (Дихлорацетил) -бензиламид N- (Дихлорацетил) -11-метил-11-бен зиламид Доля укореняющихся или выживающих растений, %, при концентрации соединения общей формулы, мг/л 1 1 1 2 5 10 . 20 50 63 63 63 100 100 100 l 417787 Таблица 9 Химическое название соединения общей формулы Доля выживших растений, Х Малина Яблоня Виноград Необработанный контроль 65 62 N-(Дихлорацетил)-циклогексиламид 100 100 100 N- (Дихлорацетил) - аллиламид 75 90 N-(Дихлорацетил) -анилин N-(Дихлорацетил) -н- бутиламид 78 Н-(Дихлорацетил)-ди-н-бутиламид 100 100 N-(Дихлорацетил)-бензиламид ь N- (Дихлор аце тил) -N-ме тил-N-, -бензил-,амид 100 100 100 100 100 Составитель И.Юдинцева Техред Л.Олийнык Корректор С.Шекмар Редактор . А.Долинич Тираж 661 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35 ° Раушская наб., д. 4/5 Заказ.4080/59 Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
