Способ диагностики гетерозиготных форм @ - и @ -талассемии

 

Изобретение относится к медицине , а именно к гематологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики наследственных формвЈ- и А-талассемиИо Наряду с определением в крови изменений форм эритроцитов уровня HbAj, и НЪР гемоглобина дополнительно определяют содержание и К -зависимрк АТФ-азы и фракционный состав нейтральных липидов мембран эритроцитов. При значении содержания АТФ-азы 0,6 мм/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2+ - 3 , а также при наличии менений в содержании НЬА и HbF и форме эритроцитов диагностируют заболевание . (Л

„SU„„Щ49З59

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А1 а,.ЛдбЖ л

1 ««- .-«,Л«

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4369667/14 (22) 04.02.88 (46) 15.05.91. Ъюл. P- 18

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (71) Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови им. акад. Г.М.Мухадзе (72) И.Г.Местиашвили, М,.А,Долаберидзе, И.Ш. Зедгинидзе и Ц.Ш.Зрадзе (53) 616-0.89,9 (088.8)

i (56) И.И.Зедгинидзе и др. Диагностика гемоглобинопатий. Тбилиси, 1975, с.101. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕТЕРОЗИГОТНЫК ФОРМ 0 - и р-ТАЛАССЕМИИ

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

У лиц с подозрением на гетерози» готную g - или Р -талассемию берут . кровь из пальцев, готовят тонкие мазки и определяют морфологические характеристики эритроцитов: их форму, размеры и насыщенность гемоглобином.

Особое внимание обращают на наличие патологических форм эритроцитов, таких как мишеневидные, шлемовидные, узкоэллипсоидные с зазубренными краями, эритроциты с базофильной пунктацией, макропланоциты. Одновременно определяют содержание эритроцитов с HbF в мазках крови по методу Kleihauer Braun, Betke (1957 r.), уро-. (1) (* *01 N 1/28, А 61 Б 10/00 (57) Изобретение относится к медици ° не, а именно к гематологии. Цель изобретения — повышение точности диагностики наследственных форм OLи -талассемии. Наряду с определеем в крови изменений форм эритропитов уровня НЬА, и НЬГ гемоглобина дополнительно определяют содержание

Na — и К+-зависимой АТФ-азы и фракционный состав нейтральных липидов мембран эритроцитов, При значении содержания АТФ-азы 0,6 мм/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2+ — 3, а также при наличии из менений в содержании НЬА и HbF u форме эритроцитов диагностируют заболевание.

« вень HbA методом электрофореза на ацетит-целлюлозных пленках, уровень

Hb методом щелочной денатурации (Singer, 1951 г.). Параллельно провводят инкубацию крови с бриллиантовым крезиловым синим красителем для выявления HB нестабильного гемоглобина Н.

Дополнительно из вены берут кровь в объеме 15 мл, выделяют мембраны

Ф- + эритроцитов, определяют (Na + К )

АТФ-азную активность (белок), фосфор, а также фракционный состав нейтральных липидов при помощи тонкослойной хроматографии (по методу

Шталью).

При выявлении пониженной по сравнению с нормой (Na+ + К+) — АТФ-азной активности и визуально определяемого увеличения липидной фракции в зоне триглицеридов в сочетании с наличием

1649359

55 специфических морфологических изменений эритроцитов (мишеневидные, овальные, узкоэллипсоидные, базофильнопунктированные на фоне пойкилоци тоза) с повышенйым уровнем НЬА и

HbF наличием эритроцитов, содержащих HbF, подтверждают диагноз гетерозиготной Р-талассемии, в сочетании же с наличием специфических морфологических нарушений эритроцитов (мишеневидные планоциты, шлемовидные, овальные, базофильнопунктированные на фоне макроцитоза) и наличием ВВ на фоне нормального или пониженного уровня НЬА, и HbF и отсутствием эритроцитов с HbF — подтверждают ди,агноз К-талассемии,„ В сочетании с отсутствием характерных морфологических нарушений эритроцитов и ВВ при нормальном содержании НЬА и

HbF и отсутствием эритроцитов с HbF ставят диагноз К-талассемии — латенЯ тной формы заболевания, а при сочетании с наличием характерных морфологических нарушений эритроцитов„ эритроцитов, содержащих НЬР и нормального содержания HbA и HbFставят диагноз латентной гетерозиготной Р-талассемии.

Пример 1. Больной 20 лет.

Дмагноз: гетерозиготная Р-талассемня. Жалобы на общую слабость, утомляемость, иногда боли в лебом подреберье.

