Среда для определения бактерицидности дезинфицирующих средств

 

Изобретение относится к ветери-( нарии и касается отбора дезинфицирующих средств. Цель - повышение точности выделения атипичных микобактерий .. Среда для определения бактерицидности дезинфицирующих средств выделением микобактерий содержит1 агар-агар, хлористый натрий, пептон, картофельный отвар, глицерин, сыворотку крови лошадей и дистиллированную воду, взятые в определенных количественных соотношениях. 3 табл.

СОЮЗ COBETCHHX

СОЦИМИатиЧаИИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (11) Ъ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ILBTOPCNGMY ТВИД 1ВВСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4418138/14 ,(22) 26»04 ° 88 (46) 23 ° 04 91 ° Бюл, N - 15 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии (72) .H»A»ÄòòäHHöêèé и T ° Г»Путина (53) 614 ° 48 (088 ° 8) (56) Справочник по микробиологичес» ким и вирусологическим методам иссле дования /Под ред,:М,О Биргера -.М,, 1982,.с 79-85» (54) СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИ»

ЦИДНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУ!0ЩИХ СРЕДСТВ Из о 6р е те ние о тно си тся к сельскому хозяйству и медицине и может быть ислользовано при определении бактерицидности химических препаратов в отношении микобактерий, Целью изобретения является повы шение точности выцеления атипичных микобактерий.

Пример 1 ° В чашки Петри разливают по 15 мл питательной среды, .имеющей следующий состав при мини мальном значении соотношения компо нентов, г/л: агар-агар 16,0; хлорид натрия 0,6; пелтон 10,0; картофель ный отвар 4,5; глицерин 1,0; сыво ротка крови лошадей 150,0; дистилли рованная вода - до 1,0 л рН 6, 7 °

Для приготовления среды 300 г очи щенных клубней картофеля кипятят в

1 л дистиллированной воды в течение

10 мин Затем отвар фильтруют через тонкий слой ваты или 2 3 слоя марли» (51)5 С 12 Я 1/18// (С 12 О 1/18, С 12 R 1:33) 2 (5 7) Из обретение о тносится к ветери-, нарии и касается отбора деэинфици рующих средств Цель повышение точности выделения атипичных мико бактерий ° Среда для определения бактерицидности дезинфицирующих средств выделением микобактерий содержит агар-агар, хлористый натрий, пелтон, картофельный отвар, глицерин, сыворотку крови лошадей и дистиллирован ную воду, взятые в определенных коли чественных соотношениях, 3 табл»

К полученному отвару добавляют 1% хи.мически чистого глицерина и к этому объему прибавляют 16,0 г агар-агара, 0,6 г натрия хлорида и 10,0 г пептона, Устанавливают рН 6;7 ° Стерилизуют автоклавированием !5 мин при 1 атм

Охлаждают до 45 С и асептически до» бавляют 150 мл сыворотки крови лошадей, избегая образования пузырьков воздуха, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри» После этого среду подсушивают при 37 С 40-60 мин до полного удаления следов конденса та на ее поверхности, засевают сус-пензией.. 5 7-суточной взвесью тест .культур микобактерий: ш.В-5 или

m. fortuitum, или 12-суточной m.avium, в количестве О, мл, приготовленной по оптическому стандарту мутности

ОСО ГНИИСК на 10 ед», что соответст7 вует содержанию 6, 1х10 бактериальных клеток в 1 мл ° Засев тест-культу1643612 ры производят сплошным равномерным газоном с помощью стеклянного шпате". ля до полного впитывания взвеси в толщу пластины среды в чашке Петри

Из обеззоленных стандартных фипьт ров с помощью сверл изготавливают диски диаметром 5 10 мм, Испытуемый препарат натриевая соль дихлоризо циануровой кислоты (Иа0ХИЦК) — разводят на стерильной дистиллированной воде в лунках серологического макро планшета с помощью микродозатора„

В каждую лунку вносят стерильный диск (на 3-5 мин), извлекают и накладыва ют его на засеянную тест-культурой микобактерий среду в чашке Петри,Дис ки располагают по 3-6 шт ° в одной чашке на расстоянии 25 мм друг от друга, Посевы инкубируют 48-72 ч при

37 С в положении крьппками вверх, Во круг дисков с разведениями препарата, обладающими бактерицидным или бакте ри.остатическим эффектом, образуются зоны подавления. (задержки) роста тест-культуры, Результаты сравнения базовых (Левенштейна-Йенсена Петраньяни, Гель берга), и предлагаемой сред при опре делении эффективности препарата

