Способ серодиагностики сифилиса

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для повышения чувствительности серодиагностики сифилиса в РИФ-абс. Целью изобретения является повышение точности способа за счет того, что дезинтеграт ультраозвученных культур бледных трепонем дополнительно центрифугируют , а в качестве сорбента в РИФ-абс используют супернатант. Сорбент, приготовленный предлагаемым способом, обладает повышенной сорбционной емкостью к неспецифическим антителам сыворотки крови, что повышает чувствительность РИФ-абс, а соответственно и серодиагностику сифилиса на 6.8%. а специфичность реакции на 22 2%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ са )ут т(4 H т т

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4315356/14 (22) 17.08.87 (46) 23.05.91. Бюл. М 19 (71) Ставропольский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и Ставропольский государственный медицинский институт (72) В.С. Пожарская, В.Н. Беднова, С.А. Угримов и С.Ф. Падалка (53) 616.07(088.8) (56) Беднова В.Н., Орлик Э.А. Реакция иммунофлуоресценции с абсорбцией для специфической серодиагностики сифилиса. ЦКВИ

М3 СССР, 1985. (54) СПОСОБ СЕРОДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для повышения точности серодиагностики сифилиса в РИФабс.

Целью изобретения является повышение точности способа серодиагностики сифилиса за счет того. что дезинтеграт ультраозвученных бледных трепонем дополнительно центрифугируют, а в качестве сорбента в реакции РИФ-абс используют супернатант.

Способ осуществляется следующим образом.

Культуральные бледные трепонемы I. Ч, ЧИ! штаммов (по одному представителю от

„каждой антигенной группы) выращивают в анаэробных условиях на печеночном бульоне с добавлением кусков печени КРС. рН 8,2 в течение 8 дней. Выросшую культуру фильтруют, центрифугируют при 5,5Х 10 g в течение 30 мин. Осадок дважды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия... Ж 1650098 А1 (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для повышения чувствительности серодиагностики сифилиса в РИФ-абс. Целью изобретения является повышение точности способа за счет того, что дезинтеграт ультраозвученных культур бледных трепонем дополнительно центрифугируют, а в качестве сорбента в РИФ-абс используют супернатант. Сорбент, приготовленный предлагаемым способом, обладает повышенной сорбционной емкостью к неспецифическим антителам сыворотки крови, что повышает чувствительность

РИФ-абс, а соответственно и серодиагностику сифилиса на 6.8 а специфичность реакции на 22,2 .

Иэ полученного осадка готовят взвесь трепонем 10 микр. кл/мл по стандарту мутности, далее смесь дезинтегрируют в течение

20 мин и центрифугируют при 10 д в течение в

30 мин. Полученный осадок (клеточные стен-,( ки и наружные фибриллы культуральных 1(Я бледных трепонем) используют для промышленного получения трепонемного антигена, а супернатант (отходы производства). содержащий белки цитоплазматического цилиндра (цитоплаэматические мембраны, О© мезосомы, внутренние фибриллы, цитоплаама клеток).ислольауют а какестае сор- )Ь бента при серодиагностике сифилиса в

РИФ-абс. Полученный сорбент (супернатант) титруют, для этого его разводят 0,85 ным NaO рН 7.2 в 2, 3. 4. 5 ра3 и ставят

РИФ-абс с восьмью сыворотками: одна (1) реэкоположительная (4+). две (2, 3) слабоположительные (2+), пять (4-8) от людей, свободных от сифилитической инфекции, три из которых дают неспецифическиположитель1650098 ные результаты в РИФ (2+). Все сыворотки разводят предлагаемым сорбентом в соотношении 1:5 и исследуют в РИФ. За титр сорбента принимают такое его разведение, при котором сорбированные сыворотки больных сохраняют степень позитивности, а сыворотки лиц, свободных от сифилиса, не дают свечения.

Оттитрованный сорбент стандартиэуют по сериям (установленный титр, т.е. его рабочее разведение вносят в паспорт), разливают по 5 мл во флаконы, лиофилиэируют по известному режиму сушки и укупоривают для последующего использования в РИФабс серологическими лабораториями.

