Скрининг системных препаратов против фитонематод

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству , а именно защите растений от вредителей и болезней, и может быть испол -зовано при отборе активнодействующих соединений системных немотицидов для борьбы с гельминтами растений. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования. Испытуемый препарат вводят непосредственно в питательную среду, затем засевают гриб или Alternarla tenuls или. Fusarium oxysporum и на 4тй день вносят 100 поло-, возрелых нематод.Количесгво погибших нематод подсчитывают в течение 6 дней.На примере препарата ДДВФ показано, что по предлагаемому методу оценки от 1 мг препарата из 100 испытуемых нематод гибнет на сутки 100% от 0,5 мг 99% и от 0,1 мг 91 %, а по известному методу оценки - от 1; 0,5 и 0,1 мг препарата 25, 14 и 10% соответственно . 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР с . ь

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4443170/13 (22) 03.05.88 (46) 15.01.91. Бюл. N. 2 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И,Скрябина (72) И.В.Александрова, А.А.Шестеперов и

А.Д. Белоглазов (53) 632.651 (088.8) (56) Стояков А.В. Токсичность фосфорорганических соединений для фитонематод и методы первичной оценки их нематицидности.Дисс.на соиск.учен. степени канд.биол. наук. Среднеазиатский НИИ фитопатологии, 1976, 49.

Патент С ША М 4444891, кл. G 01 N 33/48, 1986. (54) СКРИНИНГ СИСТЕМНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ФИТОНЕМАТОД (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно защите растений от вреИзобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к защите растений от вредителей и болезней, и может быть использовано при отборе активнодействующих соединений системных нематицидов для борьбы с гельминтами растений.

Целью изобретения является повышеwe чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования.

Способ заключается в следующем.

Испытуемый препарат в 0,1-1 -ной концентрации вводя в питательную среду, затем высевают гриб Alternarla tenuls или

Fusarlum oxysporum на 4-й день вносят 100 половозрелых нематод. действие препарата определяют визуально по окраске гриба и путем подсчета нематод в течение 6 дней.

„„ Ц„„1620072 А1 (sris А 01 N 63/00, G01 N 33/48 дителей и болезней, и может быть испол -.зовано при отборе активнодействующих ñîåдинений системных немотицидов для борьбы с гельминтами растений, Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования, Испытуемый препарат вводят непосредственно в питательную среду, затем засевают гриб или Atternaria tenuls n Fusarium, oxysporum и на 4-.й день вносят 100 поло-, возрелых нематод. Количес гво погибших не- матод подсчитывают в течение 6 дней.На примере препарата ДДВФ показано, что по предлагаемому методу оценки от 1 мг препарата из 100 испытуемых нематод гибнет ) на 6-е сутки 100 от 0,5 мг 99 и от 0,1 мг

91, а по известному методу оценки — oT 1;

0,5 и 0,1 мг препарата 25, 14 и 10 соответственно. 2 табл.

Выбор срока внесения нематод (4-й день) обоснован тем, что этот срок является оптимальным для роста гриба Atternaria

tenuis и для проведения оценки действия испытуемых препаратов; Более ранний срок (т.е. до 4-го дня) нежелателен, так как мицелий гриба еще недостаточно развит, а в более поздние сроки происходит старение гриба, что приводит к изменению его окраски.

Пример 1. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофуран,в

0,1ф,-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в зти пробирки проводят посев гриба Atternarta .tenuts. предварительно получив споры из расчета

2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нема1620072 тод в каждую пробирку и выдерживают при

25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 2. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофуран в

0,5 -ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuls, предварительно получив споры иэ расчета

2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированйой воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 3. 8 пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофурана в

17ь-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuis, предварительно получив споры иэ расчета

2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС; Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

П р и и е р 4; В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат в 0,1 -ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в зти пробирки проводят посев гриба Alternarla tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба а 1 мл дистиллированной воды.

Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25 С.

Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 4 по гибели нематод(в процентах) в течение 6 сут, Пример 5. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат видат в 0,5 -ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, . затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuls, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.

Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25 С, Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 6. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вно5

55 сят испытуемый препарат видат в 1 -ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.

Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25 С, Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

В табл, 1 представлены сравнительные данные по испытанию препаратов в концентрации 0,1-1 .

° Пример 7. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в

0,1 (-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба A, tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000 — 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при

25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 8. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в

0,5%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25 С, Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 9. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в

1 (,-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000 — 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А, bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод(в процентах) в течение 6 сут.

