Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов

 

Изобретение относится к медицине и касается вопроса определения и оценки фагоцитарной активности нейтрофилов по отношению к токсоплазмам. Целью изобретения является повышение точности диагностики. Для этого в качестве объекта фагоцитоза нейтрофилами применяют убитые эндозоиды токсоплазменного коммерческого антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Наряду с классическими методами оценки фагоцитарной активности определяют индекс специфической защищенности нейтрофилов (ИСЗН), который служит дополнительным диагностическим критерием для установления наличия токсоплазменной инвазии и обоснованием к назначению коррегирующей терапии.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

1615614 А 1 (29) (22) 2М8Р3 3Ц !

i222 222"-

F.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ДВтО1 СКОМ СВИДКтЕЛЬСтВЬ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4481248/30-13 (22) 06.09.88 (46) 23.12.90. Бюл. У 47 (71) Одесский научно-исследовательский институт вирусологии и.эпидемиологии им.И.И.Мечникова (72) В.А.Тишечкина, И.Н.Зубкова и Л;М.Трубина (53) 611.018.5.616.15 (088.8) (56) Гарибджанян Б.Г. Влияние ТИОТЗФа на фагоцитарную активность лейкоцитов крови. — Вопросы онкологии, 1964, т. Х, Р 12, с. 49-.52, Ьелокриницкий Д.В. фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови. Лабораторные методы исследования в клинике,/Под ред,В.В.Меньшикова. — H.: Медицина, 1987, с.310321. Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения фагоцитарной активности нейтрофилов по отношению к токсоплазмам в клинике и эксперименте.

Целью изобретения является повышение точности диагностики.

Сущность способа заключается в следующем.

Токсоплазменный сухой антиген для реакции иммунофлуоресценции разводят в 0 5 мл дистиллированной воды, подсчитывают количество токсоплазм в камере Горяева. К растворенному антигену добавляют среду 199, доводят концентрацию токсоплазм до 250(51) 5 (>: 01 N 33/48, А 61 В 10/00

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ, АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ (57) Изобретение относится к медицине и касается вопроса определения и оценки фагоцитарной активности нейтрофилов по отношению к токсоплазмам.

Целью изобретения является повышение точности диагностики. Для этого в качестве объекта фагоцитоза нейтрофилами применяют убитые эндозоиды токсоплазменного коммерческого антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Наряду с классическими методами оценки фагоцитарной активФь ности определяют индекс специфической защищенности нейтрофилов (ИСЗН), который служит дополнительным диагностическим критерием для установления наличия токсоплазменной инвазии и обоснованием к назначению коррегирующей терапий. 2 табл.

М®

300 тыс./мл и используют в тот же © 2 день в реакции фагоцитоза ° Кровь для исследования берут из пальца или Ю вены в стерильную стеклянную пробирку C5 с гепарином (из расчета 20 ЕД на

1 мл крови) в день постановки реак- 4 ции.

Гепаринизированную периферическую кровь в количестве 0,1 мл помедают в полиэтиленовую пробирку и туда же вносится О, 1 мл приготовленной суспензии токсоплазменного антигена, Смесь крови и антигена инкубируо ют в термостате при 37 С в течение

160 мин (2,5 ч) при периодическом легком встряхивании.

1615614

Через 40 мин инкубации забирают каплю смеси, наносят на предметное стекло и делают мазок. Смесь инкуби— руют еще 120 мин. После окончания ин5 кубации пробирку встряхивают и из оставшейся смеси крови с антигеном делают мазок, Иазки сушат на воздухе, затем фиксируют в смеси Никифорова

30 мин, окрашивают по Романовскому г имзе или по Нохту в течение 200 мин. Проводят подсчет 100 нейтроилов в свечовом микроскопе при увеичении 10190,, При просмотре мазков могут встре аться нейтрофилы с адсорбцией токсо лазмы на поверхности; с фагоцитиро—

1 ванными токсоплазмами; с разрывом леточной оболочки, распадом ядра, го пикнозом, деформированные с микоскопическим обнаружением токсоплазм,,асположенных внутри клеток, а также ез паразитов.

