Штамм актиномицета sтrертомyсеs lavendulae suвsр.аruртini для получения аруптина

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения высокоактивного штамма актиномицета - продуцента аруптина, предназначенного для использования в сельском хозяйстве, а именно в овощеводстве для борьбы с. бактериозами сельскохозяйственных растений и птицеводстве для повышения эффективности использования кормов с Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой антибиотической активностью. Штамм актиномицета Streptomyces lavendulae subsp.aruptini К-4111 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером Ас-1267Д, Данный штамм позволяет увеличить синтез аруптина с 300-348 мкг/мл (известный штамм под К° 39) до 990- 1120 мкг/мл. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И А ВТОРСНОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4651647/13 (22) 16.02.89 (46) 28.02,91. Бюл. 9 8 (71) Институт микробиологии AH СССР (72) В.Д. Кузнецов и Т.П.Удалова (53) 576.15(088.8) (54) ШТАИМ АКТИНОМИЦЕТА БТКЕРТ01ГКСЕЯ

LAVENDULAE SUBSP.ÀRUÐÒÏÏ ДЛЯ ПОЛУЧЕННИЯ АРУПТИНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения высокоактивного штамма актиномицета — продуцента аруптина, предназначенного для использования в сельском хозяйстве, а именИзобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения высокоактивного штамма актиномицета. — продуцента антибиотика аруптина, предназначенного для использования в сельском хозяйстве, а именно в овощеводстве для борьбы

4 с бактериозами сельскохозяйственных растений и в птицеводстве для повышения эффективности использования кормов.

Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего более высокой антибиотической активностью.

Штамм актиномицета Streptomyces

lavendulae subsp.aruptini, получен а, результате его отбора из гомологияеского ряда спонтанных вариантов.

Отселекционированному штамму актиномицета Б1:reptomyces lavendilae

subsp.aruptini присвоен t! - К-4111, штамм депонирован во Всесоюзной кол(51)5 С 12 Р 1/06, С 12 N 1/14

2 но в овощеводстве для борьбы с бактериозами сельскохозяйственных растений и птицеводстве для повышения эффективности использования кормов, Целью изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой антибиотической активностью.

Штамм актиномицета Streptomyces layendulae subsp.aruptini К-4111 депонирован во Всесоюзной коллекции мик роорганизмов под номером Ас-1267Д„

Данный штамм позволяет увеличить синтез аруптина с 300-348 мкг/мл (известный штамм под - 39) до 9901120 мкг/мл. 1 табл. лекции микроорганизмов под номером С::

Ас-1267D.

Культуральные признаки штамма пред- Я ставлены в таблице.

Морфологические свойства: споронос- р цы — прямые и крючкообразные или в виде примитивных спиралей, споры— овальные, поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства: аэроб, оптимальная температура роста 26-28 С, крахмал гидролизует слабо, молоко коагулирует и разжижает желатину на 10-е сут роста.

В качестве единственных источников углерода потребляет глюкозу, кси-. лозу, арабинозу, инозит. Слабо исполь-,файв зует фруктозу и сахарозу, не потребляет маннит, рамнозу, рафинозу.

Обладает широким антимикробным действием, подавляя рост грамположительных (Staphiloccocus aureus, Bacillus mycoides. Bacillus subtilis

1631083 и др.) и грамотрицательных (Гаса.

coli и др.) бактерий, дрожжей (Candida albican8, Honilia sp. и др,), грибов (Fusarium и др.) и актонамицетов (Streptomyces а11ае, Streptomyces levorts и др.).

ИтаМм поддерживают на агаризаванной картофельной среде. Для длительного хранения используют методы кан10 сервации культур актиномицетов под вазелиновым маслом в виде почвенных культур или в лиофилизираваннам состоянии, Процесс биасинтеза антибиотика

15 аруптина осуществляют путем выращивания актинамицета в течение 3-4 сут в колбах на круговых качалках или в ферментере на жидкой питательной среде следующего состава, Х: кукурузная мука 1,5-3; крахмал 1,0-2,0: амманий

20 сернокислый 0,5-1; калий фосфорнакислый однозамещенный 0,02-0,05; хлористый натрий 0,2-0 5 мел технический, 0,3-0,6; вода водопроводная, рН среды перед стерилизацией 6,5.

Препарат аруптин представляет собой прогретую при 70-75 С в течение 10 мин и лиофильно высушенную

3-4-суточную культуральную жидкость

Str.lavendulac subsp. aruptini.

Для определения содержания антибиотика в препарате аруптина последний экстрагйруют 0,01 н. НС1 в течение 2 ч. Антибиотическую активность экстракта определяют методом диффу- 35 зии в агар. Для разведения экстракта используют цитратный буфер, в качестве тест-культуры — споры Bacillus

subti.lis 6633. Для сопоставления в качестве стандарта применяют антибио- 40 тик гризин с активностью 1000 мкг/мг.