Пример 10. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А, tenuis, 1620072

25

55 предварительно получив споры из расчета

2000 — 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по

100 нематод А. bessey, в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые,24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 11. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,5 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А. tenuis, предварительно получив споры из расчета

2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по

100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 12. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба А. tenuis, предварительно получив споры из расчета

2000 — 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по

100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность . препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 13, В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба А. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000 — 3000 тыс, спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.

Через четыре дня вносят по 100 нематод

А. bessey в каждую пробирку. затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по

0,1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 14. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба А. tenuls, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.

Через четыре дня вносят по 100 нематод

А. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по

0,5 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах} в течение 6 сут.

Пример 15. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба А. tenufs, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.

Через четыре дня вносят по 100 нематод

А, bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по

1 мг в каждую пробирку и выдерживают при

25 С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 16. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в

0,1 -ной концентрации по 0,4 мл s каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив cnopbl иэ расчета 20003000 тыс. спор гриба в I мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 17. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в

0,5 -ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры иэ расчета 20003000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 18, В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабенд зол в

1 -ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры иэ расчета 20003000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через четыре дня вносят по 100 нематод А. besqey в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 19. В пробир.ки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по

0,1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба

F. охузрогигп, предварительно получив споры иэ расчета 2000 3000 тыс. спор гриба в

1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую

1620072 пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют виэуальНо и через каждые 24 ч по гибели нематод (e процентах} в течение 6 сут.

Пример 20. В пробирки со средой картофельного агара в количестве

8 мл вносят испытуемый препарат

ДДВФ по 0,5 мгв каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят Ilo 100 нематод А.

bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 21. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по

1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в зти пробирки проводят посев гриба

F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000 — 3000 тыс, спор гриба в

1 мл дистиллированной воды, Через 4 дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25ОС. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

Пример 22. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.Через 4 дня вносят по 100 нематод

А. Ьеззеу в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по

0,1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 23. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба F. oxysporum. предварительноо получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор. гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через 4 дня вносят по 100 нематод

А. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по

0,5 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25 С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

5 Пример 24. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры иэ расчета 2000 — 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной

10 воды. Через четыре дня вносят па 100 нематод А. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) па 1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25оС

15 В табл. 2 приведены результаты сравнительных исследований известного и предлагаемого способов отбора нематицидов.

Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах).в тече20 ние 6 сут. Во всех примерах контролем служила питательная среда для культивирования гриба без внесения в нее каких-либо химических веществ.

Таким образам, предлагаемый способ

25 позволяет быстро и эффективно производить отбор нематицидных препаратов системного действия.

Анализируя данные табл. 2, можно также сделать вывод, чтс вид гриба (А. тепшв

30 или F. okysporum) не влияет на достижение поставленной цели, так как оба вида гриба являются хорошим субстратом для жизнедеятельности рисовой листовой нематоды

А, bessey.

Формула изобретения

Скрининг системных препаратов против фитанематод, включающий посев фито40 патогенного микроскопического гриба на твердую питательную среду, культивирование гриба до образования мицелия, внесение патогенных фитонематод и исследуемого нематицида, инкубирование с

45 последующей оценкой результатов по гибеw фитонематод, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, сокращения срока и снижения трудоемкости, исследуемый нематицид вводят

50 непосредственно в среду перед посевом микроскопического гриба.

1620072

Таблица 1

Табл и цэ 2

Количест80

Препарат и концентрация

Экспози ия с

97

9g

17

34

37

0,3 мл

0,4 мл

0,4

1мг

0,5 мг

0,1 мг

23

25

8

О

0,5 мг

0,1мг

0,4 мл

0 г иба Fuse бших немат

rlum ox s o о А.besse

Колич вкль е ество поги

0,3 мл

0,4 мл

0,4 мл

t00

32

47

37

16

13

32

36

24

1мг

0,5 мг

Тиабердазол

0,5

0,1

ДДВФ перед посевом гриба

ДДВФ (прототип) после внесения нематод

Контроль (вода)

Тиабендазол

0,5

0,1

ДДВФ перед посевом г иба

Количество погибших нематод А.bessey в культуре гриба Alternarla

te fouls

1620072

Продолжение табл,2

Составитель И.Залунин

Редактор Т.Парфенова Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова

Заказ 4201 . Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101