Питательная среда для культивирования базидиомицетов - продуцентов пероксидазы

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности и медицине. С целью повышения активности пероксидазы, известная питательная схема для культивирования продуцентов пероксидазы - штаммов Corrio- lus hirrutus (Рг)рие1-ЛЕ-072, JIE-0679, ЛЕ-074, а также штаммов Cerrena maxima Murr ЛЕ-0681 и ЛЕ-0275 дополнительно содержит поликапромиднуго крошку при следующем соотношении компонентов , г/л: пептон 3-4, глюкоза 9-12, однозамещенныи фосфат калия 0,9-1,2, семиводный сульфат магния 0,048-0,053, поликапроамидная крошка 5-20. Преимущество предложенной среды заключается в повышении в 2-4 раза активности пероксидазы культивируемых на ней продуцентов базидиомицетов по сравнению с культивированием на известной среде. 3 табл. i

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П{НТ СССР (21) 4409677/13 (22) 19.01.88 (46) 15. 04.91. Бюл. № 14 . (71) Ленинградский институт текстильной и легкой промышленности им. С.N.Кйрова и Ботанический институт им. В.Л.Комарова (72) В.П.Гаврилова» Н.К,Григорьева, И.И.Шамолина и Н.В.Платонова (53} 577.15 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹- 1325071, кл . С 12 N 1/14, 1985.

Авторское свидетельство СССР № 742434, кл. С 12 N 11/10, 1978. (54) ПИТАТЕЛЪНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАЗИДИОМИЦЕТО — ПРОДУЦЕНТОВ

ПЕРОКСИДАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в

Изобретение относится к биотехйологии и может быть использовано в микробиологической промышпенности и медицине.

Цель изобретения — повьппение активности пероксидазы.

Изобретение заключается в том, что известная питательная среда для базидиомицетов — продуцентов пероксидазы содержит дополнительную поликапроаьащную крошку.

В качестве продуцентов используют коллекционные штаммы базидиомицетов .из коллекции Ботанического института

АН- СССР) Corriolus hirrutus (Fr) (51}5 С 12 N 1/14, 9/08 // (С 12 N 1/14, С 12 R 1:645) 2 микробиологической промышпенности и медицине. С целью повышения активности пероксидазы, известная питательная схема для культивирования продуцентов пероксидазы — штаммов Corriolus hirrutus (Fr)Quel-ЛЕ-072, JIF.-0679, ЛЕ-074, а также штаммов Cerrena maxima Murr ЛŠ— 0681 и ЛЕ-0275 дополнительно содержит поликапромидную крошку при следующем соотношении компонентов, г/л: пептон 3-4, глюкоза

9 — 12, однозамещенньп) фосфат калия

0,9 — 1, 2, семиводньп сульфат магния

О, 048 — О, 053, поликапроамидная крошка 5-20. Преимущество предложенной среды заключается в повышении в Ф

2-4 раза активности пероксидазы кульФ тивируемых на ней продуцентов базидиомицетов по сравнению с культивированием на известной среде. 3 табл. ( (1ие1 штаммы ЛЕ-072, ЛЕ 0679, ЛЕ-074, а также Cerrena maxima Murr штаммы JIE-0681, ЛЕ-0275.

Пример 1 ° Посевные культуры перечисленных выше штаммов выращивао ют на сусле-агаре при 24-26 С, культивирование продуцентов ведут поверхностным способом в колбах Эрленмейера, содержащих соответ ственно

50 и 100 мп культуральной питательной среды, вкнючающей глюкозу, пелтон» КН РО » ИнЯ04 7Н О» в которую до стерилизации добавляют поликапро- амидную крошку. Культивирование ве. дут при 25 С в течение 8 сут. По дос

1641881 тижении максимальной активности на воронке Бюхнера отделяют мицелий и получают культуральный фильтрат, который анализируют на пероксидазную активность. Активность (А) перожсидаэы определяют по окислению бензидина в присутствии пероксида водорода и вычисляют по формуле

Е (аб Ь) С t

10 где Š— экстинкция (О, 250); а — отношение количества жидкости, взятой для приготовления вытяжки (Ип) к весу навести (г), { — степень дополнительного раз ведения вытяжки;

Ь - степень постоянного разведе20 ния вытяжки в реакционной смеси, С вЂ” толщина слоя в кювете (2 см);

t — время, с.

Сравнительные данные по активности пер оксидазы в культуральном фильтре, полученном на предлагаемой и известной средах, представлены в табл. 1-3.

Как видно из табл. 1-3 наибольшая активность ероксидазы достигается в питательной среде, содержащей

5-20 г/л поликапроамидной крошки.

Повышение содержания в среде для культивирования базидиомицета поликапроамидной крошки в количестве более 20 г/л нецелесообразно, так как не влечет за собой повышения активности пероксидазы. При содержании

° крошки менее 5 г/л активности пероксидазы в культуральном фильтрате, получаемом на известной и предлагаемой средах, отличаются незначительно.