Пример 1. Streptomyces lavendulae subsp ° aruptini К-4111 вью ращивают в течение 14 дней при 28 С в пробирках на скошенном картофель- 45 ном агаре, который готовят следующим образом: 200 г очищенного и мелко прорезанного картофеля отваривают в 1 л воды, отвар охлаждают, фильтруют, добавляют 2_#_ агара и стерилизуют при 1 атм 30 мин.

С целью получения вегетативного

1" посевного материала агаровый блок

14-суточной культуры вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащего 100 мл жидкой питательной среды следующего состава, 7: кукурузный экстракт 1,0; мел технический 0,5; глюкоза 0,5; крахмал 1,5: амманий сернокислый

0,35; натрий хларистый — 0,5. вада— водопроводная, рН среды естественной. Стерилизация при 1 атм в течение 30 мин.

Инокулированные колбы помещают на качалку (200 об/мин). Культуру выращивают при 28 С 48 ч. Полученный таким образом вегетативный посевной материал используют для инакуляции ферментационной среды, которая имеет следующий состав, : кукурузная мука 2; крахмал 1,5: аммоний сернокислый 0,7; калий фосфарнакислый однозамещенный 0,03; натрий хлорис тый 0,7; мел технический 0,5; вода водопроводная, рН среды перед стерилизацией 6,8-7.0. Режим стерилизации 1 атм, 30 мин.

Посевной материал в количестве

5 мл вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащие по 100 мл ферментационной среды. Колбы помещают на круговую качалку и инкубируют при ?8 С в течение 3 сут. Па истечении этого срока культуральную жидкость прогревают прр 70-75 С в течение I0 мин и лиофильно высушивают.

Антибиотическая активность культуральной жидкости штамма К-4111

Str.lavendulae subsp.aruptini

1120 мкг/мл. Антибиотическая активность культуральнай жидкости в контроле (штамм 39 Str.lavendilae subsp.

aruptini) 300 мкг/мл.

II р и м е р 2. Streptomyces

lavendulae subsp.aruptini, выращивают на скошенном картофельном агаре и в жидкой питательной среде для получения вегетативного посевного материала как указано в примере 1, По севной материал в количестве 5 мл вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащее 100 мл ферментацианной среды (состав по примеру 1). Колбы помещают на круговую качалку и инкубируют о при 28 С в течение 4 сут. Далее полученную культуральную жидкость про-! о ! гревают при 70-75 С в течение 10 мин и лиофильно высушивают.

Антибиотическая активность культуральной жидкости предлагаемого штамма К-4111 Str.lavendilae subsp.arup-.

tini 1040 мкг/мл. Антибиотическая активность культуральной жидкости в контроле (штамм Р 39 Str.1ачепфзlae subsp.aruptini) — 348 мкг/мл.

Пример 3. Streptomyces

lavendulae subsp.aruptini выращивают на скошенном картофельном arape и в

5 1Ь31083 жидкой питательной среде для получения вегетативного посевного материала, как указано в примере 1.

Посевной материал в количестве

:5 мл вносят в колбы емкостью 750 мл, содержащие 100 мл ферментационной сре ды (состав см.пример 1). Колбы помещают на круговую качалку и инкубируют при 28 С в течение 5 сут. По истечении этого срока культуральную жидкость прогревают при 70 С в течение

10 мин и лиофильно высушивают.

Антибиотическая активность культуральной жидкости предлагаемого штамма

К-4111 Str.lavenhulae subsp. aruptini.

990 мкг/мл.

Культуральные признаки штамма

Антибиотическая активность культуральной жидкости в контроле (штамм

N- 39 Str.lavendulae subsp.aruptini)

300 мкг/мл.

Таким образом, штамм актипомицета Streptomyces lavendulae subsp.

aruptini К-4111 позволяет интенсифицировать процесс биосинтеза антибио тика в 3-3,5 раза.

Формула изобретения

Штамм актиномицета Streptomyces

lavendulae subsp.aruptini ВКМ, Ас-1267Д для получения аруптина, Культуральные свойства

Среда

Цвет воздушного мицелия+

Растворимый пигмент

Мраморно- Бежевый (Л-7) розовый (M-2) Нет

Глюко зоминеральная (CP-1) Овсяная с дрожжевым экстрактом

Бежевый (Л-7) Бледно-серовато-фиолетовый (А-5)

Пепельный (К-2)

Нет

Беловатый (P-1)

Бледно-сероватофиолетовый (А-5) Нет

Картофельная

Кукурузная Р 2

Гаузе В 1

Соевая

Нет

Нет

Нет

Нет

То же

«rr

«н»

Мясопептонный агар

Сусло-агар !

Нет

Рост отсутствует обозначения окраски мицелия даны по шкале цветов Бондарцева.

Составитель Т. Полянская

Редактор Л. Пчолинская Техред Л.Сердюкова Корректор С. Шекмар

Заказ 524 Тираж 357 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101