Для учета реакции в каждый из сроков подсчитывают копичество нейтро- 25 оптов с фагоцитированными токсоплазм ми на 100 просмотренных нейтрофил в (фагоцитарный индекс — ФИ как ( в, классическом методе); количество ф гоцитированных токсоплазм с посл дующим вычислением фагоцитарного числа (ФЧ как в классическом способе); кОличество разрушенных нейтрофилов на

1()0 просмотренных нейтрофилов (индЕкс разрушения — ИР).

По предлагаемому способу, помимо вычисления ФИ и ФЧ в каждый из сроков (40, 160 мин), предлагается подсчитывать индекс специфической защ пценности нейтрофилов, который выра- 40 живется отношением числа просмотренных н йтрофилов (100) к сумме нейтрофилОв с фагоцитированными токсоплазмдми и разрушенных нейтрофилов в соФо ответствующие сроки наблюдения (ИСЗН и ИСЗН )

ИСЗН

ФИ + ИР

В табл. 1 приводятся средние зна50 чения ФИ, ФЧ, определенные по классическому методу с использованием в качестве тест-микроба стафилококка ауреус шт. 209, и по предлагаемому методу с использованием в качестве те .т- системы токсоплазменного сухого антигена для РНИФ, а также средние значения ИСЗН.

Указанные параметры изучают у 11 серонегативных (группа Т-) и 12 лиц с положительными с ер оло гич ес кими или аллергическими реакциями на токсоплазмоз (группа Т+).В каждой группе пациенты со сходной клинической картиной, обратившиеся для обследования на токсоплазмоз по поводу акушерской патологии в анамнезе, вегетососудистой дистонии, лимфоаденопатии, заболевании глаз.

Из представленных данных видно, что общепринятые фагоцитарные показатели, полученные при использовании в качестве тест-микроба стафилококка, не дают четкого представления относительно характера специфической перестройки организма, зараженного токсоплазмами, тогда как большинство показателей и особенно индексы разрушения и специфической защищенности .нейтрофилов в отношении возбудителя токсоплазмоэа позволяют четко выявить токсоплазмоэ положительных и отрицательных лиц, что особенно важно при наличии низкого титра антител, определяющихся в серологических реакциях, Эта закономерность подтверждается и данными табл. 2, где приводятся индивидуальные колебания индексов завершенности фагоцитоэа в отношении обоих тест-микробов и специфической защиты от токсоплазм.

Более высокий индекс специфической защищенности нейтрофилов у токсоплазмозположительных лиц объясняется особенностью иммунных реакций при токсоплазменной инвазии: способность токсоплаэм размножаться в фагоцитах и сегментоядерных лейкоцитах, формирование иммунитета, который носит нестерильный характер, и как следствие этого процесса — защитная реакция нейтрофилов, выражающаяся в снижении фагоцитарной реакции по отношению к токсоплазмам.

Пример 1. Больная П., 36 лет, обрагилась в токсоплазмозный центр по поводу лимфоаденопатии. Больная в течение 4 мес обследуется и лечится у специалистов районной поликлиники.

При обследовании в токсоппазмозном центре: реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой иммунофлеоресценции (РНИФ) с токсоплазменными антигенами положительные

1:160 и i:ßÎ соответственно, внутрикожная проба (ВКП) положительная ++++;

5 16156

Фегоцитарная активность нейтрофилов: через 40 мин инкубации ФИ40 8%, HP

1%, через 2,5 ч 14 и 10% соответственно. Таким образом, ИСЗН = 11,1;

4о

Ф

ИСЗН = 4, 17 .

На основании клинических и ла, бораторных данных установлен диагноз: токсоплазмом, подострое течение, Пример 2. Больную У., 23 лет, 10 направляют на консультацию по поводу первичного бесплодия. PCK с токсоплазменным антигеном отрицательная, РНИФ положительная в титре 1:10, фагоцитарная активность нейтрофилов:

ФИ4о 14% ИР4о 14%, Н 160 18% HP 160 73%

Таким образом, ИСЗН =3 57 ИСЗН

1,09. Лабораторными данными диагноз токсоплазмоза не подтверждают.

Пример 3. Больная С., 36 лет., ?О обследуется в связи с безуспешным лечением вегетососудистой дистонии, В анамнезе самопроизвольный аборт.

