Способ получения сорбента для аффинной хроматографии

 

Изобретение относится к получению сорбентов на основе целлюлозы и может быть использовано в аффинной хроматографии. Изобретение позволяет повысить эффективность иммобилизации белка с 2,4 до 6,7-47% и производительность сорбента с 52 до 56-96% в 1 ч, что достигается обработкой диальдегидцеллюлозы с содержанием альдегидных групп 0,247-0,432 мг-экв/г или 2-(3 1-амино-4-β-метоксифенил)-сульфанилэтилового эфира целлюлозы, модифицированного глутаровым альдегидом, с содержанием альдегидных групп 0,10-0,15 мг-экв/г 2-5%-ным раствором желатины в фосфатном буфере при температуре 50-60°С и модуле 8-10. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН е

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

М A BTOPGHOMV СЯИД=ТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 443973.7/28-05 (22) 10.06.88 (46) 15.07.90. Бюл. ¹ 26 (71) Всесоюзный научно -исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности (72). З.Н.Степанова, Е.В.Богуславская, С.В.Стручак, В.В.Шурыгина, В.В.Рыльцев, .В.Н.Филатов и Р.Б.Вирник (53) 661.728. 8(088.8) (56) Богуславская Е.В ° и др. Получение волокон — биосорбентов, содержащих химически связанный альбумин.

Деп. ВИНИТИ № 909-ХП-87, 25.08.87.

Изобретение относится к получению сорбентов на основе целлюлозы и может быть использовано в аффинной хроматографии. .Цель изобретения — повышение эффективности иммобилизации белка и производительности сорбента.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 10 r целлюлозы в виде медицинской марли ГОСТа 9412-77 обрабатывают 50 мл раствора йодной кислоты концентрации О, 123 моль/л (рН 4) при 250С в течение 15 мин, затем отжимают до. привеса 1002 .и выдерживают 18 ч при .комнатной темпера,. SU„„1578138 А 1

1 (51)5 С 08 В 15/00, В 01 J 20/24, 20/30

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ

АФФИННОИ ХРОГ1АТОГРАФИИ (57) Изобретение относится к получению сорбентов на основе целлюлозы и может быть использовано в аффинной хроматографии. Изобретение позволяет повысить эффективность иммобилизации белка с 2,4 до 6,7-472 и производительность сорбента с 52 до

56-96K в 1 ч, что достигается обработкой диальдегидцеллюлозы с содержанием альдегидных групп 0,247I

0,432 мг-экв/г или 2-(3 -амина-4-/3-метоксифенил)сульфанилэтилового эфира целлюлозы, модифицированного глутаровым альдегидом, с содержанием альдегидных групп 0,10-0, 15 мг-экв/г

2-57-ным раствором желатины в фосфатном буфере при температуре 5060 С и модуле 8-10. 1 табл. туре в темном месте. Получают диальдегидцеллюлозу (ДАЦ), содержащую

0,247 мг-экв/г альдегидных групп.

0,76 г желатины заливают 19 мл фосфатного буфера с рН 7,5, выдерживают 30 мин, добавляют еще 19 мл буфера и выдерживают на водяной бане при 50 С до полного растворения. Получают 2Х-ный раствор желатины.

3, 7 г ДАЦ, содержащей О, 247 мг-экв jr альдегидных групп, имеют в 27-ный раствор желатины в фосфатном буфере (рН 7,5) при модуле 10 и выдерживают

3 ч при 50 С, затем отжимают до приве-, са 1507. и выдерживают 16 ч,при ком

1578138 иатной температуре. Полученный сорбент многократно промывают водой.до пОлного отсутствия желатины в промывной воде. Контроль осуществляют спек э трофотометрически. Продукт содержит на 1 г 25 мг иммобилиэованной желатины. Количество химически связанной желатины равно 0,0925 r, что соответс гвует эффективности иммобилизации

12, 2 . Производительность сорбента (Х извлеченного вещества эа 1 ч) по фнбронектину равна 56ь.

О7

Пример ы 2-5, Выполйяют ана-! логично примеру 1, но при других значениях параметров. Данные представлены в таблице.