Для постановки РИФ-абс предварительно готовят следующие ингредиенты: исследуемую сыворотку крови инактивируют при 56 С в течение 30 мин; трепонемный антиген (взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса, полученная из 7-суточного орхита кролика) должен содержать

40-60 трепонем в поле зрения при микроскопии с темнопольным конденсором; сорбент (предлагаемый) разводят иэотоническим раствором хлорида натрия до укаэанного титра по паспорту; титруют сухую люминесцирующую сыворотку крови против глобулинов человека в РИФ-абс с сыворотками крови людей, разведенных предлагаемым сорбентом в соотношении

1:5 (5 сывороток крови больных сифилисом и 5 сывороток крови лиц, свободных от сифилитической инфекции), и устанавливают рабочий титр по наличию наиболее яркого свечения с положительными сыворотками крови и полное отсутствие свечения клеток трепонем с отрицательными сыворотками крови. Далее полученный титр люминесцирующей сыворотки проверяют на 100 сыворотках крови людей, причем из них 207 сывороток крови от лиц больных сифилисом.

Берут тонкие обезжиренные предметные стекла, на обратной стороне которых определяют границы нанесения ингредиентов реакции (диаметр 0.7). Затем в пределах круга на стекло наносят трепонемный энтиген, высушивают на воздухе и фиксируют 10 мин в химически чистом ацетоне. Далее инвктивировэнную испытуемую сыворотку крови разводят сорбентом, предварительно разведенным по титру в соотношении 1:5, маносят ее нэ мазок энтигена, помещают во влажную камеру, которую затем ставят в термостат при 37 С на 30 мин (! фаза реакции), По истечении времени камеру извлекают из термостата, предметные стекла с первой фазой реакции двукратно промывают фосфатным буфером, причем при втором промывании для более полного удаления белков, не участвующих в реакции, предметные стекла выдерживают в фосфэтном буфере в течение 10 мин, далее высушивают и наносят

5 на мазок люминесцирующую сыворотку, помещают во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин (И фаза реакции), По истечении времени исследуемый образец промывают фосфатным

10 буфером в такой же последовательности, как и после. первой фазы реакции, после чего высушивают, наносят на поверхность мазков нелюминесцирующее иммерсионное масло (диметилфталат) и приступают к учету РИФ15 абс в люминесцентном микроскопе с ртутнокварцевой лампой (ДРШ-250), Учет реакции осуществляют по степени свечения бледных трепонем.

Пример 1. У больного В. клинические

20 проявления первичного сифилиса, однако серодиагностика в стационарном комплексе PCK на сифилис отрицательная. При постановке РИФ-абс с ультрэозвучейным антигеном получен слабоположительный

25 результат (2+). Постановка РИФ-абс с сорбентом, приготовленным описанным способом, дала реэкоположительный результат (4+), Данный способ позволяет установить диагноз: сифилис первичный в РИФ-абс.

30 Положительный эффект достигается тем. что повышается чувствительность РИФ-абс в два раза, что является исключительно ценным для выполнения оптимальных терапевтических мероприятий в сжатые сроки у

35 данной категории больных.

Пример 2. У больного С. клинические и серологические исследования в РСК на сифилис установили диагноз: сифилис первичный серопоэитивный. Сыворотка крови

40 больного С, в РИФ-абс с ультраоэвученным трепонемным антигеном дала положительный результат (3+), с сорбентом, приготовленным описанным способом, в РИФ-абс реакция была резкоположительной (4+). Дан45 ный способ, таким образом. повышает степень позитивности (на 1 ). переводя положительные реакции в резкоположительные.

П р им е р3. Больная Г. при заболевании острой вирусной инфекцией дала положи50 тельные реакции в РСК на сифилис. Клинических проявлений позднего сифилиса не выявлено, однако исследования спиномоэговой жидкости (ликвора), полученного при пункции, дало слабоположительный реэуль55 татв РСК. В РИФ-абссыворотка кровибольной и ликвора дали с ультраоэвученным трепонемным энтигеном положительные результаты (3+). с сорбентом, полученным по изобретению, в РИФ-абс реакции были резкоположительными (4+), 1650098

Составитель И. Емельяненко

Техред М.Моргентал Корректор А. Осауленко

Редактор A. Мотыль

Заказ 1560 Тираж 453 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород. ул. Гагарина, 101

Предлагаемый способ позволяет установить диагноз: поздний сифилис, в этом примере повышает степень позитивности (на 1+), переводя положительные реакции в реэкоположительные, 5

Таким образом, сорбент, приготовленный предлагаемым способом, обладает повышенной сорбционной емкостью к неспецифическим антителам сыворотки крови, что повышает чувствительность 10

РИФ-абс, а соответственно и серодиагностику сифилиса на 6,8, а специфичность - реакции на 22,2,ф.

Формула изобретения

Способ серодиагностики сифилиса путем постановки реакции РИФ-абс с использованием деэин1еграта ультраозвученных культур бледных трепонем в качестве сорбента, отличающийся тем,что,сцелью повышения точности способа„деэинтеграт дополнительно центрифугируют. а в качестве сорбента используют супарнатант.