PCK с токсоплазменным антигеном положительная в титре 1:10, РНИФ отри- !5 цательная, внутрикожная проба с токсоплазмином слабо положительная, фагоцитарная активность нейтрофилов: ИЗФс

1,0, ИЗФт О 81; HC3H40= 4, 1 7, HC3H1 =

2,32. Таким образом, при завершенном характере фагоцитоза стафилококка нейтрофилами фагоцитоз токсоплазм носит незавершенный характер, низкие титры комплементсвязывающих антител в сыворотке крови. HC3H, равныи

4,17, свидетельствует о возможности инфицирования токсоплазмами. Незавершенный характер фагоцитоза токсоплазмы, снижение ИСЗН через 160 мин до

2,32 отражают сравнительно низкую - 4 защищенность нейтрофилов. На основании данных клинического и лабораторного обследований устанавливают диагноз хронического токсоплазмоза с поражением нервной системы и необходимость назначения коррегирующей терапии.

14 6

Пример 4, У больной А., 35 лет, периодически отмечают субфебриальную температуру, в анамнезе самопроизвольный аборт, PCK с токсоплазмозным антигеном положительная в титре 1: 10, РНИФ в титре 1:80,"

ИЗФ 1 04, ИЗФт 1 14 ИСЗН40 9 09

ИСЗН " о= 6,7. На основании клинических и лабораторных данных устанавливается диагноз: токсоплазмоз, латентное течение. Функциональная активность нейтрофилов на достаточно высоком уровне по всем изученным показателям, в терапии не нуждается.,(Пример 5. Больную Б., 29 лет, обследуют по поводу хориоретинита.

PCK положительная в титре 1:5, РНИФ

1:80, внутрикожная проба отрицательная. Фагоцитарная активность нейтрофилов: ИЗФс и ИЗФт меньше 1 (0,88 и 0,59 соответственно), ИСЗН4 = 7, 14, ИСЗН = 5,68, На основании клини-

460 ческих и лабораторных данных устанавливается диагноз: хронический токсоплазмозный хориоретинит. Назначено специфическое лечение.

Формула и зоб ре т ения

Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов, включающий инкубацию биологического объекта в пробе крови с последующей обработкой полученных результатов, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью .. повышения точности,в качестве биологического объекта используют токсоплазму токсоплазменного антигена для реакции иммунофлуоресценции, а при обработке результата дополнительно вычисляют индексы разрушения и специфической защищенности нейтрофилов, выражающиеся отношением числа нейтрофилов к сумме фагоцитировавших токсоплазм и разрушенных нейтрофилов.

Таблица 1

ФИ через, мин (1 Г

30 120 40 160

65,27110,28 83,64+5,31

Стафилококк

Токсоплазмы

Стафилококк

Токсоплазмы

66, 72+3,92 70, 72+4,29

Т+

Группы Тест-микроб обсле-. дованных

24,00+4,12 13,30+3,01

7,45+1, 23 8,46+1, 21

1б15614

Продолжение табл.1

ИЗФ

ФЧ через, мин ест-микро

Г Г

120 40 160

Стафилококк 5,61 0,35 б, 22+0,54 Токсоплазмы

0,92 0,08

1,9 0,44 1, 17 0,28

Т2,1 0,12

1, 15 0,09

1,60+О, 12 0,96+0, 14

Стафилококк 5,46 0, 15 5, 06+0,28

Токсоплазмы 1,49 0, 15

Группы Тест-.микроб HP через, мин обслеi дованных

40 160

Стафилококк

Токсоплазмы

26, 2+Оь 28 58, 8+6, 9 2,05 20, 09 1, 47 "О, 04

5,75+2,43 12,72+2,35 7,78+1,53 5,85+1,06

ТСтафилококк

Токсоппаa

Таблица 2

ИЭФ

ИСЗН

40 мин 160 мин. 0 68-1,65

0,30-2,03

Стафилококк

Ток сопл а змы

1,51-3,57 0,96-2,04

ТСтафилококк

Токсоплазмы

0,86-1,30

0 33-1,73

4,35-16, 67 2 «32" 14„28

Т+

Составитель С.Пылова

Техред Л.Олийнык

Редактор И. Шулла

Корректор Т. Малец

Заказ 3983 Тираж 518 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101

Группы обследованны

Группы Тест-микроб обследованных

Продолжение табл.1

ИСЗН через, мин

40 160