Пример 6. В кристаллизатор помещают 151 мл раствора углекислого натрия концентрации 200 г/л и в него высыпают 302 г сернокислого эфира 4 — 3-оксиэтилсульфонил-2-аминоаниО зола и растирают стеклянной палочко " дО образования однородной массы. Злт м в эту массу помещают 15,1 г целлю-25 лозы в виде медицинской марли и выдерживают 10 мин при комнатной темперлтуре и рН 11,0, отжимают до привеса 100Х и запаривают 20 мин. Промывают многократно горячей водой и нЕсколько .раз ацетоном, высушивают и затем экстрагируют в ацетоне в аппарате Сокслета 4 ч.

8,2 г полученного эфира целлюлозы обрабатывают 164 мл 10Х-ного раствора глутарового альдегида в фосфатном

35 буфере, имеющем рН 6,2, при комнатной температуре в течение 24 ч при перемешивании, затем многократно промывают дистиллированной водой.

Получают 2-(3 -амино-4-9-метоксифе-l ! ннл) сульфанилэтиловый эфир еллюло3bl (СЭЦ) обработанный глутаровым аль1 дегидом, содержащий О,1 мг-экв/г альдегидных групп.

0,9 г желатины помещают в 18 мл фосфатного буфера на физиологическом растворе рН 7,5 и выдерживают сначала 35 мин при 25 С, затем на воо дяной бане при 60ОС до полного растворения. Получают 5Х-ный раствор желатины.

2,2 г сульфанилэтилового эфира целлюлозы, обработанного глутаровым альдегидом (ГА), помещают в нагретый о до 60 С 5 .-ный раствор желатины при модуле 8 и выдерживают сорбент при этой температуре 1 ч, а затем 19 ч при комнатной температуре. Далее отмывают сорбент попеременно .фосфатным буфером рН 7,5 и дистиллированной водой от избытка желатины до ее полного отсутствия в промывных .водах.

Контроль осуществляют спектрофотометрически, Продукт содержит на 1 г 70 мг иммобилизованной желатины. Количество химически связанной желатины равно

0,154 г,что соответствует эффективности иммобилизации 17Х. Производительность сорбента по фибронектину составляет 75Х.

Пример ы 7 — 9. Выполняют аналогично примеру 6, но при других значениях параметров.

Пример ы 10-12. Выполняют аналогично примеру 1, но в качестве белка использован альбумин.

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий обработку целлюлозного текстильного материала, содержащеro альдегидные группы, раствором белка и выделение целевого продукта, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения эффективности иммобилизации белка и производительности сорбента, в качестве целлюлозного текстильного материала используют диальдегидцеллюлозу с содержанием альдегидных групп

0,247-0,432 мг-экв/г или 2-(3 -амино-4- -метоксифенил)сульфанилэтиловый эфир целлюлозы, модифицированный глутаровым альдегидом, с содержанием альдегидных групп 0,10-0,15 мг-экв/г, в качестве белка — желатину, а обработку проводят 2-5 -ным раствором желатины в фосфатном буфере при температуре 50-60 С и модуле 8-10.

1578138 ОО осогИГОс-4,0„4

И О а И - Л 00 a e, СЧ N И

О

О С! О М О О а л л а л а а ф М

e - - М j Г О Л

NГ â€” — — М - -С И СЧ СЧ

l а

jjj О

Х U

О aJ.e С.

Oejj0X

И О O 00 СЧ O - N -0. O N с.1

СЧ М О СЧ . Л 00 СП СП СЧ

О O О О И) О О О О О О О

И. И И И И О О И И N N С 4

О О .О О О О

0 00 0100 Ф--И

0Е а ЕO Ю О

О 1О

О !

f»

Cjj

ООООИОИОООО л л а л л л а л л л л O

N И И N М И N С 4 N С 4 И Г! л

С4NN

ОООО

00 СО СО а а л л

ОООО

ОИО л л

С4 СЧ л л

О О

СЧ.N И

М С 1M

3 С4 л а л

OOO

0 Х

О 0j

Х I

Х ICI X л л л

ООО

Х

О

Cjj

Х

f»

С4

I 1 I 1 I 1 l !

1 чю

% 1 I I 1 I 1 1

I ЕС

1 О

1 Ф

1 fA

О Е»

Х О а а е

О О jjj

1 О С»! р>

I NС 1 б И Оf000 Е о

Х

Х

A

Е»

О

О х

ljj

Х

Е«

1

Х йГ

Х

3 а

tf

О

U о и

Д

Е» о

I у

О а

C(j а

>о

f 0

С0 а

С»! л Ф

I - о

Х

Х

Е

"а

lO

4 ! ъ

О

О

Е О I

О Х 1

Х О 1