Преимущество предложенной среды заключается в повышении активности культивируемых на ней базидиомицетов — продуцентов пероксидазы в

2-4 раза по сравнению с известной питательной средой. формула изобретения

Питательная среда для культивирования базидиомицетов — пр одуцентов пероксидазы, содержащая в качестве источника углерода глюкозу, в качестве источника азота — пептон, минеральные соли — однозамещенный фосфат калия и сульфат магния и воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения активности пероксидазы, она дополнительно содержит поликапроамидную крошку при следующем соотношении компонентов, г/л воды:

Пептон 3-4

Глюкоза 9-12

Одноэамещенный фосфат калия 0,9-1,2

Сульфат магния семиводный 0,048-0,053

Поликапроамидная крошка 5-20

1641881

Таблица 1

Активность пероксидазы в культуральном фильтрате, полученном на известной и предлагаемой средах Cerrena maxima Иигг ЛЕ-0275

t г/л

Компонентный состав среди, Пример

Активность пероксидазы в культуральном фильтрате

КНеРО4 И8 804 7Н О

Глюкоза Пептон Крошка ед/мг белка

3,0

3,0 1

3,0 i

3,0 5

3,0 10

3,0 15

4,0 15

3,0 20

4,0 25

3,0 1

3,0 1

2,0

2,0 15

20 . 20

2,0 25

2,0 20

10,0

7,0

8,0

10,0

10,0

10,0

12,0

10,0

10,0

8 0

12,0

7,0

7,0

7,0

7,0

9,0

Таблица 2

Активность пероксидазы в культуральном фильтратеСоггхо1из hirrutus (Pr.)

fuel ЛЕ-072, полученном на известной и предлагаемой средах г/л

Компонентный состав среды, Пример

Активность пероксидазы в культуральном фильтрате

Глюкоза Пелтон Крошка

KHgP04 ИЯ$04 7Н О ед/мг белка Е

1 (известный)

3

5

7

9

11

12

13

14

t7

18

19

21

22

23

24

26

27

28

29

31

10,0

7,0

8,0

10,0

9,0

10,0

12,0

10,0

10,0

8,0

12,0

7,0

7,0

7,а

7,0

9,0

3,0

3,0

3,0

3,0

3,0

3,0

4,0

3,0

4,0

3,0

3,0

2,0

2,0

2,0

2,0

3,0

1 .5

5.

1

1,0

0,65

0,70

0,75

0,90

0,90

1,00

1,2

1,25

1,30

4,30

1,35

1,35

1,40

1,50

1,00

1,0

О,65

0,70

0,75

О, 9.0

0,90 т,20

1,20

1,25

t,30

1,30

1,35, t 35

1,40

1,50

1,00

0,05

0,04

0,04

0,04

О, 048

О, 048

0,05

О, 053

О, 055

О, 055 0,055

0,058

0,058

0,060

О, 060 О, 050

0,05

0,04

0,04

0,04

О, 048

0,048

0,05

0,053

0,055

0,055

0,055

О, 058

О, 058

0,060

0,060

0,050

6,37

6,5

8,2

17,0

27,0

31,0

30,5

30,5

22,0

8,2

8,0

6,0

7,5

8,6

8,0

17,0

8,0

8,0

8,5

14,8

20,0

24,5

21,5

21,0

18,0, 10,0

9,8

8,5

9,0

9,5

9,5.

15,0

102

129

267

424

487

479

479

128

126

94

118

126

280

106 2

185,0

250,0

306,2

269,0

262,5

225,0

125,0

122,5

106,2

112,5

118, 7.

118,7

185, О

1641881

Таблица 3

Активность пероксидазы в культуральном йильтрате базидиомицета, полученном на известной и предлагаемой средах

Компонентный состав среды, г/л

Пример

Активность пероксидазыв культуральном фильтрате

Глюкоза Пептон Крошка КН РО Ng S04 7Н 0 ед/мг белка 7.

24,5

306, 2

479

30 5

415

33

290

34

303

Составитель В.Соина

Редактор Т.Лазоренко Техред М,Дидык Корректор М.Демчик,. с..

1 Заказ 1126

Тираж 383

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Corriolus hirrutus (Pr)

10,0 3 0 15 О;90

Cerrella maxima Murr

120 40 15 10

Cerrella maxima Hurr

10,0 3,0 15 0,90

Corriolus hirrutus (Fr)

100 ЗО 15 О 90

< Corriolus hirrutus (уг)

10,0 3,0 15 0,90

Quel ЛЕ-072

0,048

ЛЕ-0275

0 05

ЛЕ-0681

0,048

Quel ЛЕ-.0679

0,048

Опе1 ЛЕ-074

0,048