Анализ крови: Hb — 1 26, 0 г/л, эр. 4,8 1О /л, цветовой показатель

0,79, РОЗ 3 мм., лейкоциты 5,0 х х 10 /л, тромбоциты 50Х, ретикулоциты ЗОХ, базофильная сетчатость в толстой капле (++), отмечается выраженный анизоцитоз за счет микроцитов и макроцитов; умеренный пойкилоцитоз, небольшая полихромазия, часть эритроцитов гипохромна. Встречаются овалоциты — 10-16 и/зр, мишеневидные эритроциты — 0-8 и/зр, шлемовидные 2-3 и/зр, с.(E .зовидные— 0-3 п/зр, базофильнопунктированные— единичные в препарате. Лейкоцитарная формула, Х: миелоциты 0-5: сегм.

" 5,5; пал. 3,5; моноциты 9,5; эозинофилы 4,5; лимфоциты 3 1,5 °

При цитологическом изучении мазка периферической крови эритроциты, содержащие HbF 10/. При инкубации крови с бриллиантовым крезиловьщ синим красителем внутриэритроцитар5

1О

50 ные включения нестабильного гемоглобина не обнаружены.

При изучении фракции гемоглобина методом злектрофореза на бумаге

HbA составляет 3,6 .. При исследовании медотом щелочной денудации уровень HbF составляет 2,2 .

Сывороточное железо 30,3 мкмоль/л, общая железосвязывающая способность70,9 мкмоль/л,, свободный трансфер;рин 40,6 мкмоль/л, коэффициент насыщения трансферрина железом 43Х.

На основании проведенных исследований пробанду был поставлен диагноз гетерозиготной P»талассемии. При специальном исследовании мембраны

+ эритроцитов оказалось, .что (Na + К )АТФ-азная активность мембран эритроцитов понижена и составляет 0,60 мМ/мг б.ч., а при фракционировании нейтральных липидов мембраны эритроцитов методом тонкослойной хроматографии липидная фракция в зоне триглициридов.увеличена (2 ).

Пример 2. Больной 37 лет, жалобы на общую слабость,. легкие боли в коленях, небольшое увеличение селезенки при тяжелых простудных заболеваниях.

Объективно: склеры желтушны, печень и селезенка не прощупываются.

Анализ крови: НЬ 122,0 г/л, эритроциты 5,2 t0 /л, цветной показатель 0,69, РОЗ 6 мм, лейкоциты 7,0 х х 109 /л, тромбоциты 51Х, ретикуло-. цнты 19Х, базофильная сетчатость в толстой капле (+). Отмечается склонность эритроцитов к макроцитозу, встречаются овалоциты 8-12 п/зр., шпемовидные эритроциты — единичные в и/зр. Лейкоцитарная формула, /: миелоциты 0,5; сегм. 66,5; моноциты

4,5; эозинофилы 4; базофилы 0,5; лимфоциты 24,0.

При цитологическом изучении мазка периферической крови эритроциты, содержащие HbF не обнаружены. При инкубации крови с бриллиантовым крезиловым синим красителем внутриэритроцитарные включения нестабильного гемоглобина — 5/.

При исследовании гемолизата методом электрофореза на бумаге НЪА составляет 1,5Х при исследовании методом щелочной денатурации уровень .

HbF составляет 0,5/.

Термостабильность гемоглобина

75, О/.

1649359 формула изобретения, Составитель Л.Стебаева

Редактор Т.Лазоренко Техред С,Мигунова Корректор А.Обручар

Тираж 405

Заказ 1516

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óëñãoðîä, ул. Гагарина,101 ч

Уровень сывороточного желеэа18 мкмоль/л, общая желеэосвязывающая способность 64,8 мкмоль/л, свободный трансферрин 46,8 мкмоль/л, коэффициент насыщения 27_#_, У больного поставлен диагноз

g-талассемии.

Дри проведении диагностики гетерозиготных форм 0(- и Р-талассемии оказалось, что у больных, подозревающихся на носитель гена g, — или Р -талассемии, в 907 были выявлены признаки 0(- или Р-талассемии.

Точность диагностики гетерозиготной талассемии значительно выше.

Предложенный способ имеет большое практическое, а также теоретическое значение для понимания механизмов проявления генетических заболеваний, Способ, диагностики гетерозигот5 ных форм ф- и /)-талассемии путем выявления в крови измененных форм эритроцитов и определения уровня

НЬА и HbF гемоглобина, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа в случаях латентных и стертых форм заболевания, в крови дополнительно определяют содержание Na — и К -зависимой

+» +

АТФ-аэы и фракционный состав нейтральных липидов мембран эритроцитов, и при значении содержания АТФ-аэы

0,6 мМ/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2 — 3 диаг+ Фностируют заболевание.