Способ определения концентрации антибиотика

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и медицине и может быть использовано при определении концентрации антибиотиков. Цель изобретения - повышение чувствительности способа и его ускорение. Для осуществления способа используют в качестве тест-культуры бактерии, обладающие хемотаксисом, например В. subtills, E. coll и другие. Разведения антибиотика разливают в пробирки или кюветы, под слой антибиотика наслаивают суспензию тест-культуры и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч (оптимальное время для стандартизации способа). Затем определяют смещение фронта тест-культуры от границы с разведением антибиотика и по его величине определяют концентрацию антибиотика. Определение проводят по сравнению с контролем на основании калибровочной кривой . 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧECКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 0 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4472547/13 (22) 07.08,88 (46) 23.05.91, Бюл. N. 19 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) Л.Ю,Завальский (53) 615.779,93(088. 8) (56) Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках, — M.; Высшая школа, 1986, 154-157, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ KOHLIEHTРАЦИИ АНТИБИОТИКА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и медицине и может быть использовано при определении концентрации антибиотиков. Цель изобретения — повышение чувствительности споИзобретение относится к микробиологической промышленности и медицине и может быть использовано при определении концентрации антибиотиков.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа и его ускорение, В основу способа положено подавление хемотаксической активности клеток антибиотиками. Регистрируемой величиной является расстояние, на которое смещается фронт тест-культуры бактерий. Присутствие в жидкости антибиотика тормозит процесс миграции бактериальной популяции, при этом, чем выше концентрация антибиотика, тем ниже скорость миграции.тактериальной полосы, Способ определения концентрации антибиотика тилозина с использованием в качестве тест-культуры штамма Bacillus,. SU 1650702 А1 соба и его ускорение. Для осуществления способа используют в качестве тест-культуры бактерии, обладающие хемотаксисом, например В, sub>ills, Е. coll и другие. Разведения антибиотика разливают в пробирки или кюветы, под слой антибиотика наслаивают суспенэию тест-культуры и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч (оптимальное время для стандартизации способа). Затем определяют смещение фронта тест-культуры от границы с разведением антибиотика и по его величине определяют концентрацию антибиотика.

Определение проводят по сравнению с контролем на основании калибровочной кривой. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

Sphaericu s — 1966 осуществляется следующим образом.

Для построения калибровочной кривой ряд одинаковых емкостей правильной формы заполняют физраствором, содержащим известные концентрации антибиотика, Размер стеклянных кювет равен 5х10х40 мм.

Затем на дно каждой иэ кювет с помощью микрошприца наслаивают по 100 мкл суспенэии вегетативных клеток тест-культуры при оптической плотности суспензии 0,3—

1,0и выдерживают при комнатной температуре.

Через 4 — 5 ч в кюветах наблюдают распределение клеток, образуется полоса бактерий, мигрирующая вверх. Замеряют расстояние, на которое сдвинулась бактериальная полоса в кюветах. В соответствии с измеренными значениями строят калибровочную кривую зависимости расстояния, 1650702 пройденного полосой, от концентрации антибиотика за контрольное время." . Искомую концентрацию тилозина определяют на построенной калибровочной зависимости смещения полосы бактерий 5

ВасИЬз Sphaericus — 1966 за контрольное время (4 ч). Для этого измеряют расстояние, на которое смещается полоса бактерий через 4 ч. 3а это время бактериальные полосы хорошо формируются и проходят расстоя- 10 ние порядка 10 мм, что удобно для измерения, Из этой точки на оси ординат проводят линию параллельно оси абсцисс до пересечения с графиком калибровочной кривой, из точки пересечения опускают перпендику- 15 ляр на ось абсцисс и по шкале концентраций находят искомое содержание тилозина в неизвестном растворе. В данном примере искомая концентрация тилозина равна

0,7 ед/мл. 20

Пример 2. Концентрацию тилозина можно определять и с использованием бактерий В. subtilis — 720. Все операции, их последовательность и количественное выражение аналогичны примеру.1. Концентра- 25 ция тилозина 0,7 ед/мл.

Пример 3. Измерение концентрации грамицидина С с использованием бактерий

В. thuringiensls — Z52 осуществляют аналогично примеру 1. Концентрация грамициди- 30 на 29 10 г/мл..

Пример 4. Концентрацию тетрациклина определяют в соответствии с примером 1, но используют бактерии Е, coll М-17 за 4ч. 35

Пример 5. Концентрацию стрептомицина определяют в соответствии с примером 1 с использованием бактерий Е. соИ

M-17 эа 4 ч.

Сравнительные данные по чувствитель- 40 ности определения концентраций антибиотиков приведены в таблице.

При этом точность определения аналогична известному способу (ошибка 10 ).

Способ может быть использован для определения концентрации антибиотика в культуральной жидкости. Перед определением концентрации антибиотик экстрагируют из культуральной жидкости, Например, в случае использования культуральной жидкости, содержащей тилозин, экстракцию проводят с помощью 0,2 н. раствора HCt. микробные клетки осаждают и определяют концентрацию тилозина в жидкой фракции.

Использование предлагаемого способа при сохранении точности определения позволяет повысить его чувствительность, а также ускорить определение с 18-24 до 4 ч и менее ч (4 ч выбрано для стандартизации способа, тогда как хемотаксис можно наблюдать уже через 5 мин после введения культуры под раствор антибиотика).

Формула изобретения

1. Способ определения концентрации антибиотика, включающий инкубирование раствора антибиотика с суспензией тесткультуры микроорганизмов с последующим учетом результатов в сравнении с контролем, о т л и ч а ю ц и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа и его ускорения, в качестве тест-культуры используют микроорганизмы, обладающие хемотаксисом, суспензию тест-культуры вводят под раствор антибиотика, после инкубирования фиксируют расстояние смещения фронта тест-культуры от границы микробных клеток с раствором антибиотика и по его величине определяют концентрацию антибиотика, 2, Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве тест-культуры микроорганизмов, обладающей хемотаксисом, используют штамм Bacillus Sphaericus 1966, Васйоз subtiiis 720, Bacillus thuringiens(s

Z52 или Escherichia coll M-17, 1650702

* В случае с тилозином используют навеску заводского препарата бацихилла (1 ед/мл соответствует 1 мкг/мл).

Составитель Г.Смирнова

Техред M.Ìîðãåíòàë — Корректор Т.Малец. Редактор Н.Гунько

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1584 Тираж 369 Подписн ое

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб„4/5