Способ культивирования грибов рода fusаriuм
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к способу культивирования поверхностным методом на жидких питательных средах грибов рода Fusarium. Целью изобретения является повышение выхода биомассы и токсинов гриба. Способ культивирования грибов рода Fusarium осуществляется следующим образом. На стерильный агар Чапека вносят взвесь конидий гриба F.culmorum и F.nivale, затем на поверхности инокулированного агара размещают простерилиэованный нетонущий сухой материал в качестве которого могут быть использованы кусочки пенопласта размером х 1 см. соломка длиной 3-5 см, просушенное зерно, пробка , дерево в количестве 5-8 шт. на чашку Петри. Культивируют гриб три 25°С в течение 5-7 дней. Полученный заспоренный нетонущий материал вносят в жидкую питательную среду, содержащую, г/л: сахароза 30; КН2Р04 1; MgSO r7H20 0,5; KCI 0,5; FeS04 -7Н20 0.01; NH4NOa 2; отвар злаковых растений - до 1 л, культивируют при 25°С в течение 15-20 дней. Способ позволяет получить 125-150 г влажной грибницы и увеличить фитотоксичность фильтрата культуральной жидкости. 4 табл.
СОЮЗ СО8ЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 1/14
ГОСУДАРСТ8Е ННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4484067/13 (22) 20,09.88 (46) 23,05.91, Бюл. ¹ 19 (71) Н ауч но-исследовател ьский институт сельского хозяйства Северо-Востока им. Рудницкого Н.В. (72) Е.А,Родин и А.А.Ивановский (53) 63.576,8(088,8) (56) Фостер Д. Химическая деятельность грибов, — M,; 1959, с. 47-51, Билай В.И. Методы экспериментальной микологии, — Киев; Наукова думка, 1982„ с, 296.
Кирай 3. и др. Методы фитопатологии, 1974, с. 178, 186 — 189 . (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБОВ РОДА FUSARlUM (57) Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к способу культивирования поверхностным методом на жидких питательных средах грибов рода Fusarium. Целью изобретения является повышение выхода биомассы и
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к способу культивирования поверхностным методом на жидких питательных средах грибов рода Fusarium.
Целью изобретения является повышение выхода биомассы и токсинов гриба.
Способ осуществляют следующим образом.
На стерильный агар Чапека вносят взвесь конидий грибов Fusarlum culmorum или Fusarium nivale, смытую стерильной водой с культуры грибов в пробирках на ско„„Я2„„1650695 А1 токсинов гриба, Способ культивирования грибов рода Fusarium осуществляется следующим образом. На стерильный агар Чапека вносят взвесь конидий гриба F.cuimorum и F,nivale, затем на поверхности инокулированного arapa размещают простерилиэованный нетонущий сухой материал в качестве которого могут быть использованы кусочки пенопласта размером1 х 1 см. сопоМ ка длиной 3 — 5 см, просушенное зерно, пробка, дерево в количестве 5 — 8 шт. на чашку
Петри. Культивируют гриб при 25 С в течение 5 — 7 дней. Полученный заспоренный нетонущий материал вносят в жидкую питательную среду, содержащую, г/л: сахароза 30; КН2РО4 1; MgSO4 7HzO 0,5;
KCI 0,5; FeS04 7Hz00.01; NH4NOz2; отвар злаковых растений — до 1 л, культивируют при 25 С в течение 15 — 20 дней. Способ позволяет получить 125-150 r влажной грибницы и увеличить фитотоксичность фильтрата культуральной жидкости. 4 табл. шенном агаре Чапека. Сразу же вслед за этим на поверхности инокулированного таким образом агара размещают простерилизоввнный сухой нетонущий материал (кусочки пенопласта размером 1 х 1, соломка длиной 3 — 5 см или просушенное зерно, пробка, дерево), в количестве 5-8 шт. на чашку Петри. Культивирование грибов осуществляют в термостате при 25 С в течение
5-7 дней. Готовят стерильную жидкую питательную среду, содержащую, г/л; сахароза
30; KHzP04 1; MgSO4 7HzO 0,5; КС! 05;
FeSO4 7Н20 0,01; ИН4МОЗ2; отвар злаковых растений — до 1 л, инокулируют ее при1650695 готовленным посевным материалом на нетонущем материале.
Культивирование грибов осуществляют, поверхностным методом в литровых колбах, содержащих 200 мл укаэанной питательной среды при 25 С в течение 15-20 дней в термостате.
Максимальный выход биомассы и токсинов наблюдается к 15 — 20 дню культивирования.
Пример 1, В чашки Петри на стерильный агар Чапека, предварительно инокулированный спорами гриба F.culmorum u
F.nl vale, размещают кусочки пенопласта по
5 шт. на 1 чашку Петри. Одновременно в стерильные чашки Петри вносят простерилизованное увлажненное зерно ячменя и инокулируют его взвесью конидий гриба в 1 мл физраствора.
Чашки Петри с подготовленным субстратом в обоих случаях помещают в термостат при 25 С на 7 дней для культивирования грибов. За зто время на увлажненном зерне образовался налет мицелия, а нетонущий материал также оброс мицелием.
