Способ получения регенерантов картофеля in viтrо
Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в генетической инженерии растений, а также в сельском хозяйстве при микроклональном размножении безвирусных растений картофеля. Целью изобретения является ускорение получения регенерактов при сохранении их генетической стабильности. Способ предусматривает предварительное культивирование на агаризовачной среде, содержащей макроэлементы и ряд фитогормонов с последующим переносом ткани на модифицированную среду Мурасиге-Скуга для получения регенерантов 2 табл. а 8 (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) Р1) A 01 Н 4/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ П(НТ СССР (21) 4656629/13 (22) 30а11 ° 88 (46) 30 04 ° 91, Бюп,,Р 16 (71) Институт общей генетики им, .Н.И,Вавилова АН СССР и Научнопроизводственное объединение по кар тофелеводству Агропрома Нечернозем» ной зоны РСФСР (72) Г.В Рассадина, Л.В. Крашенникова, Л,M,Õðoìoâà и С П Смирнов (53) 578е 085 в23(088а 8) (56) Сидоров В.А„, Глеба Ю,Ю,, Сытник. К,N, Соматическая гибридизация пасленовых Киев: Наукова думка, 1985, Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в генетичесой инженерии растений, а также в сельском хозяйстве при микрокло напьном размножении безвирусных растений картофеля „
Целью изобретения является уско рение получения регенерантов при сохранении их генетической стабиль ности
Способ осуществляется следующим образом.
Стеблевые междоузлия пробирочных растений картофеля вычленяют и помещают на, питательную Среду, содержа щую NH 150 мг/л, 11УК 8 15 мг/л, БАП 10 15 мг/л, агар 0»8000 мг/л, воду до л, и ин.кубируют при 24 С, освещен 1644 О А I 2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕГЕliEPAHTOB КАРТОФЕЛЯ IN VITRO (57) Изобретение относится к биотехнологии и может применяться в генетической инженерии растений, а также в сельском хозяйстве при микрокпональном размножении безвирусных растений картофеля. Целью изобретения является ускорение получения ре» генерантов при сохранении их генетической стабильности, Способ предусмат ривает предварительное культивирова» ние на агаризованной среде, содержащей макроэлементы и ряд фитогормонов с последующим переносом ткани на модифицированную среду Мур асиге-Скуга для получения регенерантов. 2 табл. ности 4000 лк и 16 часовом. фотопериоде в течение 20-30 ч. Затем эксплантаты переносят на модифицированную рав питательную среду Мурасиге-Скуга, ф), содержащую сахарозу 1000-1500 мг/л, маннит 3000-5000 мг/л, ИУК 0,005- р 0,3 мг/л, БАП 2-3 мг/л, агар 0»» ОО 0,8000 мг/л и культивируют при тех е же условиях в течение 6-8 сут Затем эксплантаты переносят на модифицированную среду Мурасиге-Скуга, содер жащую 12000-20000 мг/л сахарозы, 23 мг/л БАП, .3-6 мг/л гибберелло вой кислоты и 0 8000 мг/л агара, и культивируют в течение 20-2? сут при тех же условиях до получения регенер анто в, Пример 1. Стеблевые эксплантаты растений картофеля сорта "Сме1644830 на" вычленяют и помещают на среду, содержащую NH NO 9 40 мг/л, СаС1 100 мг/л, ИУК 8 мг/л, БАЛ 10 мг/л, агар 8000 мг/л. После инкубации на данной среде в течение 20 ч при 24 С, освещенности 4000 лк и 1.6-часовом фотопериоде культивирование продол жают при тех же условиях на модифи Ированной среде Мурасиге Скуга, со» !О держащей 1000 мг/л сахарозы, 3000 мг/л маннита, 0„005 мг/л ИУК и 2 мг/л БАП„После культивирования в течение 6-8 сут растительный материал перено сят на модифицированную питательную 15 среду Мурасиге-Скуга, содержащую сахарозу 12000 мг/л, БАП 2 мг/л, гибберелловую кислоту 3 мг/л„На 20-е сутки образуются регенеранты, которые в дальнейшем укореняют и 20 адаптируют к условиям открытого грунта„ П р.и м е р ы 2, 3 осуществляют аналогично примеру 1, при этом эксплантаты помещают на питатель 25 ные среды, содержащие компоненты в ко нцентрациях, соответствующих верх» ним и средним значениям заявленных интервало в, в исследования включают гибрид 184 2 и гибрид 750 Регенеран 30 ты получают на 22-е сутки после помещения на последнюю модифицирован ную среду, Результаты представлены в табл» 1, 2 Из представленных материалов видно, что способ является очень эффективным: большое число регенерантов получают в течение 4-6 недель при обычном их получении через 13 18 не дель культивирования, Кроме того, 40 при отсутствии стадии недифференцированного роста клеток возможно полу чение генетически стабильного матери ал а, который можно и спол ьз о вать в генетической инженерии растений, 45 Формул а из обретения Способ получения регенерантов картофеля jn v1txo, включакщий по садку стеблевых эксплантатов на питательную среду и культивирование до Таблиц а 1 1 тстиббевой Чи сло регене рантов через 4 недели культи» виро вания (в сред на эк спл ° ) ты на днем кульования Не по» лучено Не по луче но 18 Не по« Смена" 11 184-2 » < 750 луч ено 15 получения регенерантов, о т л ич ающий ся тем, что, с целью ускорения получения регенерантов при сохранении их генетической стабиль» ности, культивирование осуществляют в следующей последовательности: сна чала эксплантаты помещают на 20-30 ч на питательную среду следующего со става, мг /л: %, НО з 40 60 Сас1 100.-150 ИУК 8 15 БАЛ 10 15 Агар 0-8000 Вода дистиплированная До 1ë затем культивируют в течение 6» 8 сут на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей сахарозу в количестве !0001500 мг/л, маннит 3000-5000 мг/л, ИУК 0,005 0,3 мг/л, БАП 2-3 мг/л, после чего переносят на модифициро ванную питательную среду МурасигеСкуга, содержащую сахарозу в количестве 12-20 г/л, БАП 2-3 мг/л и гибберепловую кислоту 3»6 мг/л, на которой осуществляют получение реге нерантов Таблиц а 2 Не обна ружено 50 60 Пр едлаг ае алый Из ве стные Составитель В Демкин Редактор . М,Циткина Техред М.Дидык Корректор Т, Малец Заказ 1 301 Тираж 362 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101
