Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения вакцины против сибирской язвы. Цель изобретения упрощение способа, повышение иммуногенной активности и выхода вакцины. Способ включает одностадийное культивирование вакцинного штамма в жидкой питательной среде, содержащей 77 82% панкреатического гидролизата казеина и 18 - 23% дрожжевого экстракта. Культивирование проводят в течение 41 48 ч при 30 33°С, pH среды поддерживается на уровне 8 9. Полученную бактериальную массу 1500 600 миллион микробных клеток в 1 см³ с содержанием живых спор 90 95% лиофилизируют. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения вакцин против сибирской язвы. Цель изобретения упрощение способа, повышение иммуногенной активности и выхода вакцины. П р и м е р 1. Культура штамма Bacillus anthracis СТИ-1 в количестве 25 см³ вносят через посевную трубку в стеклянный ферментер с 1 л питательной среды. Состав питательной среды: панкреатический гидролизат казеина 800 мл (80% ), дрожжевой экстракт (1:3) 200 мл (20%), рН среды доводят до 7,3 путем добавления К₂НРО₄ (5 г) и КН₂РО₄ (1 г), содержание общего азота 100 200 мг аминного азота 45-50 мг Культивирование проводят при рН 8,0 глубинным методом в течение 41-48 ч. Подачу стерильного воздуха через барботер в объеме 2,5-3,0 дм³/мин осуществляют при температуре культуральной жидкости 30-33^оС в течение 36 ч, остальное время (5-12 ч) культивирование проводят без аэрации при комнатной температуре 20±2^оС для получения бактериальной массы с содержанием спор не менее 90% Контроль за уровнем рН осуществляют через 17 ч. При снижении рН до значения ниже 8,0 к питательной среде добавляют 10%-ный раствор NaOH или КОН для доведения рН до 8,0 Для сравнения одновременно проводят культивирование штамма на известных жидких питательных средах: в бульоне Хоттингера и в среде, приготовленной на основе мясокислотного гидролизата. Результаты представлены в табл. 1. Из приведенных данных видно, что наиболее продуктивной является казеиново-дрожжевая среда, причем композиция живых спор, получаемая на этой среде при данном режиме, составила 500-600 млн/см³. Полученную в результате культивирования на казеиново-дрожжевой среде бактериальную массу штамма СТИ-1 смешивают с 30% глицерина и проверяют на стерильность, безвредность, активность. ИмД₅₀ изготовленного таким образом биопрепарата составит 0,87 млн˙спор. П р и м е р 2. Изучено влияние рН на спорообразование в процессе культивирования вакцинного штамма Bacillus anthracis. Для этого культуру штамма СТИ 1 по 25 см³ вносят в три ферментера, содержащие по 1 л казеиново-дрожжевой среды, включающей 77% панкреатического гидролизата казеина и 23% дрожжевого экстракта. Культивирование проводят по примеру 1. Через 17 ч измеряют рН культуральной жидкости в ферментерах. В ферментер N 1, где рН культуральной жидкости равно 6,4-6,7 добавляют 10%-ный раствор NaOH, доводя рН до 8,6-9,0, а рН среды в ферментере N 2 (6,4-6,8) для контроля оставляют без изменений. Культуральная жидкость в ферментере N 3 через 17 ч культивирования штамма имеет рН 8,2-8,3, т.е. выше 8,0 и в нее раствор едкого натрия не добавляют. Результаты приведены в табл. 2. Таким образом, способ позволяет получить культуру штамма СТИ-1 со степенью спорообразования более 90% при концентрации спор 500-600 млн/см³ и повысить иммуногенную активность и выход биопрепарата.

Формула изобретения

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЖИВОТНЫХ, включающий подготовку посевного материала штамма Bacillus anthracis СТИ-1, выращивание культуры, индукцию спорообразования в жидкой питательной среде, содержащей дрожжевой экстракт, с регуляцией pH и аэрацией, смешивание бактериальной массы со стабилизатором, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, повышения иммуногенной активности и выхода вакцины, стадию выращивания и спорообразования проводят одновременно в жидкой питательной среде, дополнительно содержащей панкреатический гидролизат казеина, при следующем содержании компонентов, об. Панкреатический гидролизат казеина 77-88 Дрожжевой экстракт 18-23 при этом содержание в среде общего и аминного азота составляет 100-200 и 45-50 мг соответственно, а pH поддерживают на уровне 8-9.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2