Способ получения клеток костного мозга для цитологического исследования

 

СО1ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s»s G 01 N 1/28, А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВГН1йэ1Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

Г1РИ ГКНТ СССР

В Е(063 йй1Е! тИ. Ы

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

; 4 э!.:д

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4254492/14 (22) 01.06.87 (46) 07.03.91. Бюл. М 9 (71) Научно-исследовательский институт фармакологии Томского научного центра

АМН СССР (72) Е.Д.Гольдберг, B.Ï.Øàxoâ и А.M.Äûãàé (53) 616-0.89.9(088,8) (56) Grocker Р., Gordon S. J. experimental

medicine, 1985, ч. 162. р.993-1014, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО

ИССЛЕДОВАНИЯ

Изобретение относится к ледици е, а именно к гематологии.

Целью изобретения яв1яегся увеличение выхода клеток костного мозга.

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат костного мозга вместе с костью и н куб и руют п ри 37" C в 0,1-0.2 %-ном растворе коллагеназы в течение 60 -90 мин. Затем биоптат переносят в 0,2-0,3% — ный раствор трипсина и инкубирую! в нем при

37 С в течение 30 — 45 мин. Далее биоптат фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альдегида. что фиксирует межклеточные кон такты, делает их более устойчивыми, не позволяет распадаться островкам на отдельные клетки. После такой подготовки препарата его механически разб«вают на отдельные ге лопоэтические островки. окрашивают гематоксилин-эозином и микроскопируют.

Пример 1. Участок бедренной кости помещают в 1 мл 0.05%-ного раствора кол„„Я „„1633318 А1 (57) Изобретение относится к области меди-. цины, а именно к гематологии. Целью является увеличение выхода клеток костного мозга. Цель достигается тем, что костный мозг обрабатывается совместно с костью.

При этом вначале plo инкубируют с 0,1—

0,2%-ным раствором коллагеназы, а затем с

0,2-0,3%-ным раствором трипсина. После этого обьект фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альде1ида. что позволяет сохранить структуру гемопоэтических островков, Дополнительно удается получить качеoTeeííûe препарат,l с полным выходом кле1ок KooTIIol o мозга лагеназы и инкубируют в нем при 37"С в течение 30 мин Затем переносят в 0,1%ный расгвор трипс«на ". инкубируют в нем

IIp«37"Ñ в течение 15 мин. После этого кость с находящи;лся в ней костным мозгом фиксируют в 0,125%-ном растворе глютарового альдегида в течение 10 мин, затем из кости водой вымывают костный мозг и мсханически разбивают на фра, менты Островки переносят на стекло и окрашивают в течение 30 мин азур-11-эозином.

При микроскопии препарата четко видны гемопоэтические островки клетки находятся во взаимосвязи, Пример 2. Кость с костным мозгом помещают в 0,15% -ный раствор коллагеназы и инкубируют в нем при 37 С в течение

75 мин. Затем препарат перенося в 0,25%ный раствор трипсина ««нкубируют в нем в течение 40 мин при 37 С После э1ого кос!ь с мозгом фиксируют в О, !25%-но л растворе

rnIoTapoeoro альдегида в TI . ение 10 мин. Из кости вымывают костный мозг, ме аничесли

1633318 ния в норме и при различных патологических состояниях системы крови. его разбивают на фрагменты, готовят мазки и окрашивают гематоксилин-эозином. На препарате четко видны островки, количество которых равно 5,8++ 1,1. Известным способом можно было получить в этом опыте только 2,7 + 1,6 островков, Составитель Л. Стебаева

Редактор О. Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор В, Гирннк

Заказ 613 Тираж 396 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ. СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Предложенный способ позволяет не только увеличить выход количества гемопоэтических островков, но и значительно улучшить качество препарата за счет получения сохранных клеток костного мозга. Полный выход клеток из костного мозга позволяет получить картину истинного содержания клеток кроветворной системы в костном мозге, что важно при изучении кроветвореФормула изобретения

5 Способ получения клеток костного мозга для цитологического исследования путем их вымывания иэ костной ткани, инкубацией в среде, содержащей раствор коллагенаэы, с последующей механической разбивкой и

10 фиксацией, отличающийся тем,что,с целью увеличения выхода клеток, костный мозг после инкубации дополнительно обрабатывают 0,2-0,3 -ным раствором трипсина в течение 30 — 45 мин, при этом для

15 инкубации используют 0,1-0,2 (,-ные растворы коллагенаэы.