Способ получения гидрокортизона

 

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 10.1Ч.1963 (№ 830564/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 12.XII.1964. Бюллетень № 24

Дата опубликования описания 15.1.1965

Кл. 12о, 25щг

30h, 2,О

Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР

МПК С 07с

А 611с

УДК

Авторы изобретения

Н. Н. Суворов, О. К. Никифорова, Л. А. Краснова и Е. Г. Балашова

Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт им. С. Орджоникидзе

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОКОРТИЗОНА

Подггисная группа № 44

Известны способы получения гидрокортизо<а с помощью культуры гриба АЬв1йа

Orchidis на среде, содержащей кукурузный экстракт и глюкозу.

При этих способах в качестве исходного продукта используют вещество «S» Рейхштейна, которое обычно получают омылением его ацетата с использованием металлического натрия. Выход гидрокортизона при его получении из вещества «S» Рейхштейна не пре|вышает 50% от теоретического количества.

Описываемый способ отличается от известных тем, что микробиологической трансформации подвергают ацетат вещества «S» Рейхштейна. Это позволяет увеличить выход целевого продукта и упростить процесс его получения.

Посевной материал выращивают на среде, содержащей 5% глюкозы, 2 % пептона и 0,3% кукурузного экстракта (па сухое вещество) при температуре 27 — 28 С в течение 48 час, Процесс микробиологического превращения ацетата вещества «S» Рейхштейна в гидрокортизоп проводят на среде, содержащей l,li% кукурузного экстракта (на сухое вещество) и

2,5% глюкозы, с начальным значением рН = 5,2 — 5,8.

Пример. Микробиологический синтез осуществляют в стерильных условиях в ферментере из нержавегощей стали емкостью 250 л, снабженном пропеллерной мешалкой (90 осмин), барботером для подачи воздуха, обогревом, отборником проб, воздушником, штуцером для введения стероида, загрузочным и выгрузочным люками. Исходные споры культуры Absidia Orchidis выращивают на картофельном агаре или пшене на матрацах при

27 С в течение 7 дней. Выращенные споры в асептических условиях заливают стерильной

10 водой в количестве 200 мл на матрац и помещают в 14 литровых колб с 200 мл стерильной среды в количестве 2,6 109 спор на литр среды. В состав среды входит 5i% глюкозы, 2% пептона и 0,3% кукурузного экстракта (на сухое вещество). Засеянные колбы помещают на качалку (200 об/мин) и выращивают культуру при температуре 27 — 28 С в течение 48 час.

Микробиологическое превращение ацетата вещества «$» Рейхштейна в гидрокортизон проводят на среде, содержащей 1,1% кукурузного экстракта (на сухое вещество) и 2,5% глюкозы. В ферментер заливают 70 л указанной среды и стерилизуют ее при 118 — 120 С в течение 30 мин. Посевной материал в виде двухсуточного мицелия асептически вводят в количестве 2800 мл, выращивают в течение

36 — 38 час при непрерывной подаче стерилького воздуха (1 объем на 1 л среды в минуту) и температуре 26 — 27 С. Мешалка работает в

30 течение всего процесса. В отсутствии посто166926

Предмет изобретения

Составитель В. Таратута

Редактор П. Шлаин

Техред Ю. В. Баранов Корректор Т. С. Дрожжина

Заказ 3355/17 Тираж 625 Формат бум, 60><90>/, Объем 0,13 изд. л. Цена 5 коп.

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР

Москва, Центр, пр, Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 ранней микрофлоры в 32-часовую культуру вводят 1,5 г ацетата вещества «S» Рейхштейна, растворенного в 90 мл горячего (60 С) этанола с целью адаптации культуры к стероиду, Затем смесь разбавляют 30 л стерильной воды и вводят 6,5 г стероида в 390 мл этанола (60 С), через 4 час — 16,5 г стероида в 990 мл этанола, еще через 5 час 16,5 г стероида в 990 мл этанола и в заключение еще через 5 час 13,5 г стероида в 810 мл этанола.

Через 10 — 12 час после введения последней порции ацетата вещества «$» Рейхштейна из ферментера отбирают пробу для хроматографического анализа на присутствие непрореагировавшего исходного продукта. В зависимости от качества кукурузного экстракта процесс ферментации заканчивается через 24 — 48 час.

Содержимое ферментера переносят па друкфильтр, отжатый мицелий промывают водой, а культуральную жидкость вместе с промывными водами экстрагируют хлороформом.

Хлороформные экстракты упаривают досуха и из полученной смеси гидрокортизона и вещества эпи-F выделяют гидрокортизон кристаллизацией из метанола. После трех кристаллизаций получают 24,4 г гидрокортизона с т. пл.

209 — 215 С.

По данным количественного анализа превращение ацетата вещества «S» проходит с общим выходом 85% (62% гидрокортизона и

10 38% вещества эпи-1.), из которого получают кортизон-ацетат.

15 Способ получения гидрокортизона с помощью культуры гриба Absidia Orchidis на среде, содержащей кукурузный экстракт и глюкозу, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и упрощения

20 процесса, микробиологической трансформации подвергают ацетат вещества «S» Рейхштейна.