Увлажненное зерно с образовавшимся на нем мицелием и заспоренный грибом нетонущий материал вносят в колбы с
200 мл жидкой питательной среды следующего состава, г/л: сахароза 30; КН РО4 1;
MgS04 7HzO 0,5; КС! 0,5; FeS04 7Н О
0,01; КМОз 2; дистиллированная вода — до 1 л, и культивируют в термостате при 25 С в течение 15 дней (по 5 колб на вариант). В случае инокуляции жидкой питательной среды культурой гриба на увлажненном зерне наблюдается погружение инокулюма на дно колбы. Наблюдения в течение всего срока культивирования показали, что гриб ни на поверхности, ни в глубине питательной среды не развивается, а культуральный фильтрат(КФ) не обладает выраженной фитотоксичностью.
8 колбах, инокулированных заспоренным грибом нетонущим материалом, развитие гриба на поверхности среды отмечено на третий день, а к седьмому дню культивирования мицелий гриба активно развивался и достигал своего максимума к пятнадцатому дню так же, как и уровень токсичности кулътурального фильтрата.
Данные по развитию гриба и уровню токсичности культурального фильтрата приведены в табл. 1.
Пример 2. Инокуляцию и культиви5 рование гриба проводят в условиях, аналогичных примеру 1, но в жидкую питательную . среду вместо КЙОз вводят ЙН4МОз в количестве 2 г/л.
Результаты приведены в табл. 2, 10 Пример 3. Инокуляцию и культивирование гриба проводят аналогично примеру 1, но в качестве основы среды используют отвар ячменя.
Результаты приведены в табл. 3.
15 Пример 4. Инокуляцию и культивирование гриба проводят в условиях, аналогичных примеру 1, но вместо КМОз в жидкую питательную среду вводят йН4ИОз, а в качестве основы среды используют отвар яч20 меня.
Результаты представлены в табл. 4.
Таким образом, использование для культивирования грибов рода Fusarium нетонущего заспоренного материала для
25 удержания образуемой в процессе культивирования грибной биомассы на поверхности среды и применение модифицированных жидких питательных сред ускоряют процесс развития, накопления
30 биомассы гриба и усиливают фитотоксические свойства культурального фильтрата.
Формула изобретения
35 Способ культивирования грибов рода
Fusarium, предусматривающий приготовление посевного материала на твердой питательной среде, приготовление жидкой питательной среды, содержащей, г/л: саха40 роза 30; фосфорнокислый однозамещенный калий 1; магний 0,5; хлористый калий 0,5;
FeSO4 7Н20 0,01, соль азотной кислоты и основу среды. засев жидкой среды посевным материалом и дальнейшее культивиро45 вание грибов. отличающийся тем,что, с целью повышения выхода биомассы и токсинов гриба, на поверхности твердой питательной среды размещают сухой нетонущий материал, иэ солей азотной кислоты исполь50 эуют азотнокислый аммоний, а в качестве жидкой основы среды используют отвар злаковых растений. !
1650695
Таблица
Процент ингибирования центральногоко ня
Средняя длина центрального корня, см
Масса влажной грибницы, г/л
Разведение
КФ в дистиллированной воде
Количество зерен в опыте, шт.
Вид гриба и условия культивирования
3,0
Fusarlum culmorum
Культура на влажном зерне
Fusarium nivale
Культура на влажном зерне
Fusarium culmorum
Культура на заспоренном нетонущем материале
Fusarlum nivale
Культура на заспоренном нетонущем мате иале
2,9
2,8
1:4
1:1
2,9
2,31
1:4
1:1
125
0
2,55
3,13
1;4
1:1
150
3,18
1;4
Таблица 2
Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования
Разведение
КФ в дистиллированной воде
Средняя длина центрального корня, см
Вид грибов
Масса влажной грибницы, г/л
Количество зерен в опыте, шт.
Процент ингибирования центрального ко ня
П и инок ля ии с е ы к ль ой г иба, вь
i а енной на влажненном зе не
1:1
1:4
Fusarlum culmorum
0
3,0
3,1
П и инок ля ии с е ы эаспо енным г ибом нетон им мате иалом
Fusarlum nivate
1;1
1:4
2,3
2,5
29
Таблица 3
Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования
Вид гриба
Степень разведения КФ в дистиллированной вое
Количество зерен в опыте, шт.
Масса влажной грибницы, г/л
Средняя длина центрального корня, см
Процент ингибирования центрального ко ня
П и инок ля ии с е ы к ль и г иба, вы а енной на влажненном зе не
Fusar! um culmorum 1:1
1:4
2,6
2,9
14
П и инок ля ии с е ы заспо енным к ль ой r иба нетон им мате иалом
Fusarium culmorum 1:1
1:4
2,1
3,0
48
Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования
1650695
Таблица 4
Показатели массы и фитотоксической активности грибов Fusarium на 15-й день культивирования
Процент ингибирования центрального ко ня
Вид гриба
Инок ля ия к ль ой r иба, вы а анной н и питательно йс е ы азе не,жи ко г ибами нетон его мате
Показатели и осле внесения заспо енного иала
160
160
Составитель Н.Мцхветаридзе
Техред М.Моргентал Корректор M.Äåì÷èê
Редактор Н,Рогулич
Заказ 1583 Тираж 379 Подписное
8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Fusarium culmorum
Fusarlum nlvale
Fusarlum culmorum
Fusarlum nfvale
Разведение
КФ в дистиллированной воде
1;1
1;4
1:1
1;4
1:1
1:4
1:1
1:4
Количество зерен в опыте, шт.
Масса влаж- Средняя ной грибни- длина центцы г/л рального корня, см
2,6
2,5
2.5
2,7
1,79
3,1
2,7
3,0
8
13
67
