Способ определения фосфамида в биологических средах

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения уровня содержания пестицида-фосфамида при интоксикации фосфорорганическими соединениями. Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способа. Для этого проводят осаждение белков, мешающих определению, добавлением 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. После восстановления рН раствора до нейтрального значения экстрагируют исследуемое вещество органическим растворителем , высушивают экстракт. Растворяют сухой остаток в 1 мл ацетона или гексана и осуществляют газохроматографический анализ с помощью электронно-захватного детектора при температуре колонки 190°С и скорости газа-носителя 60- 70 мл/мин. Нижний предел обнаружения фосфамида в эритроцитах и сыворотке крови 0,06 мкг/мл, в тканях внутренних органов 0,017 мкг/г. Относительная ошибка определения фосфамида в сыворотке крови ± 8,5%, в эритроцитах ± 13,1%, в тканях внутренних органов ±7,2%. Ј

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si)s G 01 N ЗЗ/483

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2 1) 4484070/14 (22) 20,09.88 (46) 30.01,91, Бюл. М 4 (71) Киевский научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний (72) Л.Г. Александрова (53) 612.129.1(088.8) (56) Лещев В.В. и др. Определение фосфамида в молоке и тканях животных газожидкостной хроматографией. В кн.: Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1977, с. 152-153, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФАМИДА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения уровня содержания пестицида-фосфамида при интоксикации фосфорорганическими соединениями, Цель изобретения — повышение чувствительности и специфичности

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в клинических лабораториях для определения уровня содержания пестицида при интоксикации фосфорорганическими соединениями.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа.

Способ определения фосфамида в биологических средах осуществляется следующим образом.

Отбирают для анализа 0,5 мл сыворотки и 0,5 мл эритроцитов после разделения пробы крови на фракции сыворотки и эритроцитов. Приливают к пробе по каплям 20 -ный раствор трихлоруксусной кислоты до полной коагуляции белков и других козкстрак.,. ЙЛ 1624319 А1 способа. Для этого проводят осаждение белков, мешающих определению, добавлением 20 -ного раствора трихлоруксусной кислоты. После восстановления рН раствора до нейтрального значения экстрагируют исследуемое вещество органическим растворителем, высушивают экстракт. Растворяют сухой остаток в 1 мл ацетона или гексана и осуществляют газохроматографический анализ с помощью электронно-захватного детектора при температуре колонки 190 С и скорости газа-носителя 6070 мл/мин. Нижний предел обнаружения фосфамида в эритроцитах и сыворотке крови 0,06 мкг/мл, в тканях внутренних органов

0,017 мкг/г. Относительная ошибка определения фосфамида в сыворотке крови

+ +8,5, в эритроцитах + 13,1%, в тканях внутренних органов ":7,2 . тивных веществ. Затем добавляют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают и прибавляют по каплям 10 -ный раствор едкого натра до получения нейтральной реакции раствора (рН 7) рН раствора можно контролировать по универсальной лакмусовой бумаге. Экстрагируют фосфамид трижды свежими порциями хлороформа по 3 — 5 мл, встряхивая по 30 мин на холоду, при 0 — 5 С (можно использовать баню со льдом), Экстракты обьединяюг, фильтруют через бумажный фильтр, на который предварительно насыпают 1-2 r сернокислого безводного натрия. Отгоняют органический растворитель до обьема раствора. примерно 0,1-0,2 мл на ротационном или другом аналогичном испарителе при темпе1624319

Формула изобретения

Способ определения фосфамида в биологических средах путем экстракции его органическим растворителем, удаления белков, высушивания экстракта растворения и последующего гаэохроматографического анализа, о тл и ч а ю щи йс я тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности способа. осаждение белков проводят до экстракции, экстракцию проводят при нейтральном рН, а гаэохроматографический анализ осуществляют с помощью электронно-захватного детектора при температуре колонки 190 С и скорости газа-носителя 60 — 70 мл/мин.

Составитель В. Митюшин

Редактор О, Спесивых Техред М.Моргентал Корректор И, Эрдейи

Заказ 184 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 ратуре бани 40 — 50 С. При нагревании вещества при высоких температурах может произойти его иэомеризация. Оставшийся в отгонной колбе растворитель испаряют в открытой колбе в вытяжном шкафу. К сухому остатку приливают 1 мл ацетона или гексана и анализируют раствор на содержание фосфамида на газовом хроматографе с электронно-захватным детектором (или детектором постоянной скорости рекомбинации-ДПР). Условия хроматографирования; колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, насадка колонки — хроматон N-AW-DMCS (эернение

0.16-0,20 мм), пропитанный 5 ХЕ-60, температура колонки 190 С, испарителя

210-220 С, детектора 190 С, Скорость по- тока газа-носителя азота особой чистоты

60 мл/мин. Продувка детектора 6 л/ч. Шкала электрометра 20 10 — 50 10 А. Время выхода (время удерживания) фосфамида

7,5 мин. Минимально детектируемое количество фосфамида 0,2 нг в 6 мкл раствора.

Нижний предел обнаружения фосфамида в эритроцитах и сыворотке крови 0,06 мкг/мл или 2,62 10 мкмоль/мл, Относительная

-4 ошибка определения фосфамида в пробах эоитооцитов крови по способу-прототипу

+96,5, а по предлагаемому способу эта ошибка +13,1 в эритроцитах и+8,5 в сыворотке крови, Фосфамид определяется в присутствии его метаболитов.

Пример 1. Определение фосфамида в тканях внутренних органов.

Отбирают для анализа 5 г гомогенизированной ткани внутренних органов (печень, почки, сердце, легкие, селезенка, стенка желудка), приливают 5 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают содержимое. Добавляют 20 -ный раствор трихлоруксусной кислоты (примерно 1 — 2 мл) для осаждения белков, После перемешивания приливают 10 мл воды, снова перемешивают и затем добавляют 10 -ный раствор едкого натра (примерно 0.5-1 мл) до получения рН раствора 7, Экстрагируют фосфамид трижды по 15 мл хлороформа, встряхивая в течение 30 мин при охлаждении. Порции экстракта объединяют, фильтруют через бумажный фильтр с насыпанным на него безводным сернокислым натрием и далее поступают по примеру 1: отгоняют растворитель до объема раствора примерно

0,2 мл, упаривают остаток в вытяжном шкафу. К сухому остатку приливают ацетон или гексан и аликвотную часть раствора (16 мкл) вводят в хроматограф. Условия анализа; колонка длиной 1 м, насадка колонки хроматон N-AW-QMCS, пропитанный 5

ХЕ-60. Температура колонки 190 С, детектора 190 С, испарителя 210 — 220 С. Скорость газа-носителя 70 мл/мин. Шкала электрометра 20 — 50 10 А. Время удерживания фосфамида 6,4 мин, Нижний предел обнаружения фосфамида в тканях внутренних органов 0,017 мкг/г или

7.42 10 мкмоль/г.

Относительная ошибка определения фосфамида в тканях - 2 .