НаДХИЦК представлены в табл,:1, Пример 2» В чашки Петри pas ливают по 15 мп питательной среды, имеющей спедующий состав при макси

35 мальном количестве компонентов, г/л: агар-ar ар 30, 0; хлорид натрия 5, 5; пелтон 20,0; картофельный отвар 10,0; глицерин 4,0; сыворотка крови лоша дей 300,0; дистиллированная sopa . 40 до 1.л, рН 7;2 ° Приготовление среды, препарата НаДХИЦК и тест культур ми кобактерий проводят аналогично опи санному в примере:1 ° Результаты срав. нения использования базовых (Левев " 45 штейна-йенсена, Петраньяни, Гельбер .

ra) и предлагаемой сред при опреде ленни эффективности препарата

ЫаДХИЦК представлены в табл 2 °

II р и м е р :3 ° В чашки Петри раз

50 ливают по 15 мп питательной среды, имеющей следующий состав при оптималь ном содержании компонентов, г/л: агар агар 20 О пептон 15,0; хлорид ф Э

55 натрия 5,0; картофельньй отвар 5,0; глицерин 3,0; сыворотка крови ло шадей 200, О; дистиллированная вода до 1 ..л, рН 7,0» Приготовление питательной среды, препарата КаДХИЦК и тест-культур микобактерий проводят аналогично описанному в примерах 1 и 2»

Результаты сравнения базовых (Иевенштейна-Йенсена, Петраньяни, Гельберга) и предлагаемой сред при определении эффективности препарата

ИаДХИЦК представлены, в табл,: 3»

Из табл 1 3 видно, что точность выделения тест культур и определения степени бактерицидности в среднем в

l,6 раза выше, ускорение роста микобактерий (получение ответа) в 2

3,5 раза быстрее, а выход биомассы в 1,5 раза больше в предлагаемой сре де, чем в известной, На осуществление эксперимента (ра боты) с применеинЕм предлагаемой среды затрачивается на 2-3 ч меньше, чем с применением базовых яичных сред Кроме этого, предлагаемая сре да позволяет удешевить определение бактерицидности химических препаратов в отношении микобактерий в 5 раз, Формула из обретения

Среда для определения бактерицидности дезинфицирующих средств выделением микобактерий, содержащая продукт картофеля, глицерин, хлористый натрий, и дистиллированную воду, о т личающая ся тем, что, сцелью повьппения точности выделения атипичных микобактерий, среда допол нительно . содержит пеп тон, агар-агар и сыворотку крови лошадей, а в ка честве продукта картофеля используют картофельный отвар при следующем соотношении компонентов, г/л воды:

Агар агар 16,0 30,0

Хп ори стьй натрий . О, 6-5,5

Пептон 10,020,0

Картофель ный отвар 4,5-10,0

Глицерин l,0 4,0

Сыворотка крови ло шадей l 50, 0300, 0

Дистиллированная вода

До lл

1643612

Таблица l.

По казатели

Питательная среда азо

Выход биомассы тест-культуры с

1 мп среды, мг

Появление роста тест-культуры (срок ответа), сут

Величина бактерицидного разведения испы туемого препарата (НаДХИЦК) (степень бактерицидности), мг/7.

62,2 63,3

44,2

44,3 44,0

62,0

=34

4,439 4,439 4,439

6,214 6,214 6,214

Таблиц а 2

Показат

l !

Выход биомассы тест культуры с, 1 мл среды, мг

Появление роста тест-культуры (срок ответа), сут

Степень бактерицйдиости, препарата, мг/Е

63,0

63,2 63,3

44,2 44,3 44,0!

3,171 3,171 3,171

6,214

6,214 6,214

П р и м е ч а н и е, I — тестк ФЬтура ш.В-5, II - m.foruitum, II I — m. aviUm.

П р и м е ч а н и.е I — тесткультура ш.В-5, II — ш.fortuitum, III — ш.avium.! 643612

Таблица 3 тельная ереда

Показ атели

63,3 63,0

44,5

63,2

44,0

44,2

4,439 4,439 4,439

6,214 6,214 6,214

П р и м е ч а н и:е, I — тест-культура m.Â-5, II — m,fortuitum, III — m.avium.

Редактор Н,Рогулич

° ФЭ аВчВФ юане ФюФ ,.Закаэ 1221

ВНИИПИ Государстве нного

113035, Проиэводственно-иэдательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Выход биомассы тест-культуры с

1мл среды,,мг

Появление роста те с1-культуры (срок ответа), сут

Степень бактернцидности препарата, мг /%

Составитель.С,Малютина

Те екред М.Моргентал Корректор О.Кравцова

Тираж 369 Подписное

I ком тета по иэобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5