Способ моделирования возрастной катаракты

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может использоваться при оценке прозрачности хрусталика и скрининге энтикатарактальных и катарактогенных веществ. Цель изобретения - повышение воспроизводимости стадии заболевания. Способ заключается в том, что выделенные хрусталики лабораторных животных заключаются в прозрачную гельобразующую среду, в которой они затем инкубируются 1-7 сут в зависимости от необходимости моделирования той или иной стадии катаракты. По сравнению с используемыми способами моделирования возрастной катаракты in vivo предлагаемый способ является более простым и экономичным в исполнении. Кроме того, как по сравнению со способами In vivo, так и In vitro предлагаемый способ позволяет более адекватно оценивать степень помутнения хрусталиков и эффективность испытываемых лекарственных средств в зависимости от стадии заболевания.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ сОциАлИстических

РЕСПУБЛИК

ts»s G 09 В 23/28

ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4686346j14 . (22) 16.02.89 (46) 15.05.91. Бюл. М 18 (71) 2-й Московский государственный медицинский институт им.Н.И.Пирогова (72) Е.И.Дудина, Ю,A.Âëàäèìèðîâ и В.Е.Формазюк (53) 615,475 (088.8) (56) Kador P.Å, Homan Cataract formation, (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВОЗРАСТ Н О Й КАТАРАКТЫ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может использоваться при оценке прозрачности хрусталика и скрининге. антикатарактальных и катарактогенных веществ, Цель изобретения — повышение воспроизводимости стаИзобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии.и может найти применение при оценке прозрачности хрусталика и скрининге антикатарактальных и катарактогенных веществ.

Цель изобретения — повышение воспроизводимости стадий заболевания.

Способ осуществляется следующим образом.

Вокруг извлеченного иэ глаза млекопитающего хрусталика формируют прозрачный гель на срок 1-7 сут. Для формирования геля можно использовать агарозу и другие вещества. способные полимеризоваться при температурном режиме, который не повреждает линзы глаза (16 — 42 С).

Для проведения оптических исследований достаточно вырезать слой агара с за. ключенным в нем хрусталиком и перевести,, Ы„„1649598 А1 дии заболевания, Способ заключается в том, что выделенные хрусталики лабораторных животных заключаются в прозрачную гельобразующую среду, в которой они затем инкубируются 1 — 7 сут в зависимости от необходимости моделирования той или иной стадии катаракты. По сравнению с используемыми способами моделирования возрастной катаракты in vivo предлагаемый способ является более простым и экономичным в исполнении. Кроме того, как по сравнению со способами In viva, так и In vitro предлагаемый способ позволяет более адекватно оценивать степень помутнения хрусталиков и эффективность испытываемых лекарственных средств в зависимости от стадии заболевания. в кюветы, что позволяет объективно оценить не только степень помутнения хрусталика, но также и результат воздействия лекарственного препарата.

Воспроизведение стадий возрастной катаракты человека достигается при этом способе моделирования. 8 течение первой (Л недели прогрессивно уменьшается прозрачность хрусталиков, заключенных в гель, Оф о чем достоверно свидетельствует повышение оптической плотности, измеряемой спектроскопически при 600 нм. Причем в начале инкубации, как и при старческой катаракте человека, развивается помутнение корковых структур. Позже, к 7 дню, наблюдается тотальное помутнение линзы, которая к тому же окрашивается в желтоватый цвет. Более длительная инкубация в результате продолжающегося накопления пигмен1649598

20

55 та старения — липофусцина сопровождается дальнейшим изменением цвета хрусталиков. Одновременно с помутнением и изменением цвета в хрусталиках лабораторных животных накапливаются флуоресцирующие при 460-480 нм продукты, что характерно для разных стадий катаракты человека. Кроме того, в хрусталиках происходит уменьшение уровня калия, увеличение обводненности линзовых волокон, что также свойственно возрастной катаракте людей.

Пример 1. У крысы линии Wistar массой 102 r после декапитации выделяют хрусталики: энуклеируют глаз и скальпелем делают разрез по его задней поверхности так, чтобы разрез проходил по стекловидному телу, не затрагивая заднюю капсулу хрусталика. Хрусталик помещают в кювету и заливают гельобразующей средой. В качестве такой среды использовали 1%-ный раствор агарозы, приготовленный на физиологическом растворе, предварительно расплавленном и охлажденном,до 42 С. По мере охлаждения раствора агарозы до комнатной температуры вокруг хрусталика формируется прозрачный гель. При проведении спектрофотометрии при 600 нм начальная оптическая плотность хрусталиков (в геле) составила 0,22 и 0,28 усл,ед. Далее проводят инкубацию исследуемого оЬъекта в геле при комнатной температуре в защищенном месте от прямого света. Через сутки наблюдают легкое помутнение поверхностных структур хрусталиков, при этом их оптическая плотность возрастает до 0,36 усл.ед.

При оценке других параметров испытуемых линз было установлено, что на 1 сутки инкубации их вес составлял 115%, интенсивность флуоресценции белковых гомогенатов 137%, содержание ионов калия 91% от контрольного уровня. Таким образом, моделировалась начальная стадия возрастной катаракты.

Пример 2, У крысы линии Wtstar. массой 94 r после декапитации выделяют хрусталики. Хрусталики помещают в кюветы и заливают 1%-ным раствором агарозы. После образования геля фиксируют начальную оптическую плотность исследуемых объектов при 600 нм, Инкубацию изучаемых объектов проводят при комнатной температуре в месте, защищенном от прямого действия света. Спустя трое суток наблюдалось значительное помутнение поверхностных структур и легкое помутнение ядер инкубированных линз. Кроме того, исследуемые объекты приобретали легкий желтоватый оттенок. Оптическая плотность их возрастала в 2,5 раза, вес на 20%. Интенсивность флу.оресценции белковых гомогенатов хрусталика составляла 220%, а содержание ионов калия 78% от уровня нормы. Таким образом, моделировалась стадия незрелой катаракты.

Пример 3. Хрусталики крысы линии

Wlstar, весившей 115 г, заливают 1%-ным раствором агарозы. Регистрируют начальную оптическую плотность хрусталиков в геле. Затем проводят инкубацию исследуемых объектов в геле при комнатной температуре в защищенном от прямого действия света месте..Спустя неделю наблюдалось тотальное помутнение крысиных линз, имевших желтый оттенок. Оптическая плотность их возрастала в 6 раз, то есть они совершенно переставали пропускать свет. Одновременно вес хрусталиков увеличивался на 27%, концентрация ионов калия в линзах уменьшалась на 40%., а интенсивность флуоресценции белковых гомогенатов возрастала в

18 раз. Таким образом моделировалась стадия зрелой катаракты.

При этом способе моделирования возрастной катаракты повышается также адекватность испытания лекарственных средств в результате большего приближения модели к реальной ситуации, уменьшения травматизации поверхностных структур хрусталика и возможности объективной количественной оценки динамики прозрачности хрусталика, Предлагаемый способ моделирования катаракты может использоваться в научных учреждениях и лабораториях, занимающихся поиском и испытанием новых антикатарактальных препаратов, Он может быть также полезен при апробации вновь созданных лекарственных средств для выяснения не обладают ли они побочным катарактогенным действием, Формула изобретения

Способ моделирования возрастной катаракты путем извлечения хрусталика у лабораторного животного и помещения его в среду инкубации, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения воспроизводимости стадий заболевания, вокруг хрусталика формируют прозрачный гель на срок 17 сут помещением хрусталика в кювету и заливкой гельобразующей средой..