Способ определения иммунокомпетентных клеток

 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в качестве скрининг-теста в клинической иммунологии и в практике массовых иммунологических обследований. Целью изобретения является повышение информативности, упрощение и сокращение времени исследования . Для этого в 0,05 мл крови проводят гемолиз эритроцитов дистиллированной водой , к лейкоцитам добавляют в двойном объеме (по 0,1 мл) индикаторы для двух типов мембранных рецепторов - 0,03%-ную суспензию эритроцитов барана и 0,1 %-ную суспензию комплекса комплемент - зимозан. Образовавшиеся розетки фиксируют 1,5%-ным глютальдегидом, готовят один препарат и окрашивают 5 мин смесью 1 %- ных растворов в соотношении 1:2 Аэура II и эозина. В препарате определяют Т-, В-, Д-, 0-лимфоциты, Е-СЗ-нейтрофилы и нитрофилы, фагоцитирующие комплекс комплемент - зимозан. w Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК. Ж 1642397 А1 (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ с„-... (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ,ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в качестве скрининг — теста в клинической имму(21) 4609521/14 (22) 24.11.88 (46) 15.04.91. Бюл. ¹ 14 (71) Научно-исследовательский институт гигиены труда и профессиональных заболеваний AMH СССР (72) Л,А. Дуева (53) 615.375 (088.8) (56) Гришина Т,И., Мюллер С. Одновременное выявление Т вЂ”, В- и Д вЂ” розеткообразующих лимфоцитов и нулевых клеток у человека. — Бюллетень экспер. биол. и мед., 1978, ¹ 4, с. 503, Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в качестве скрининг — теста в клинической иммунологии и в практике массовых иммунологических обследований населения и промышленных рабочих, Цель изобретения — повышение информативности, упрощение и сокращение времени определения розеткообразующих и фагоцитирующих лейкоцитов периферической крови.

Пример. Кровь забирают из пальца в количестве 0,05 мл в пробирку с сухим гепарином (10 ЕД) и проводят гемолиз эритроцитов путем добавления 2 мл охлажденной до

+4 С дистиллированной воды. Пробирку встряхивают, добавляют 2 мл двойного (1,8%) физиологического раствора и центринологии и в практике массовых иммунологических обследований. Целью изобретения является повышение информативности, упрощение и сокращение времени исследования. Для этого в 0,05 мл крови проводят гемолиз эритроцитов дистиллированной водой, к лейкоцитам добавляют в двойном объеме (по 0,1 мл) индикаторы для двух типов мембранных рецепторов — 0,03 — ную суспензию эритроцитов барана и 0,1%-ную суспензию комплекса комплемент — зимозан, Образовавшиеся розетки фиксируют

1,5% — н ым гл ютал ьдегидом, готовят один препарат и окрашивают 5 мин смесью 1%ных растворов в соотношении 1:2 Азура Н и зоэина, В препарате определяют Т вЂ”,  —, Д-, Π— лимфоциты, Š— СЗ вЂ” нейтрофилы и нитрофилы, фагоцитирующие комплекс комплемент — зимозан, фугируют 5 мин при 200 g. Надосадочную жидкость удаляют, добавляют 0,1 мл питательной среды 199 и для устранения шока клетки инкубируют 10 мин при 37 С. Затем к клеткам добавляют в двойном объеме, т. е, по 0,1 мл 0,3% — ную суспензию эритроцитов барана и 0,1% — ную суспензию комплекса зимозан — комплемент. Без предварительной инкубации (при 37 С) проводят мягкое осаждение клеток центрифугированием в течение 1 мин при 200 g и инкубируют 30 мин при 4 С. Для мягкой фиксации образовавшихся розеток добавляют 0,1 мл 1,5% ного водного раствора глутарового альдегида, выдерживают 5 мин, сливают надосадочную жидкость и добавляют 0,1 мл физиологИческого раствора. Готовят мазок, который высушивают на воздухе и фиксируют 10 мин в

1642397

Формула изобретения

Составитель Б.Мануйлов

Техред М.Моргентал Корректор И.Муска

Редактор А.Огар

Заказ 1145 Тираж 415 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101 абсолютном этиловом спирте. Для окраски препарата смешивают extempore 1 ч. 1 — ного водного раствора Азура П и 2 ч. 1 -ного водного раствора эозина и окрашивают препарат 5 мин. Препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерси-: онной системой. При этом просчитывают по

100-200 лимфоцитов и нейтрофилов, принимая за розеткообразующие клетки присоединившие три и более частиц соответствующего индикатора. В препарате определяют следующие лейкоциты; с рецепторами в эритроцитам барана, т. е, Т-лимфоциты и Е-розеткообразующие нейтрофилы (Š— POH); с рецепторами к комплементу, адсорбированному на эимоэане, т. е.  — лимфоциты и СЗ-розеткообразующие нейтрофилы (СЗРОН); с рецепторами к обоим индикаторам, т. е. D (двойные)-лимфоциты и двойные розеткообразующие нейтрофилы (Е-СЗ вЂ” РОН); не имеющие рецепторов к соответствующим индикаторам, т. е. нулевые клетки (Π— лимфоциты и Π— РОН); фагоцитирующие клетки среди нейтрофилов, т. е. опсонизирующие комплекс зимозан — комплемент.

Положительный эффект подтверждается совпадением результатов определения

Т- и  — лимфоцитов периферической крови по. предлагаемому способу и известному (в микроварианте раздельного определения

Т вЂ” и В-лимфоцитов), а также возможностью определения по предлагаемому способу Ои О-лимфоцитов в препарате. Показана зависимость направленности и глубины изменения количества роэеткообразующих лимфоцитов от статуса здоровья обследованных лиц: снижение Т вЂ” и повышение  — и

Д-клеток при аллергических реакциях, осо5 бенно при обострении процесса, и выраженное снижение всех розеткообраэующих субпопуляций при вторичном иммунодефиците. Нулевые лимфоциты перераспределяются в зависимости от изменения

10 количества розеткообразующих субпопуляций.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно повысить информативность, упростить приемы и сократить

15 время исследования.

Способ определения иммунокомпетен20 тных клеток путем добавления к лейкоцитарной взвеси эритроцитов барана с последующей фиксацией глютаровым альдегидом, окраской Азуром И и эозином и определением розеткообразующих Т- и В25 лимфоцитов, отл ича ю щий с я тем, что, с целью повышения информативности, упрощения и сокращения времени, в качестве маркера В-лимфоцитов используют 0,17— ную суспензию комплекса комплемент-зи30 мозан, при этом добавляют 0,03 -ную суспензию эритроцитов барана, фиксируют

1,5 -ным глютаровым альдегидом, окрашивают 1 — ной смесью Азура il и зозина в соотношении 1:2 и дополнительно опреде35 ляют Д вЂ”, Π— лимфоциты, Š— СЗ-нейтрофилы и нейтрофилы, фагоцитирующие комплекс комплемент — зимозан,